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12/03/2020 1 Nutricionista MSc. Janaina de Arruda Santos Fatores Intrínsecos e Extrínsecos dos alimentos: Relação com a susceptibilidade a contaminação microbiana AULA 05 | CONTROLE HIG. E SANIT. DE ALIMENTOS IBMR, Rio de Janeiro/RJ 2020.1 DESENVOLVIMENTO MICROBIANO CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO 12/03/2020 2 DESENVOLVIMENTO MICROBIANO CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO 1ª - Fase de latência: conhecida como fase lag. É o momento em que a célula procura se adaptar ao novo meio e, neste caso, o número de células é constante. DESENVOLVIMENTO MICROBIANO CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO 1ª - Fase de latência | FASE LAG Pode ser longa ou curta, de acordo com as características da contaminação. Exemplo: Se um microrganismo presente no solo contaminar uma carne, levará um tempo para se adaptar ao novo substrato, pois terá que começar a produzir enzimas capazes de digerir nutrientes, como as proteínas. Porém, se a contaminação da mesma carne for feita através de resíduos de carne de uma superfície mal higienizada, as bactérias já estarão adaptadas ao alimento e, assim, vão se multiplicar mais rapidamente. A contaminação através de resíduos de alimentos (má limpeza e/ou sanitização deficientes) é muito mais problemática pois encurta a fase lag. 12/03/2020 3 DESENVOLVIMENTO MICROBIANO CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO 2ª - Fase logarítmica ou fase exponencial: ritmo de crescimento máximo por estar adaptado ao meio. O número de células aumenta em progressão geométrica. O final desta fase é quando ocorre a utilização de todos os nutrientes. DESENVOLVIMENTO MICROBIANO CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO 3ª - Fase estacionária: a quantidade de célula que se divide equivale ao número de célula que morre, ou seja, o número de células permanece constante, uma vez que os nutrientes estão escassos. 12/03/2020 4 DESENVOLVIMENTO MICROBIANO CURVA DE CRESCIMENTO MICROBIANO 4ª - Fase de destruição: devido às condições adversas do meio a maioria das células está em processo de morte e o número de células decresce em ritmo constante. DESENVOLVIMENTO MICROBIANO 12/03/2020 5 DESENVOLVIMENTO MICROBIANO A capacidade de sobrevivência ou de multiplicação dos microrganismos que estão presentes em um alimento depende de uma série de fatores: Relacionados com características próprias dos alimentos. Relacionados com o ambiente em que o alimento se encontra. DESENVOLVIMENTO MICROBIANO INTRÍNSECOS EXTRÍNSECOS Atividade de água Potencial de oxirredução pH Composição química do alimento Estrutura biológica Interações entre microrganismos Temperatura Umidade relativa Composição gasosa do ambiente 12/03/2020 6 DESENVOLVIMENTO MICROBIANO FATORES INTRÍNSECOS FATORES INTRÍNSECOS ATIVIDADE DE ÁGUA • Os microrganismos necessitam de água para sua sobrevivência, e para seu metabolismo e multiplicação esta água deve estar na forma disponível; • O parâmetro que mede a disponibilidade de água livre em um alimento denomina-se “atividade de água” Aa ou Aw. Água pura → aEvidade de água 1,0 Quanto mais próximo de 1,0 mais perecível é o alimento. Ex: Maçã in natura: 0,9 | Maçã desidratada: 0,6 12/03/2020 7 FATORES INTRÍNSECOS ATIVIDADE DE ÁGUA • A Aa é calculada pela fórmula Aw = P/P0 onde: P = pressão do vapor da solução/substrato P0 = pressão do vapor de água pura A água livre de um alimento interfere na multiplicação microbiana pois todas as reações enzimáticas ou metabólicas ocorrem em ambiente aquoso, além disso, as trocas entre ambientes internos e externos das células necessitam de água. A DIMINUIÇÃO DA Aw AUMENTA A FASE LAG DOS MICRORGANISMOS E DIMINUI A VELOCIDADE DE MULTIPLICAÇÃO E DO TAMANHO DA