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Fisiologia e Crescimento Bacteriano Composição química de uma célula procariótica As células procarióticas são compostas por água, macromoléculas, outros compostos orgânicos e íons. Dentro de uma célula bacteriana ocorrem reações químicas catalisadas por enzimas. Metabolismo - conjunto de todas as reações químicas Anabolismo – conjunto de processos biossintéticos que requerem energia e que forma os componentes celulares a partir de moléculas menores: os nutrientes. Catabolismo - conjunto de processos de degradação de moléculas e nutrientes que liberam energia. As reações catabólicas fornecem energia para as reações anabólicas ou biossintéticas, anabólicas e catabólicas é Acoplamento das reações obtido através do ATP Nutrição dos microrganismos Os microrganismos necessitam de um ambiente propício com todos os constituintes físicos e químicos necessários para seu crescimento. As substâncias ou elementos retirados do ambiente são utilizados como blocos para a construção da célula. NUTRIENTES Macronutrientes Micronutrientes Fatores de crescimento Nutrientes – necessários em grandes quantidades Macronutrientes Funções Carbono (Compostos orgânicos, CO2) Constituintes de carboidratos, lipídeos, proteínas e ácidos nucleicos. Oxigênio (O2, H2O, comp. orgânicos) Nitrogênio (NH4, NO3, N2, comp. org.) Hidrogênio (H2, H2O, comp. Orgânicos) Fósforo (PO4) Enxofre (SO4, HS, S, comp. enxofre) Potássio (K+) Atividade enzimática, cofator para várias enzimas Cálcio (Ca2+) Cofator de enzimas, componente do endósporo Magnésio (Mg2+) Cofator de enzimas, estabiliza ribossomos e membranas Ferro (Fe2+/Fe3+) Constituição de citocromos e proteínas ferro enxofre (transportadores de elétrons), cofator de enzimas. Nutrientes – requeridos em pequenas quantidades Fatores de crescimento Compostos orgânicos requeridos em pequenas quantidades e somente por algumas bactérias que não podem sintetizá-los. Muitos microrganismos são capazes de sintetizá-los. na composição das células ou de precursores dos Estes compostos entram constituintes celulares. Três grupos principais Ácidos graxos insaturados, colesterol, poliaminas e colinas. Aminoácidos Purinas e pirimidinas Vitaminas Vitaminas requeridas pelos microrganismos e suas funções Processo de nutrição em procariotos Gram positivos X Gram negativos Gram positivas Gram negativas Processo de nutrição em procariotos 1) Gram positivas Sintetizam exoenzimas que são liberadas no meio, clivando os nutrientes, que são captados por proteínas transportadoras. 2) Gram negativas Apresentam grande número de porinas associadas à membrana externa que permitem a passagem de moléculas hidrofílicas, de baixa massa molecular. No espaço periplasmático são encontrados proteases, fosfatases, lipases, nucleases e enzimas de degradacão de carboidratos. Fontes de carbono e energia para o crescimento bacteriano As bactérias, de acordo com a fonte de carbono e de energia que utilizam, podem ser classificadas em: Heterotróficos – microrganismos que utilizam composto orgânico como fonte de carbono. Ex: carboidratos. Autotróficos – Microrganismos que utilizam composto inorgânico como fonte de carbono. Ex: CO2 Fototróficos – microrganismos que utilizam a luz como fonte de energia. Quimiotróficos – microrganismos que utilizam compostos químicos (orgânicos ou inorgânicos) como fonte de energia. Formas de obtenção de energia Respiração aeróbia Respiração anaeróbia Fermentação Conceitos básicos Glicólise: oxidação da glicose a ácido pirúvico com produção de ATP e energia contida em NADH. Ciclo de Krebs: oxidação de um derivado do ácido pirúvico (acetil coenzima A) a dióxido de carbono, com produção de ATP, energia contida em NADH e FADH2. Cadeia de transporte de elétrons: NADH e FADH2 são oxidados. Cascata de reações de oxirredução envolvendo uma série de transportadores de elétrons. A energia dessas reações é utilizada para gerar grande quantidade de ATP. Glicólise Glicólise Oxalacetato Isocitrato Malato -cetoglutarato NAD+ NADH + H+ + CO2 Succinil CoA CoA NAD+ NADH + H+ + CO2 CoA Succinato ADP + Pi ATP + CoA Fumarato FAD+ FADH 2 NAD+ NADH + H+ Piruvato Acetil CoA CoA NAD+ + CoA NADH + H+ + CO2 Citrato CoA Ciclo de krebs Respiração a) Respiração aeróbia Compostos orgânicos são completamente