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RELATÓRIO DE AULAS PRÁTICAS: MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA – AULA 1 NOME: AMANDA PRISCILA DE LIMA GOMES MATRÍCULA:01318289 CURSO: FARMÁCIA POLO: ROBERTO FREIRE PROFESSOR: EDILSON JÚNIOR TEMA DE AULA: INTRODUÇÃO AO LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA RELATÓRIO: 1. Identificar os riscos em um laboratório de microbiologia e exemplifica-los; Resposta: Os laboratórios de ensino de microbiologia e parasitologia nas universidades brasileiras são ambientes onde geralmente se realizam atividades de ensino, pesquisa e extensão de forma isolada ou em conjunto. Dessa forma, no mesmo espaço, convivem pessoas, equipamentos, reagentes, soluções, agentes e amostras biológicas e os resíduos gerados nessas atividades. Nesse contexto, pode haver a exposição das pessoas que neles trabalham, estudam e transitam pelos diferentes riscos, sejam eles: biológicos, químicos, físicos, ergonômicos e de acidentes; também gerando agravos para os animais e para meio ambiente (BRASIL, 2006). Fonte: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103- 84782013000100016 2. Identificar os equipamentos de proteção individual (EPI’s) e as técnicas assépticas; Resposta: Em um laboratório, os técnicos e profissionais que entram em contato com os materiais estão passíveis de riscos de contaminações. Assim como os demais trabalhos, exigem ferramentas que eles precisam utilizar para que o manuseio não prejudique a saúde ou a integridade física. A única forma de evitar ou reduzir os riscos é com a utilização dos Equipamentos de Proteção Individual (EPI’s) que são eles: luvas, tocas, jaleco, máscara. Assepsia É o processo pelo qual se consegue afastar os germes patogênicos de determinado local ou objeto. E as técnicas assépticas na microbiologia se referem a todo método usado para esterilizar e manter a esterilidade de um objeto ou de um lugar. No caso do laboratório, as técnicas de assepsia podem ser encontradas no ato de lavar as mãos antes e depois de qualquer procedimento, manter as bancadas organizadas a cada procedimento, manipular colônias de bactérias, fluídos ou qualquer tipo de material que possa estar contaminado com o uso dos EPI’s, etc. Fonte: https://www.news-medical.net/life-sciences/Aseptic-Techniques-in-Microbiology- (Portuguese).aspx 3. Identificar as principais funções dos itens listados abaixo laboratório de microbiologia: Vidrarias Função Placa de petri Peça de vidro ou de plástico, utilizada principalmente para desenvolver cultura bacteriana, e realizar reacções em escala reduzida. Balão volumétrico É um recipiente utilizado em laboratórios científicos para preparação de líquidos em volumes muito precisos e exatos Tudo de Durham Servem para captar o gás formado em uma fermentação. http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782013000100016 http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782013000100016 https://www.news-medical.net/life-sciences/Aseptic-Techniques-in-Microbiology-(Portuguese).aspx https://www.news-medical.net/life-sciences/Aseptic-Techniques-in-Microbiology-(Portuguese).aspx Becker Serve para fazer reações entre soluções, dissolver substâncias sólidas, efetuar reações de precipitação e aquecer líquidos. Pipeta A pipeta volumétrica é um instrumento em vidro que permite a medição e transferência rigorosa de volumes de líquidos. Lâmina de microscopia Ela serve como uma barreira entre a lente do microscópio e o material biológico que deve ser analisado, protegendo dessa forma a ambos. Tubo de ensaio Tubo de ensaio é um recipiente usado para efetuar reações químicas de pequena escala com poucos reagentes de cada vez. Equipamentos Função Microscópio fornecer imagens ampliadas de objetos difíceis de ver a olho nú. Estufa de secagem A geralmente é usada em laboratórios para secagem de vidrarias e utensílios, esterilização ou para uso geral. Estufa de esterilização A função deste equipamento é fazer a esterilização e secagem de materiais cirúrgicos, médicos e odontológicos, por