POPULAÇÃO MICROBIANA FINAL. FATORES INTRÍNSECOS ATIVIDADE DE ÁGUA • São alguns fatores/recursos utilizados para diminuir a Aw: ADIÇÃO DE SOLUTOS: sal, açúcar; REMOÇÃO DA ÁGUA: desidratação. CONGELAMENTO Exemplo do dia a dia: PRODUTO: LEITE Leite líquido Aw 0,99 muito perecível Leite condensado Aw 0,83 a 0,90 mais ou menos perecível Leite em pó Aw 0,60 pouco perecível 12/03/2020 8 FATORES INTRÍNSECOS ATIVIDADE DE ÁGUA 0,60: valor limite de Aw para multiplicação de qualquer microrganismo. FATORES INTRÍNSECOS ATIVIDADE DE ÁGUA 12/03/2020 9 FATORES INTRÍNSECOS POTENCIAL DE OXIRREDUÇÃO Os processos de oxidação e redução estão relacionados com a troca de elétrons entre compostos químicos. E, o potencial de oxirredução pode ser definido como a facilidade com que determinado substrato ganha ou perde elétrons e é expresso pelo símbolo Eh. • Perda de elétrons: mais oxidado (Eh+) • Ganho de elétrons: mais reduzido (Eh-) Microrganismo Eh Exemplos Aeróbio Positivo (Entre +350 e +500) Bolores, leveduras, muitas bactérias, principalmente deteriorantes Anaeróbio Menor que -150 Algumas espécies de bactérias patogênicas e deteriorantes FATORES INTRÍNSECOS POTENCIAL DE OXIRREDUÇÃO A determinação do valor de Eh de um alimento é difícil pois em todo momento há interação do oxigênio que envolve o alimento, mas de maneira geral: Alimento Eh (mV) Frutas frescas e vegetais +300 a +400 Carnes em grandes pedaços -200 Carne moída +200 Queijos -20 a -200 12/03/2020 10 FATORES INTRÍNSECOS pH • É a medida de acidez ou alcalinidade em um alimento. • O pH afeta a multiplicação de microrganismos de forma muito efetiva; • A maioria dos patógenos pode se multiplicar em pH entre 4,0 e 9,0; • Alguns microrganismos deteriorantes específicos conseguem se multiplicar próximos à 1 ou 11 porém são exceções; Como o pH vai interferir o microrganismo? 1) Interferindo no funcionamento de enzimas que são necessárias ao metabolismo do microrganismo; 2) Interferindo no transporte de nutrientes dentro da célula (a maioria das células apresenta pH intracelular próximo de 6,0 ou 7,0 onde há pleno funcionamento das suas enzimas). FATORES INTRÍNSECOS pH • Os microrganismos apresentam valores de pH mínimo, ótimo e máximo: • Bolores e leveduras são mais tolerantes à baixos valores de pH; • Microrganismos patogênicos apresentam uma faixa de pH ótimo mais estreita. 12/03/2020 11 FATORES INTRÍNSECOS pH Curiosidade: Carnes provenientes de animais fatigados deterioram-se mais rapidamente, o pH destas carnes é mais alto do que de animais descansados; No pós morte, o glicogênio de reserva é transformado em ácido lático, que reduz o pH do músculo de cerca de 7,4 para cerca de 5,6 dependendo do tipo de animal. Já o animal estressado antes do abate tem seu glicogênio metabolizado, reduzindo a quantidade de ácido lático que pode ser produzido pós-morte, logo, a carne ficará com pH mais elevado. DE FORMA GERAL, A EXPOSIÇÃO DE MICRORGANISMOS A pH NÃO IDEAIS RESULTA NO AUMENTO DA FASE LAG, OU SEJA, NA FASE DE ADAPTAÇÃO. FATORES INTRÍNSECOS pH | Efeito dos ácidos Efeito dos ácidos nos microrganismos • Maior gasto de energia para manter o pH intracelular. • Desnaturação de proteínas. • Alteração da atividade das enzimas responsáveis pelas atividades vitais da célula. • Menor velocidade de crescimento. pH > de 4,5 Mais sujeitos ao crescimento microbiano. pH entre 4,0 e 4,5 Predominância do crescimento de bolores e leveduras, poucas bactérias (láticas e espécies de Bacillus). pH < de 4,0 Crescimento de bolores e leveduras. 