Anticorpos e Imunoglobulinas

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IMUNIDADE ADQUIRIDA (Anticorpos ou Imunoglobulinas)
O que são anticorpos ou imunoglobulinas?
· São moléculas com receptores específicos para o mesmo antígeno que estimulou a sua síntese, e apresentam a mesma estrutura básica: 
· Porção Fab (ligação de fragmento de antígeno): liga-se ao antígeno e varia segundo a especificidade de cada ly B.
· Porção Fc (fragmento cristalizável): interage com células, principalmente fagócitos, através de receptores Fc ou ativa o complemento.
 Composição anticorpos:
· Glicoproteínas
· Produzidos por linfócitos B e plasmócitos
· Forma solúvel
· Forma de membrana (receptor de célula B, BCR).
· Reconhece antígenos solúveis
AC são compostos de polipeptídios com regiões:
· Região variável (Fab)
· Região constante (Fc)
· Cadeias pesadas 
· Cadeias leves 
· Cadeia pesada 
 Duas cadeias polipeptídicas leves (L) e duas pesadas (H) idênticas:
Cadeias H (pesadas): existem 5 tipos, cada uma dando origem a uma classe de imunoglobulina (IGG, A, M, D, E);
Cadeia leve (L light)
Porção amino terminal: variabilidade de aminoácidos região variável, região hipervariável, onde se encontra o sítio combinatório, restante da cadeia é constante região constante (CH e CL) H e L ligadas através de pontes dissulfídicas, na região V e C aproximam os aminoácidos formando dobramentos chamados de domínios (ligações dissulfídicas – ligação SS intracadeia). Onde: c=constante e v=variável
Duas cadeias polipeptídicas leves e duas pesadas:
Região variável: Responsável pelo reconhecimento do antígeno.
Região constante: Interage com receptores de superfície celular.
 Funções:
· Neutralização de toxinas impedimento da invasão celular;
· Opsonização;
· Citotoxicidade mediada por anticorpo;
· Ativação de mastócitos; 
· Ativação do complemento;
· Inativação de toxinas e outros agentes químicos;
· Inativação de vírus;
· Lise de bactérias;
· Citotoxicidade;
· Transferência de imunidade para fetos (igg);
· Transferência de imunidade a lactantes (iga>igg);
· Fixação do complemento;
· Regulação da resposta imune;
· Participam de reações autoimunes e alérgicas.
Anticorpos – Classes de imunoglobulina: 
· Região constante: determina o tipo ou classe do anticorpo;
· Região variável: “chave-fechadura” específica para diferentes antígenos.
· IgG: Atravessam a placenta e conferem imunidade ao feto, à proporção de cada classe varia individualmente e pode ser controlada geneticamente, é capaz de ativar complemento, neutralizar toxinas, imobilizar bactérias e neutralizar vírus, possui 4 subclasses: IgG1 (70%), IgG2 (20%), IgG3 (8%) e IgG4 (2%), proporção de cada classe varia individualmente e pode ser controlada geneticamente, está presente aproximadamente entre 70% e 75. (Anticorpo de maior relevância nos processos inflamatórios). A subclasse igg3 fixa complemento com mais eficiência, peso molecular 160kd principal imunoglobulina sérica, meia vida de 21 dias, principal ig sintetizada na resposta secundária, neutraliza toxinas bacterianas e liga-se aos microrganismos para facilitar a fagocitose. (É a responsável pela memória imunológica).
· IGA: Existe na saliva, suor, lagrimas e leite materno. Há 2 subtipos: IgA1 e IgA2 estão presente entre 15% a 20% no nosso plasma, responsáveis pela defesa e imunidade das mucosas: oral, vagina, bexiga e outras não atravessa a placenta representa importante papel impedindo a penetração, no organismo de substâncias alergênicas e de partículas microbianas.
· IgE: Ligam-se aos basófilos e mastócitos e estimulam a libertação de histamina que pode desencadear reações alérgicas, sensibiliza as células de mucosa como a conjuntiva, a nasal e a brônquica, pelo fragmento Fc é que a IgE se fixa aos mastócitos teciduais e basófilos sanguíneos, para posteriormente, em contato com alérgeno, desencadear a liberação das substâncias farmacologicamente ativas responsáveis pelos fenômenos anafiláticos.
· IgD: Encontram-se essencialmente na superfície dos linfócitos B, funcionando como receptor de antígenos, IgD e IgM são os únicos isótopos expressos pela mesma célula, está presente aproximadamente entre 0.25% e 1% no nosso.
Plasma, não se conhece sua função específica, mas sabe-se que é receptor antigênico de célula B inativa.