meio do calor seco. pHmetro O pHmetro ou medidor de pH é um aparelho usado para medição de pH. Constituído basicamente por um eletrodo e um circuito potenciômetro Balança analítica A Balança Semi Analítica se destina à análise de determinada grandeza sob certas condições ambientais, Autoclave A autoclave para laboratório tem por finalidade esterilizar materiais através do vapor sob pressão. Este equipamento para laboratório Lamparina é um utensílio destinado a efetuar o aquecimento de sistemas de pequenas dimensões que requerem pouco calor Estufa de incubação e laboratório é destinada a auxiliar a reprodução ou o crescimento de microrganismos e também para amostras orgânicas Alça de Drigalski Indicado para espalhar suspensões de microrganismos na Placa de Petri contendo meio de cultura sólido. Meios de cultura e reagentes Função / utilização Agar consiste em uma mistura heterogênea de dois polissacarídeos, agarose e agaropectina, funciona como o carboidrato estrutural na parede das células. Peptona é um tipo de substrato, que pode ser digerido pela enzima tripsina, secretada pelo pâncreas. É uma proteína semi-digerida que serve como fonte de nitrogênio e carbono. Dextrose A dextrose é uma fonte de glicose elaborada a partir do amido de milho. Azul de metileno é usado como um corante bacteriológico e como indicador. Cloreto de sódio para manter o balanço osmótico e o ágar Etanol Para realizar assepsia e diluir corantes. Materiais Função Papel filtro Filtrar elementos solúveis e insolúveis Algodão Usado para limpar ou absorver algum resquício de líquido https://pt.wikipedia.org/wiki/Polissacar%C3%ADdeos https://pt.wikipedia.org/wiki/Carboidrato https://pt.wikipedia.org/wiki/Parede_celular Pinça Pegar pequenos objetos Bisturi Retirar o material coletado com mais eficiência Swab Realizar coleta TEMA DE AULA: PREPARAÇÃO DE MEIOS DE CULTURA RELATÓRIO 1. Definir meios de cultura: Resposta: Os meios de cultura são insumos preparados em laboratórios que fornecem os nutrientes para o crescimento e desenvolvimento de microrganismos (como bactérias e fungos) fora do seu habitat natural. Existe uma variedade enorme destes meios e são utilizados para análises laboratoriais e estudos científicos em diversas áreas, principalmente em alimentos, água, cosméticos e microbiologia clínica. Além dos nutrientes e condições ambientais favoráveis para esse cultivo, muitos critérios devem ser considerados. Diferentes microrganismos possuem diferentes necessidades, por isso o meio de cultura é adaptado para satisfazer essas necessidades, utilizando nutrientes específicos dependendo do microrganismo de interesse. Além desses fatores, deve ser levado em conta o pH e a quantidade de oxigênio ou mesmo a sua ausência. Fonte: https://kasvi.com.br/qual-a-finalidade-de-meios-de-cultura-em-microbiologia/ 2. Classificar os meios de cultura quando: o estado físico, composição e a finalidade: Resposta: Os meios de cultura em microbiologia para o cultivo de bactérias são conhecidos como meios artificiais ou meios sintéticos, pois não ocorrem naturalmente, ou seja, eles são preparados no laboratório. Existem várias maneiras de se classificar os meios de cultura: ✓ Estado físico (solido, semissólido, liquido). Sólidos, quando contém agentes solidificantes, principalmente ágar (cerca de 1 a 2,0%); semissólidos, quando a quantidade de ágar e ou gelatina é de 0,075 a 0,5%, dando uma consistência intermediária, de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tensões variadas de oxigênio ou a verificação da motilidade e também para conservação de culturas; e líquidos, sem agentes solidificantes, apresentando-se como um caldo, utilizados para ativação das culturas, repiques de microrganismos, provas bioquímicas, dentre outros. ✓ Procedência dos constituintes (naturais/complexos,artificiais). Naturais ou complexos, quando usa ingredientes com composição química não definida, tais como extratos de vegetais (malte, tomate, amido de tubérculos, peptona de soja, etc.) de animais (carne, cérebro, fígado, caseína, etc.) e