BACTÉRIAS MORFOLOGIA E REPRODUÇÃO - ADRIANO DE MOURA RODRIGUES

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ETEC DE TIQUATIRA
MICROBIOLOGIA – Lucas Munhoz Cabral
ESTUDO DIRIGIDO 1: BACTÉRIAS – MORFOLOGIA E REPRODUÇÃO
Nome: Adriano de Moura Rodrigues
Turma: A 3°QN
 Objetivos: 
1. Morfologia de bactérias: tipos e reprodução; 
2. Estruturas da célula bacteriana: tamanho, forma e principais estruturas; 
3. Técnica da coloração Gram e estratégias de identificação de bactérias.
Introdução: 
Indica-se a utilização, caso possível, do aplicativo “Bactérias 3D educativo RV – Mozaik Education” que se encontra nas lojas virtuais de aplicativos para celular, com download gratuito. 
	Também é sugerido o acesso, para simulação do procedimento de coloração Gram, ao seguinte link: http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/gramstain/gramstain/index.html
	Entretanto, para a resolução das presentes questões é indicado o acesso a outras referências, levantada por vocês após pesquisa em internet ou livros. Liste-as no final do documento. 
Procedimento: 
Suponha que você faça parte de um grupo de microbiologistas investigando amostras de iogurte, tendo como objetivo o teste da qualidade e segurança do alimento. 
A produção do iogurte envolve, necessariamente, o uso de organismos vivos, com especial relevância às bactérias das espécies Streptococcus termophilus e Lactobacillus delbrueckii, responsáveis pelo importante processo de fermentação, que garante a consistência, acidez e odor ao produto. 
	Nesse caso, é necessária a análise detalhada das principais características das bactérias, de modo que seja possível a qualidade da produção. 
1. A partir da análise com microscópio óptico, quais tipos de informação poderiam ser obtidas a respeito dessas espécies?
Streptococcus termophilus é uma bactéria Gram-positiva com formato esférico e costumam se agrupar em fileiras. Com presença de hemólises, se destacam 3 tipos:
- Alfa hemólise ocorre ao redor das colônias, normalmente apresenta aspecto esverdeado e levemente transparentes.
- Beta hemólise é mais agressiva, deixa aspecto mais transparente ao redor da colônia.
- Gram hemólise que é a ausência de hemólises.
Lactobacillus delbrueckii com formato de bastonete possuem fímbrias e flagelos. Geralmente não ficam agrupadas. Esses bacilos geralmente não são móveis, mas algumas espécies têm mobilidade para apresentar flagelos de perímetro. Eles são Gram-positivos, no entanto, se houver bactérias mortas, eles ficam vermelhos, dando uma imagem variável de Gram antes da coloração de Gram.
2. Há alguma relação entre o nome das espécies com seu formato? Quais formas você esperaria encontrar?
A palavra Lactobacillus vem de “lactis”, que significa leite, e “bacillus”, significa pequenos bacilos que de acordo com dicionário são tipos de bactérias cuja forma se assemelha a de um bastonete (pequeno bastão).
Streptococcus de acordo com o dicionário são bactérias que se apresentam ao microscópio reunidas em forma de cadeias, como as contas de um colar.
3. A fermentação e a posterior acidificação do iogurte, causada pelas bactérias, parte de um processo de obtenção de um carboidrato (a lactose) para seu uso no metabolismo. Quais aparatos das células bacterianas podem lhes ajudar na obtenção de nutrientes e geração de energia?
S. thermophilus é caracterizado por ser um facultativo anaeróbico. Isso significa que ele é capaz de gerar energia na forma de ATP, por respiração aeróbica com a presença de oxigênio. Na ausência de oxigênio, eles podem produzir ATP através da fermentação. S. thermophilus é uma bactéria acidofílica, homofermentadora. Portanto, quando adicionado ao leite, produz a rápida acidificação do meio pela fermentação da lactose, favorecendo a coagulação.
Os Lactobacillus executam fermentação lática, em que o produto final é o ácido lático. Para isso, eles utilizam como ponto de partida, a lactose, o açúcar do leite, que é desdobrado, por ação enzimática que ocorre fora das células bacterianas, em glicose e galactose. A seguir, os monossacarídeos entram nas células, onde ocorre a fermentação.
4. Como a energia obtida auxilia no processo de crescimento bacteriano (reprodução)?
Os Lactobacillus requerem carboidratos como fontes de carbono e energia. Também aminoácidos, vitaminas e nucleotídeos. O meio de cultura de Lactobacillus deve conter carboidratos fermentáveis, peptona, extrato de carne e extrato de levedura.