· IgM: O facto de ser formado por 5 unidades torna-o muito eficaz no combate inicial aos microrganismos, está presente aproximadamente 5% a 10% no nosso plasma, meia vida de 5 dias, primeiro AC produzido, T-independente mais eficaz na ligação ao complemento, não passa para os tecidos, não atravessa a placenta, são sintetizados pelo feto após o 5 mês, por isso níveis elevados no feto significam e infecção congênita. Encontra-se principalmente sob forma de pentâmero (cinco monômeros), é a principal imunoglobulina da resposta primária aos antígenos; é a primeira classe ao elevar-se na fase aguda dos processos imunológicos, maturação do ly B, atuando como, receptor e interagindo com o antígeno, quanto ao controle da ativação ou e supressão do linfócito.
Como os anticorpos atuam? 
· Neutralização: Os anticorpos fixam-se sobre os vírus ou toxinas bacterianas impedindo-os de penetrar nas células, estes complexos podem ser depois destruídas por fagocitose. 
· Aglutinação: Os anticorpos ligam-se aos determinantes antigênicos formando complexos de grandes dimensões que são rapidamente fagocitados.
· Precipitação: Processo semelhante à aglutinação, mas com moléculas solúveis, como as toxinas, formando-se complexos insolúveis que são removidos fagocitose. 
· Ativação do sistema de complemento: O complexo anticorpo- antígeno ativa uma da proteína do sistema de complemento e desencadeia a reação em cascata que ativo todo o sistema conduzindo à estimulação de fagocitose, lise celular e reação inflamatória. 
· Estimulação da fagocitose: Os macrófagos possuem receptores que reconhecem os anticorpos (especialmente a IgG) ligados aos antígenos sendo estimulados a realizar a fagocitose. 
FASES DA INFECÇÃO CONFORME PERFIL SOROLÓGICO
1. IgM Reagente IgG NR: FASE AGUDA
2. IgM NR IgG Reagente: FASE CRÔNICA - Memória sorológica de resposta vacinal ou infecção tardia. 
3. IgM NR IgG NR: SEM INFECÇÃO - deficiência de soro conversão. Período de janela Imunológica.
4. IgM Reagente IgG Reagente IgM > IgG: fase aguda IgM < IgG: fase crônica: FASE DE INTERSEÇÃO - entre a fase aguda e fase crônica. Deve- se observar o título de anticorpos.
SWITCHING OU TROCA DE CLASSE
· Inicialmente linfócitos B expressam IgM (primeiro Ac numa resposta imune) durante uma resposta imune, ocorre à liberação de citocinas por células T que induzem a troca de isótopo para IgG, IgA ou IgE; recombinação somática na célula B.
ANTICORPOS MONOCLONAIS
· Soro - grande número de anticorpos capazes de se ligarem a Ag específicos = soro imune mensuráveis (diluições).
· Produção de Ac específico para um determinado epítopo = tecnologia dos anticorpos monoclonais. 
· Ac produzidos pelo mesmo clone de linfócito B – mesma especificidade.
PRODUÇÃO DE MAbs
· ETAPA 1 – IMUNIZAÇÃO 
· Imunógenos: proteínas, células, peptídeos antigênicos sintéticos ou um peptídeo pequeno ligado a uma proteína transportadora. 
· Adição de adjuvante.
· Selecionar o camundongo com melhor resposta imune
· Remover células do baço. 
· ETAPA 2: FUSÃO E SELEÇÃO
· Células de mieloma (de mesma espécie ou espécies diferentes) e linfócitos. 
· A fusão pode ocorrer de forma espontânea, mas com baixa frequência.
· Agentes fusogênicos: Vírus sendai, PEG (polietilonoglicol), Campo elétrico (eletrofusão, eletroporação).
· ETAPA 3: TRIAGEM 
· Hibridomas que produzem os anticorpos de especificidades adequadas. 
· ELISA
· WESTERN BLOT
· IMUNOFLORÊNCIA
· ETAPA 4: PRODUÇÃO DE ASCITE 
· Hibridoma cultivando em tumor ascíte
· Maior quantidade de anticorpo 
· Purificação 
· Diálise 
· ETAPA 5: CARACTERIZAÇÃO 
· Quantificação 
· Isotipagem 
· Reação com outros antígenos 
· Imunoprecipitação, ensaios imunoenzimáticos, imunofluorescência e cromatografias.
APLICAÇÕES DOS MAB
· Detecção e tratamento de câncer 
· Imunizaçãopassiva 
· Testes diagnósticos 
· Insumos laboratoriais