de microrganismos (levedura) e artificiais, sintéticos ou ainda quimicamente definidos quando a composição química é conhecida (usados para trabalhos de pesquisa) e seus componentes servem para suprir as exigências nutritivas dos microrganismos, em fontes de carbono, nitrogênio, vitaminas, energia, sais minerais, dentre outros, quando então são conhecidas as necessidades nutricionais específicas. ✓ Composição química (simples/básicos, especiais). https://kasvi.com.br/qual-a-finalidade-de-meios-de-cultura-em-microbiologia/ Simples/básicos são aqueles que permitem o crescimento bacteriano, sem satisfazer, contudo, nenhuma exigência em especial (caldo e ágar simples). Especiais quando cumprem com as exigências vitais de determinados microrganismos, como meio de infusão de cérebro e coração, ágar suco de tomate, ágar sangue, meio de Loeffler (com soro bovino), ágar chocolate (agar simples fundido, adicionado de sangue e aquecido a 80°C), Meio de Tarozzi (com fragmento de fígado - para anaeróbios), Meio de Lowenstein, meios Shahidi Ferguson Perfringens (SFP), Triptos e Sulfito Ciclosserina (TSC), Baird- Parker (com gema de ovo) (meios ricos ou meios enriquecidos com as substâncias citadas), etc. ✓ Finalidade bacteriológica (nove subdivisões gerais) 1. Meios de pré-enriquecimento - são aqueles que permitem a dessensibilização de microrganismos injuriados, i.e., para amostras que sofreram algum tipo de tratamento (térmico ou químico). Ex. Água peptonada, caldo lactosado (isolamento de salmonelas de leite em pó). 2. Meios de Enriquecimento - quando proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de microrganismos presentes usualmente em baixos números ou de crescimento lento, bem como microrganismos exigentes e fastidiosos. Esses meios têm a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que também podem inibir o crescimento de outros. Ex. caldo tetrationato e selenito-cistina para cultivo de salmonelas (líquidos), caldo tioglicolato para Clostridium perfringens. 3. Diferenciais - quando contém substâncias que permitem estabelecer diferenças entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Teague ou Eosina Azul de Metileno (diferencial para coliformes), Ágar MacConkey para a diferenciação de enterobactérias, Ágar sangue, ágar Baird-Parker para isolamento e diferenciação de cocos Gram positivos (sólidos). 4. Seletivos - os que contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros. Exemplo: meios com telurito de potássio (para isolamento de Corynebacterium diphtheriae), ágar Salmonella-Shigella (SS) e ágar MacConkey, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento seletivo de Salmonella, meios com 7,5% de cloreto de sódio, meio Baird- Parker, para isolamento de Staphylococcus aureus, meios com antibióticos para isolamento de diversos microrganismos (TSC, SFP, meio de Blaser, meio de Skirrow, etc.). A maioria deles é também diferencial, permitindo diferenciar as colônias (sólidos) dos microrganismos. 5. Meios de triagem - meios que avaliam determinadas atividades metabólicas permitindo caracterização e identificação perfunctória ou presuntiva de muitos microrganismos (ágar tríplice açúcar e ferro, meio Instituto Adolfo Lutz, ureia, etc.); 6. Identificação - prestam-se para a realização de provas bioquímicas e verificação de funções fisiológicas de organismos submetidos a identificação (meios Oxidação/Fermentação, Ágar Citrato, Caldo nitrato, meio semi-sólido, caldo triptofano, meio de Sulfito Indol Motilidade, etc.; 7. Dosagem - empregados nas determinações de vitaminas, antibióticos e aminoácidos; 8. Contagem - empregados para a determinação quantitativa da população microbiana (Ágar de Contagem em Placas, TSC, Ágar Batata Dextrose, Ágar Baird-Parker, etc.); 9. Estocagem ou manutenção - utilizados para conservação de microrganismos no laboratório, garantem a viabilidade de microrganismos (Ágar Sabouraud Meios com leite, Ágar suco de tomate, Ágar sangue, Ágar Simples, meio semi-sólido, etc.)
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