Parte rigorosa da produção do iogurte é a avaliação de outras bactérias que podem se proliferar no alimento e causar contaminação, como a Salmonella ou a E. coli. 
A fim de investigar possíveis contaminantes na amostra, o grupo sugeriu a realização da coloração Gram. Além disso, após uma breve pesquisa, vocês encontraram informações que diziam que as bactérias usadas na fabricação do iogurte são Gram positivas e que as contaminantes são Gram negativas. 
5. Com qual finalidade a técnica da coloração Gram poderia ser usada nesse caso?
Streptococcus termophilus e Lactobacillus delbrueckii são gram-positvas, ou seja, apresentam coloração violeta no teste de coloração Gram. Se houver bactérias mortas, eles ficam vermelhas, dando uma imagem variável de Gram antes da coloração de Gram.
Por sua vez, Salmonella ou a E. coli são Gram-negativas, apresentando coloração Gram vermelha, assim é possível determinar se há contaminantes nas culturas de Streptococcus termophilus e Lactobacillus delbrueckii e também no produto final.
6. Em qual estrutura da célula bacteriana a coloração Gram age?
	Soluções em ordem de aplicação
	Gram positivas
	Gram negativas
	1- Cristal violeta – CV
	Células coradas em violeta
	Células coradas em violeta
	 2- Solução de iodo (lugol) – I
	Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas
	Formação do complexo CV-I no interior das células, que permanecem violetas
	3- Álcool
	Desidratação das paredes celulares, diminuição da porosidade e da permeabilidade: o complexo CV-I não pode sair das células que permanecem violetas.
	Extração dos lipídios da parede celular, aumentando a porosidade: O complexo CV-I é removido das células
	4- Safranina
	As células não são afetadas, permanecendo violetas.
	As células tomam o corante, tornando-se vermelhas.
7. Quais são os principais passos da coloração Gram?
· Confeccionar o esfregaço;
· Corar com violeta de cristal por 60 segundos;
· Lavar com esguicho de água destilada;
· Cobrir com Iodo de Gram ou Lugol por 60 segundos;
· Lavar com esguicho de água destilada;
· Descorar com álcool a 95%, ou acetona, 10-20 segundos;
· Lavar com esguicho de água destilada;
· Corar com safranina por 60 segundos
· Lavar com água destilada, secar e observar ao microscópio.
8. Qual é a diferença entre bactérias Gram positivas e Gram negativas?
As bactérias Gram-positivas são aquelas que obtêm uma coloração violeta ou azul escura através da técnica de Gram. São o oposto das bactérias Gram-negativas, que são incapazes de fixar a violeta de genciana, retendo em seu lugar o corante de contraste (safranina ou fucsina) que lhes dá a tonalidade vermelha ou rosa.
Após a aplicação da técnica da coloração Gram, vocês obtiveram os seguintes resultados:Amostra 3
Amostra 2
 Amostra 1
 
9. A quais conclusões é possível chegar após a análise de cada uma das amostras?
Amostra 1: em violeta devido ao formato de bastonete, certamente são Lactobacillus, também em violeta é possível identificar bactérias esféricas agrupadas em fileiras que certamente são Streptococcus. A imagem apresenta bactérias Gram-positivas (violeta) e Gram-negativas (vermelha). As bactérias vermelhas podem ser Lactobacillus mortos, Salmonella e/ou E. coli (que também são em formato de bastonete).
Amostra 2: apresentam somente bactérias Gram-positivas (violetas)
Amostra 3: apresentam bactérias Gram-positivas (violeta) e Gram-negativas (vermelha). As bactérias vermelhas podem ser Lactobacillus mortos, Salmonella e/ou E. coli.
Referências usadas: 
https://maestrovirtuale.com/streptococcus-thermophilus-caracteristicas-morfologia/
Bactérias 3D educativo RV – Mozaik Education
https://www.dicio.com.br/bacilo/
https://maestrovirtuale.com/lactobacillus-caracteristicas-morfologia-beneficios/https://www.sobiologia.com.br/conteudos/bioquimica/bioquimica4.php
http://learn.chm.msu.edu/vibl/content/gramstain/gramstain/index.html
https://www.dicio.com.br/estreptococos/
http://www.provida.ind.br/site/index.php/bacterias/bacterias/122-tecnica-de-gram.html
https://www.portalsaofrancisco.com.br/biologia/coloracao-de-gram
https://mundoeducacao.uol.com.br/doencas/salmonelose.htm
https://www.queijosnobrasil.com.br/portal/tudo-sobre-iogurte/176-flora-iogurte-lactobacilos