12/03/2020 12 FATORES INTRÍNSECOS pH | Valores aproximados em alguns alimentos: Alimento pH Abóbora 5,0 a 5,4 Aipo 5,7 a 6,0 Alface 6,0 Batata 5,3 a 5,6 Tomate 4,2 a 4,3 Ameixa 2,8 a 4,6 Banana 4,5 a 4,7 Laranja (suco) 3,6 a 4,3 Maçã 2,9 a 3,3 Melancia 5,2 a 5,6 Melão 6,3 a 6,7 Uva 3,4 a 4,5 Carne bovina 5,1 a 6,2 Alimento pH Frango 6,2 a 6,4 Camarão 6,8 a 7,0 Atum 5,2 a 6,1 Caranguejo 7,0 Moluscos 6,5 Ostras 4,8 a 6,3 Peixes frescos 6,6 a 6,8 Salmão 6,1 a 6,3 Creme de leite 6,5 Leite 6,3 a 6,5 Manteiga 6,1 a 6,4 Feijão 4,6 a 6,5 Milho 7,3 FATORES INTRÍNSECOS COMPOSIÇÃO QUÍMICA DOS ALIMENTOS Além da água, para que a multiplicação microbiana seja possível, nutrientes devem estar disponíveis. Cada microrganismonecessita de diferentes substratos para conseguir se desenvolver, e os principais utilizados são: carboidratos, lipídeos, proteínas, vitaminas e minerais. As exigências são de acordo com suas enzimas, que quebram as moléculas específicas. Em relação aos minerais, embora necessários em quantidades muito reduzidas, ainda sim são indispensáveis pois são envolvidos nas reações enzimáticas. Principais: sódio, potássio, cálcio e magnésio. 12/03/2020 13 FATORES INTRÍNSECOS FATORES ANTIMICROBIANOS NATURAIS Existem alguns alimentos que possuem proteção natural contra os microrganismos, são constituintes antimicrobianos naturais, que apresentam a capacidade de retardar ou impedir a multiplicação microbiana. Exemplos: CONDIMENTOS: óleos essenciais com atividade antimicrobiana Cravo Eugenol Alho Alicina Canela Aldeído cinâmico e eugenol Mostarda Alil-isotiocianato Orégano Timol e isotimol Sálvia Timol OVOS Clara do ovo Lisozima, avidina e conalbumina FATORES INTRÍNSECOS FATORES ANTIMICROBIANOS NATURAIS Exemplos: Além dos fatores antimicrobianos naturais dos alimentos, têm importância os compostos químicos propositalmente adicionados aos alimentos como recursos tecnológico para estender sua vida útil: conservantes. LEITE Leite de gado bovino Lactoferrina Sistema lactoperoxidase Lisozima Nisina FRUTAS E VEGETAIS Frutas e vegetais em geral Ácido cumárico Frutas e sementes Taninos 12/03/2020 14 FATORES INTRÍNSECOS ESTRUTURAS BIOLÓGICAS DOS ALIMENTOS São incluídas como fatores antimicrobianos naturais dos alimentos, e funcionam como barreira mecânica para penetração dos microrganismos. Exemplos: • Casca de nozes; • Casca de frutas; • Casca de ovos; • Pele de animais; • Película que envolve sementes. FATORES INTRÍNSECOS INTERAÇÃO ENTRE MICRORGANISMOS Um determinado microrganismo ao se multiplicar produz metabólitos que podem afetar a capacidade de sobrevivência e multiplicação de outros. Estas interações podem ser POSITIVAS ou NEGATIVAS. Exemplo POSITIVO: Bactérias láticas → produzem ácido lático → tornam pH ácido e inibe o crescimento de outros microrganismos. Exemplo NEGATIVO: Leveduras → degradam ácido lático de alimentos fermentados → alteram o pH favorecendo crescimento bacteriano e produção de toxinas. 12/03/2020 15 DESENVOLVIMENTO MICROBIANO FATORES EXTRÍNSECOS FATORES EXTRÍNSECOS TEMPERATURA É o fator ambiental mais importante na multiplicação dos microrganismos. Diretamente relacionada com o binômio TEMPO x TEMPERATURA. 12/03/2020 16 Fatores que contribuem para a ocorrência de surtos por DTA % FATORES EXTRÍNSECOS TEMPERATURA Fatores relacionados ao controle de tempo e temperatura de alimentos Forsythe, Stephen J (2013) FATORES EXTRÍNSECOS TEMPERATURA Há muita controvérsia sobre a classificação dos microrganismos de acordo com a temperatura ideal de multiplicação, a mais aceita costuma dividir os microrganismos nos seguintes grupos: Os psicrófilos e psicrotróficos multiplicam-se bem em alimentos refrigerados, ex.: Pseudomonas, Alcaligenes, Flavobacterium, Micrococcus. GRUPOS T°C mínima T°C ótima T°C máxima PSICRÓFILOS 0 a 5°C 10 a 15°C 15 a 20°C PSICROTRÓFICOS 0 a 5°C 20 a 30°C 30 a 35°C MESÓFILOS 5 a 25°C 25 a 40°C 40 a 50°C TERMÓFILOS 35 a 45°C 45 a 65°C 60 a 90°C 12/03/2020 17 FATORES EXTRÍNSECOS TEMPERATURA Os mesófilos correspondem à maioria dos que são de importância em alimentos