degradados. O2 é o aceptor final dos elétrons. b) Respiração anaeróbia: processo no qual os compostos orgânicos são completamente degradados, e uma molécula diferente do O2 é o aceptor final dos elétrons (carbonato, sulfato, nitrato, fumarato). A quantidade de ATP gerada na respiração anaeróbia varia de acordo com o microrganismo e a via. Tem rendimento energético menor do que a respiração aeróbia. Não requer o uso do ciclo de Krebs ou cadeia de transporte de elétrons. Utiliza uma molécula orgânica como aceptor final de elétrons. Não requer oxigênio, mas algumas vezes pode ocorrer na presença deste. Produz somente pequenas quantidades de ATP (grande parte da energia original dos compostos catabolizados permanece ainda nas ligações químicas dos compostos orgânicos formados). Fermentação: processo no qual os compostos orgânicos são parcialmente degradados. Organismo Produtos finais da fermentação Streptococcus, Lactobacillus, Bacillus Ácido láctico Saccharomyces Etanol e CO2 Propionibacterium Ác. propiônico, ác. acético, CO2, H2 Clostridium Ác. butírico, butanol, acetona, álcool isopropílico e CO2 Escherichia, Salmonella Etanol, ác. láctico, ác. succínico, ác. acético, CO2, H2 Enterobacter Etanol, ác. láctico, ác. fórmico, butanodiol, acetoína, CO2, H2 Produtos finais de várias fermentações microbianas a partir do piruvato Crescimento microbiano – refere-se ao aumento do número e não do tamanho das células. Os microrganismos em crescimento estão, na verdade, aumentando o seu número e se acumulando em colônias COLÔNIAS => grupos de células => visualização sem utilização de microscópio. Crescimento microbiano Condições necessárias para o crescimento microbiano Físico-químicos (ambientais) Temperatura pH Pressão osmótica O2 Químicos Água Macronutrientes Micronutrientes Fatores de crescimento Fatores ambientais que interferem no crescimento microbiano Temperatura pH Oxigênio Pressão osmótica Efeito da temperatura no crescimento microbiano Classificação dos microrganismos quanto à temperatura de crescimento Efeito do pH no crescimento microbiano A maioria das bactérias cresce melhor dentro de variações pequenas de pH, sempre perto da neutralidade, entre pH 6,5 e 7,5. Oxigênio Componente universal das células. Formas reativas (tóxicas) de oxigênio Mecanismo de detoxificação Classificação quanto à exigência de oxigênio Aeróbios obrigatórios – exigem a presença de oxigênio. Anaeróbios obrigatórios – não toleram a presença de oxigênio. Anaeróbios facultativos – crescem na presença ou ausência de oxigênio. Microaerófilos – exigem a presença de oxigênio em pequena quantidade, não toleram as pressões normais de oxigênio atmosférico. Pressão Osmótica Halotolerantes: toleram altas concentrações de sais-10% NaCl Halofílicos: requerem altos níveis de NaCl (Vibrio cholerae). Ciclo celular bacteriano As bactérias se multiplicam por fissão binária, um processo que ocorre devido à formação de septos, que se dirigem da superfície para o interior da célula, dividindo a bactéria em duas células filhas. A fissão é precedida pela duplicação do DNA, que se processa de modo semi-conservativo, e cada célula filha recebe uma cópia do cromossomo da célula-mãe. O período da divisão celular depende do tempo de geração de cada bactéria. Tempo de geração: tempo necessário para uma célula se dividir em duas ->Invaginação da membrana citoplasmática, paredecelular e em gram negativa da mb externa também. -> DNA completo, todas as macromoléculas, monômeros e íons inorgânicos Quando uma bactéria é semeada em um meio apropriado, nas condições apropriadas, o seu crescimento segue uma curva definida e característica: A – Fase Lag: pouca divisão celular, os microrganismos estão se adaptando ao meio em que estão crescendo. As células aumentam de tamanho, mas não em número. B – Fase exponencial (log): crescimento exponencial, divisões celulares sucessivas, grande atividade metabólica. C – Fase estacionária: decréscimo na taxa de divisão celular, onde a velocidade de crescimento = velocidade de morte. D – Fase de declínio ou morte: condições impróprias para o crescimento, meio deficiente em nutrientes e rico em toxinas, onde as células mortas excedem o número de células vivas. Curva de crescimento bacteriano 37 espirilo Formas e arranjos das células bacterianas 38 39 40 Estrutura