RESPOSTAS Estudo Dirigido de Microbiologia Veterinária

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Estudo Dirigido de Microbiologia Veterinária
1-Em um laboratório de microbiologia quais as principais normas de biossegurança que devem ser seguidas?
Avaliar os possíveis riscos. Evitar a contaminação e a disseminação de possíveis patógenos. Evitar qualquer risco para seres humanos e animais. Possuir um plano de emergência.
2-Cite 3 exemplos de riscos químicos ,físicos e biológicos presentes em um laboratório.
Químicos: Resíduos. Substâncias explosivas. Materiais inflamáveis – éter. Substâncias corrosivas - ácido clorídrico. Sustâncias radiológicas – radioisótopos. Carcinógenos – brometo de etídio.
Físicos: Incêndio. Equipamento que gera calor ou chama. Equipamentos de baixas temperaturas. Radiações UV – transluminador, capela de fluxo laminar.
Biológicos: Patógenos
3-Quais as principais diferenças entre as bactérias Gram + Gram -?
Gram + : constituída por uma camada espesssa de peptideoglicanos, que está intimamente ligada à membrana citoplasmática. Possui ácidos teicóicos na parede (confere especificidade , identificação das espécies). Possui também o ácido lipoteicóico (atravessara camada de peptideoglicana). Suas toxinas estão presentes no citoplasma celular CONFERIR. Se cora de roxo
Gram -: constituída por uma ou algumas camadas de peptideoglicana (fina e frágil). Lipoproteínas ligam a parede à membrana plasmática. Possui espaço periplasmático – entre membrana externa e membrana citoplasmática, onde há concentração de enzimas de degradação e proteínas utilizadas para transporte. Membrana externa: fuga da fagocitose e do sistema de complemento; barreira contra alguns antibióticos, enzimas detergentes. Tem lipoproteínas, lipopolissacarídeos (LPS - atuam como antígenos e são úteis para diferenciar espécies bacterianas), fosfolipídeos, porinas Canais proteicos - transporte de substâncias; confere a permeabilidade da parede celular; permite a passagem de água e solutos hidrofílicos de baixo peso molecular. Toxina (tóxica quando presente no sangue ou trato gastrointestinal). Se cora de rosa
4-Quanto à resistência ao meio ambiente e produtos, existem diferenças entre as G+ e G-. Escrevam quais são essas diferenças.
Antimicrobianos que atuam na quebra da ligação B1 4 não são eficientes para bactérias Gram - 
5-Explique como é feita a coloração de GRAM.
O método da coloração de Gram é baseado na capacidade das paredes celulares de bactérias gram-positivas de reterem o corante cristal violeta no citoplasma durante um tratamento com etanol-acetona enquanto que as paredes celulares de bactérias gram-negativas não o fazem.
Coramos a lâmina com cristal violeta, seguido de tratamento com um fixador, o iodo. Tanto bactérias gram-positivas quanto gram-negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador, adquirindo uma coloração violeta devido à formação de um complexo cristal violeta-iodo, insolúvel, em seus citoplasmas. Segue-se um tratamento com um solvente orgânico, o etanol-acetona. O solvente dissolve a porção lipídica das membranas externas das bactérias gram-negativas e o complexo cristal violeta-iodo é removido, descorando as células. Por outro lado, o solvente desidrata as espessas paredes celulares das bactérias gram-positivas e provoca a contração dos poros do peptidoglicano, tornando-as impermeáveis ao complexo; o corante primário é retido e as células permanecem coradas. Em seguida, a amostra é tratada com um corante secundário, a fucsina básica. 
As bactérias gram-positivas são coradas em violeta escuro e as gram-negativas em vermelho ou rosa escuro.
6-Quais são os postulados de KOCH?
1 - Organismos presentes em animais doentes e ausentes em sadios 
2 – Organismos devem ser cultivados em culturas 
3 – As culturas quando inoculadas em animais susceptíveis devem ser capazes de provocar sintomas característicos da doença 
4 – O organismo deve ser isolado a partir de animais experimentais e novamente cultivado, apresentando as mesmas características do organismo originalmente isolado
7-Quais são os meios de cultivo para microrganismos? Quais as características de cada um?
· Definidos: meios com composição conhecida
· Complexos: meios com componente proteico como fonte de energia (C, N, S)
· Seletivos: crescimento de um microrganismo especifico associado com condições de pouca sanidade.
· Diferencial: facilita a identificação do microrganismo
· Seletivo + diferencial: permite a diferenciação e o crescimento das bactérias de interesse.
· Enriquecidos: para bactérias presentes em pequeno número
8-Cite as fases de crescimento populacional, explicando o que acontece em cada uma.