e inclusive neste grupo estão a maior parte dos patógenos. Os termófilos englobam dentre os microrganismos de interesse em alimentos algumas espécies de Bacillus e Clostridium. Os bolores são capazes de crescer em ampla faixa de temperatura e muitos crescem inclusive em temperatura de refrigeração. Já as leveduras não toleram bem temperaturas altas, preferindo as faixas dos psicrófilos, psicrotróficos e mesófilos. FATORES EXTRÍNSECOS UMIDADE RELATIVA DO AMBIENTE A umidade relativa do ambiente (UR) influencia na Aa do alimento. Alimentos conservados em ambiente com UR superior à sua tendem a absorver umidade do ambiente, causando aumento da sua Aa. Alimentos conservados em ambiente com UR inferior à sua tendem a perder água, causando diminuição da sua Aa. As alterações dos valores de Aa influenciarão por consequência a capacidade de multiplicação dos microrganismos. 12/03/2020 18 FATORES EXTRÍNSECOS COMPOSIÇÃO GASOSA DO AMBIENTE A composição gasosa do ambiente que está o alimento afeta o tipo de microrganismo nele predominante. O composto mais importante para o crescimento dos microrganismos é o O2. A presença de altas concentrações de O2 favorece o crescimento de microrganismos aeróbios; Baixas concentrações de O2 favorecem a predominância de anaeróbios. Além do O2 o CO2 tem conhecidos efeitos inibidores sobre o crescimento microbiano, e sua ação é influenciada principalmente por temperatura, quanto mais baixa, mais intenso é seu efeito. A ação do CO2 também depende de outros fatores como pH e Aa do alimento. FATORES EXTRÍNSECOS COMPOSIÇÃO GASOSA DO AMBIENTE No dia a dia os exemplos mais comuns sobre utilização da composição gasosa relacionada à conservação de alimentos são: Utilização de embalagens à vácuo, especialmente para carnes; Utilização de embalagens sob atmosfera modificada – onde o oxigênio é substituído por outros gases; Combinações mais utilizadas: entre oxigênio, nitrogênio e gás carbônico. Não são tóxicos e aumentam shelf life 12/03/2020 19 FATORES EXTRÍNSECOS TEORIA DOS OBSTÁCULOS DE LEISTNER O estudo das interações entre os fatores intrínsecos e extrínsecos que afetariam a capacidade de sobrevivência e multiplicação dos microrganismos deu origem ao conceito dos obstáculos de Leistner 1) Todos os fatores agindo em parcelas iguais; 2) Determinado n° de barreiras seria o suficiente para conter a multiplicação dos microrganismos; 3) Um único fator intrínseco sendo suficiente para manter a estabilidade quando há uma carga microbiana inicial baixa; FATORES EXTRÍNSECOS TEORIA DOS OBSTÁCULOS DE LEISTNER 4) Nenhuma barreira suficiente quando a carga microbiana inicial for alta; 5) Quando o produto é enriquecido com nutrientes há um efeito trampolim no crescimento microbiano e deve-se aumentar a intensidade dos obstáculos; 6) Utilização de estratégias que vão afetar o metabolismo dos microrganismos e assim utilizam-se menos barreiras; 7) Estabilidade do produto garantida por obstáculos agindo em sinergia. 12/03/2020 20 FATORES EXTRÍNSECOS TEORIA DOS OBSTÁCULOS DE LEISTNER O conceito dos obstáculos deu origem à tecnologia dos obstáculos que se baseia na utilização simultânea de mais de uma forma de controle microbiano nos alimentos, como por exemplo a salga, acidificação, processamento térmico, adição de conservantes, etc. Os objetivos no geral são: Ter produtos mais estáveis; Prolongar vida de prateleira; Garantir alimentos seguros aos consumidores. Até os dias atuais são utilizados recursos tecnológicos na produção de alimentos que combinam 2 ou mais obstáculos. IMPORTANTE LEMBRAR! Independente do uso de tecnologias, devem ser controlados na produção dos alimentos a prevenção de fontes de contaminação, higiene de forma geral e fatores extrínsecos!
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