da célula bacteriana I – Apêndices Flagelo Facultativo Composição química – flagelina (PTN) Função – mobilidade Pili ou fimbrias Geralmente nas Gram negativas Numerosos Podem estar ou não presentes Pili somático – menor e mais finos Composição química – pilina (PTN) Função – Somático – aderência Sexual – Grande importância no transporte de genes Número variável 41 II – Envoltório celular Cápsula Envoltório mais externo (nem todas as bactérias possuem) Composição química – polissacarídica (homo ou heteropolissacarídica), polipeptídica... Função – retenção de água, material de reserva, proteção contra fagocitose (aumenta a virulência), aderência. 42 Composição Gram negativa Gram positiva peptidioglicana - + Lipopolissacarideo + - Ác. Teicoico - + Lipídios + - Proteínas + - Sensibilidade a penicilina _ + III – PAREDE BACTERIANA 43 44 MEMBRANA CITOPLASMÁTICA Dupla camada de lipídios – fosfolipídios Existem apenas PTNs periféricas Composição química – PTN, lipídio e carboidratos Procariótica não possui esterol. A Eucariótica possui Função Respiração Responsável pela replicação de DNA e RNA Transporte 45 ESTRUTURAS INTERNAS Mesossomos Invaginações formadas a partir do citoplasma. Mais encontradas nas G+ (bacillus) Composição química – PTNs e Lipídios Funções: Mesossomas septais Orienta o DNA na divisão celular Segregação dos cromossomos Mesossomas laterais Segregação de enzimas hidrolíticas e de PTNs envolvidas com os ribossomos. Envolvido na formação dos esporos. Ribossomos Composição química – RNA, PTNs Estrutura: 2 subunidade 30s e 50s (OBS: eucariontes subunidade 40s e 60s). Funções: Biossíntese de PTNs Formam cadeia de RNAm Encontram-se livre no citoplasma ou associadas a Membrana citoplasmática ou mesossomos INCLUSÕES CITOPLASMATICAS Grânulos de Lipídios – aparecem na célula como grãos que não se coram Grânulos de polissacarídeos Grânulos de polimetafosfato – serve como reserva de fósforo para a biossíntese e elementos que servem de fosfato) Grânulos de enxofre (S) – Bactérias sulfurosas (produção de energia) 48 1 4 3 2 Core Membrana Córtex Capa VII- ESPOROS São ovais ou esféricos Forma-se sob condições adversas (principalmente com o esgotamento de compostos C e N) Core: DNA, ribossomo, enzimas, dipicolinato de cálcio (esse não aparece em células vegetativas), 3P glicerato (fornece energia para o esporo). Membrana: Lipoproteina Córtex: peptidioglicana Capa: PTN, muito rica em cistina e pontes S-S tornado a capa altamente rígida e impermeável. Exospório: PTN, Lipídio, açúcares (nem todo esporo possui Exospório) Função: resistência em condições ambientais adversas 50 DNA cromossômico DNA extra cromossômico Único, circular, fita dupla. Replicação semi-conservativa, bidirecional. Circular, fita dupla. Número variado de cópias. Replicação semi-conservativa Unidirecional ou bilateral. Plasmídios de gde tnho. –1 a 2 cópias / cél. Plasmídios de pque tnho – 10 a 30 cópias / cél. Material genético 51 Características fenotípicas condicionadas por genes plasmídicos Fertilidade Produção de antibióticos Resistência a íons de metais pesados Resistência a U.V Resistência a drogas Produção de enterotoxinas – Ex: E. coli Utilização de carboidratos Degradação de hidrocarbonetos 52 Plasmídios 53 * algumas espécies Procarioto Eucarioto Membrana nuclear ausente presente Mitocôndria ausente presente Cloroplastos ausente presente* Retículo endoplasmático ausente presente Complexo de Golgi ausente presente Vacúolos gasosos presente* ausente Correntes citoplasmáticas ausente presente* Endósporos resistentes ao calor presente* ausente Ácidos graxos insaturados na MP ausente presente Divisão celular por mitose ausente presente Forma do cromossomo circular linear Número de cromossomo um vários Ribossomos: localização dispersos ligados ao RE e dispersos Ribossomos: coeficiente de sedimentação 70S 80S Nucléolo ausente presente Reprodução assexuada sexuada/assexuada Tamanho da célula 0,2 - 2,0 µm >2,0 µm Utilização de substratos inorgânicos sim não Utilização de substratos orgânicos sim sim Fotossíntese cíclica sim não Fotossíntese acíclica sim sim Fixação de nitrogênio sim não Respiração aeróbia sim sim Respiração anaeróbica sim não Fermentação de açúcares sim sim* Fermentação de aminoácidos sim não
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