1- Lag: Adaptação. Quando ocorre: população microbiana é inoculada em 1 meio novo, inoculo de origem for antigo, células sofreram algum tipo de dano, células são transferidas de um meio rico para um pobre. Tempo- varia de acordo com o histórico e condições da cultura.
2- Log: Divisão, crescimento, alta atividade metabólica. Células utilizadas para estudos, Influencia - condições ambientais (temperatura, composição do meio) e características genéticas do microrganismo.
3- Estacionária: Morte celular = número de células novas. Limites ao crescimento indefinidos – consumo de um nutriente essencial, presença de um algum produto de excreção inibitório, Algumas células se dividem e outras morrem.
4- Morte ou de declínio: lise celular, Número de células mortas é maior que células vivas
9-Cite 4 fatores de virulência
1- Proteínas de membrana: Adesão, Invasão, Colonização e Componentes de superfície. 
2- Cápsula. 
3- Proteínas secretadas: Inibidores do sistema imune, 
4- Toxinas e Transportadores de toxinas. 
5- Componentes de membrana e parede celular. 
6- Outros: Biofilmes, Aquisição de Fe e Sistema de dois componentes.
10-Com relação a sua temperatura ótima para suas reações metabólicas e o seu crescimento , como os microrganismos podem ser classificados?
1- Psicrófilos – baixas temperaturas : -10ºC – 15ºC Pollaromonas vacuolata 
2- Mesófilos – temperaturas medianas : 8ºC - 48ºC Escherichia coli 
3- Termófilos – altas temperaturas : 40ºC – 68ºC Bacillus stearothermophilus 
4- Hipertermófilos – temperaturas muito elevadas : 64ºC - 98ºC Thermococcus celer 90ºC - 115ºC – Pyrolobus fumarii
11-Com relação ao PH e o efeito osmótico como os microrganismos podem ser classificados?
1- Acidófilos – pH baixo; fungos são mais tolerantes ao pH baixo componente mais crítico é estabilidade de membrana citoplasmática 
2- Alcalifílicos – pH alto, ambientes muito básicos - lagos ricos em carbonato de cálcio e em solos interesse industrial – produzem enzimas hidrolíticas (proteases e lipases) pH interno – sempre alcalino
1 Halotolerantes
2 Halófilo
3 Halófilo extremo
12-Cite e explique 3 fatores químicos necessários para o crescimento dos microrganismos.
Oxigênio: 
Aeróbias obrigatórias fazem respiração aeróbia apenas (ex: microrganismos da pele); aeróbias facultativas fazem respiração aeróbia, anaeróbia, fermentação (ex: bact. do intestino grosso de humanos)
Microaerófilas: necessitam de pouca quantidade de oxigênio, fazem respiração aeróbia (ex.: bact. água de solos)
Anaeróbios obrigatórios: fazem fermentação ou respiração anaeróbia, para elas o oxigênio é letal ou nocivo (ex.: bact. de esgoto, sedimentos de lagos); anaeróbios aerotolerantes fazem fermentação (ex.: bact. do trato respiratório superior)
13-O que é um Operon?
É uma unidade de controle de expressão gênica. Mantém a produção constante de proteínas e compostos constituintes do microrganismo e os não constitutivos (como fatores de virulência, vias de metabolização) podem ser induzidos ou reprimidos. O mecanismo de ação dele é a inibição do RNA mensageiro.
14-Explique os processos de Conjugação, transformação e transdução.
Conjugação:
Transferência de genes (geralmente do plasmídeo) entre células de tipos opostos (podem ser da mesma espécie e até de gêneros diferentes). A bactéria F+ (que possui o gene de fertilidade) emite o Pili e se conecta à bactéria F- que vai receber uma cópia do gene de fertilidade e do plasmídeo, além de se tornar uma bactéria F+ (ter o genede fertilidade).
Transformação:
A bactéria capta genes que estão no ambiente (geralmente provenientes de outros microrganismos que morreram. É raro e geralmente defectiva.
Transdução: 
O DNA de uma célula doadora é transferido para uma célula receptora dentro de um vírus que infecta a bactéria receptora. O vírus usa as estruturas da bactéria para se multiplicar, e pode causar a morte da bactéria infectada, além de levar genes de uma bactéria que foi previamente infectada para outras bactérias causando recombinação nas bactérias. É raro e geralmente pode ser defectivo.
15-O que é um Plasmídeo?
Os plasmídeos são pequenos fragmentos de DNA circular separados do genoma, são capazes de replicação autônoma. Vários plasmídeos diferentes podem estar presentes em células bacterianas individuais. Cópias de plasmídeos podem ser transferidas de célula para célula durante a fissão binária ou a conjugação. O DNA plasmidial pode codificar características, como resistência a antibióticos e produção de exotoxinas.
16-Explique o que são Sideróforos e Quorum-sense.
Sideróforos: são componentes quelantes do ferro (capacidade de solubilizar e transportar ferro), que por sua vez tem papel chave na respiração 9componente essencial dos citocromos e das proteínas contendo ferro e enxofre)
Quorum-sense: mecanismo de comunicação entre bactérias, através da produção e difusão de pequenas moléculas químicas ou sinalizadoras, através de membranas bacterianas. Este sistema de linguagem permite a coordenação do comportamento bacteriano em relação ao meio ambiente, regulando a expressão de genes especializados, em resposta à densidade populacional, além da intervenção em diversos processos fisiológicos como a diferenciação celular e fluxo de nutrientes, a bioluminescência, indução de fatores de virulência em patógenos de plantas e animais, biossíntese de antibióticos e a formação de biofilmes
17- O que é e qual a função da Pili para as bactérias?
Estrutura presa na parede celular de várias bactérias que faz aderência entre bactérias para transferência de DNA (aumentando a variabilidade genética) entre bactérias de mesmos ou de diferentes gênero e espécie. Nessa troca de material pode haver troca de genes de resistência a medicamentos, virulência, rotas metabólicas alternativas.
18- Quais as características que um antibiótico deve possuir para ser considerado ideal?
1. Capacidade de inibir ou destruir muitas sp. de microrganismos patogênicos. 
2. Evitar formas de resistência de microrganismos causadores de doenças. 
3. Não produzir efeitos colaterais no hospedeiro.
4. Não prejudicar a microflora normal. 
5. Não ser inativado pelo pH estomacal e deve ser absorvido pelo trato gastrointestinal. 
6. Solubilidade nos fluídos corporais. 
7. Capacidade de alcançar concentrações suficientes nos tecidos ou no sangue para matar ou inibir os micro-organismos.
19-Qual o mecanismo de ação dos antibióticos nas bactérias? 
1. Inibição da síntese da parede celular peptideoglicana (Gram+). Atuam em células em crescimento. Células humanas não são afetadas. Quebra da ligação B1 4.
2. Danos a membrana plasmática. Polimixinas ligam-se à membrana, entre os fosfolipídeos, alterando sua permeabilidade. São extremamente eficientes contra Gram negativos, pois afetam tanto a membrana citoplasmática como a membrana externa.
3. Inibição da síntese de ácidos nucleicos – interferem com os processos de replicação e transcrição do DNA. 
· Novobiocina - se liga a DNA girase, prejudicando o desnovelamento do DNA, impedindo sua replicação. 
· Quinolonas - inibem a DNA girase, afetando a replicação, transcrição. 
· Rifampicina - ligação à RNA polimerase, bloqueando a transcrição.
4. Inibição da síntese proteica - interferem com o processo de tradução. Correspondem a um dos principais grupos de agentes antimicrobianos. 
· Toxicidade seletiva – diferença estrutural dos ribossomos de procariotos e eucariotos. 
· Afeta principalmente G+, possuem amplo espectro.
5. Inibição da síntese de metabólitos essenciais. 
· Geralmente ocorre por um mecanismo de inibição competitiva, ATB compete com o sítio enzimático de uma enzima com um substrato. 
· Sulfas e derivados - inibição da síntese do ácido fólico, pela competição com o PABA (ácido paraminobenzóico). PABA + ENZIMA = ÁCIDO FÓLICO (coenzima para síntese de aa, bases nitrogenadas).
20-Explique resumidamente sobre cada grupo fungico.
· Leveduras (unicelulares): Não possuem flagelos ou meios de locomoção. Crescem no meio com ágar colônias lisas e brilhantes
· Fungos Filamentosos (multicelulares): Parede celular formada por quitinas, celulose e glicanas Células reunidas = hifas micélio + esporos corpo/talo. Sobre meio com ágar: colônias rugosas e filamentosas
ETAPAS DA PCR:
· Escolha do fragmento de DNA a ser amplificado 
· Obtenção do DNA molde. 
· Obtenção de iniciadores, “primers” específicos (cadeias simples de DNA de 15 a 30 nucleotídeos). Um deles tem a seqüência complementar à extremidade 3’ de uma das fitas do DNA a ser amplificado, e o outro é complementar à extremidade 3’ da outra fita 
· Amplificação dos fragmentos de DNA em um termociclador 
· Análise do produto de amplificação no gel