Relatório Determinação de glutationa em amostra biológica

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Bioquímica III - RELATÓRIO N05
DETERMINAÇÃO DE GLUTATIONA REDUZIDA EM AMOSTRA BIOLÓGICA
1. OBJETIVO DA AULA E PRINCÍPIO DOMÉTODO
- Objetivo: Determinar as quantidades e concentrações de glutationa reduzida (GSH) em amostra de
fígado e de rato através do método defluorescência.
- Princípio do método: O método consiste na determinação da fluorescência de isoindol-GSH
que é excitado em 350 nm e emite fluorescência em 420 nm. Este composto é obtido através da
reação de o-ftaldialdeíto com GSH. Logo, a fluorescência obtida pode ser relacionada com a
GSH presente nas amostras de cérebro e defígado.
2. RESULTADOS:
2.1. CurvaPadrão:
Tubos 
padrões Fluorescência
Quantidade 
(nmol)
F.C.P.
(nmol. UF-1)
F.C.M.
(nmol. UF-1)
1 235 0,375 1,6 x10-3 1,861 x10-3
2 445 0,75 1,7 x10-3
3 850 1,5 1,8 x10-3
4 1610 3 1,9 x10-3
5 3815 7,5 2 x10-3
6 7800 15 1,9 x10-3
7 15300 30 2 x10-3
2.2. Amostra:
Amostra Fluorescência Quantidade (nmol) Concentração (nmol.mL-1) Conc. Tecido
(nmol.g-1)
Método 
Matemático
Método
Gráfico
Método 
Matemático
Método 
Gráfico
Método do 
Fator Direto
Método 
Matemático
Fígado 8915 16,59 17,39 1990,8 2086,8 1990,9 19908
Cérebro 5920 11,02 11,50 1322,4 1380,0 1322,1 13224
2.3. Fator Direto: 0,0372 nmol.UF-1
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3. DISCUSSÃO ECONCLUSÃO:
A glutationa é um tripeptídeo antioxidante que atua sobre espécies reativas e radicais livres que
provocam danos aos tecidos, onde a glutationa reduzida (GSH) transforma-se em glutationa oxidada
(GSSG) além das enzimas associadas ao seu metabolismo.
Uma maior quantidadedeGSH no fígado pode ser justificada por elesero centro integrador do
metabolismo, fundamental paradiversasrotas bioquímicas,inclusiveo tecido hepático é o mais ativo em
relação asua biossíntesede GSH e oferta para outrostecidos.
O cérebro precisa ter uma quantidade adequada de GSH, suficiente para prevenir danos associados a
espécies reativas e radicais livres, com a finalidade de preservação do tecido do SNC.
A glutationa é importante como proteção antioxidante para os tecidos doorganismo,deve haver um
equilíbrio entre a síntese de antioxidantes e espécies reativas sendo produzidas
parapreservaçãodah o m e o s t a s i a .
O experimento tem como finalidade a comparação entre a quantidade de GSH determinadanofígado e
no cérebro. Os resultados obtidos através do método de fluorescência demonstram que há uma
quantidademaiordeGSHemamostradetecidohepáticoemenorquantidadenotecidocerebral.
4. CÁLCULOS:
- Cálculos da Curva Padrão:
1. Concentração final em cada tubo:C1x V1= C2xV2
T u bo 1 :0,0125 mMx 30μL =L =CL=C2x300μL =L =CL T u b o 5 :0,250mMx30μL =L =CL=C2x300μL =LL
C2=1,25x 1 0 -3m M C2=0,025m M
T u bo 2 :0,025mMx30μL =L =CL=C2x300μL =L =CL T u bo6 :0,500mMx30μL =L =CL=C2x300μL =L=CL
C2=2,5x 1 0 -3mM C2=0,05mM
T u bo 3 :0,050mMx30μL =L =CL=C2x300μL =L =CL T u bo 7 :1,00mMx30μL =L =CL=C2x300μL =L =CL 
C2=5x 1 0 -3mM C2=0,1m M
Tubo4:0,100mMx30μL =L = CL=C2x300μL =L = CL
C2=0,01 mM
2. Quantidade de GSH nos pontos da CurvaPadrão:
Conc. Padrão mM --- 1000mL(1L) 1,25 x10-3mM ---1000mL 2,5 x10-3mM --- 1000mL
Q (mM) --- 0.3 mL (300μL)L)L)Q1 (mM) ---0 . 3 mL Q2 (mM) --- 0.3mL
Q1 x106= nmol
5 x10-3mM --- 
1000mLQ3(mM)
--- 0.3 mL
Q1 x 106=0,375 nmol
0,01 mM --- 1000 mL 
Q4 (mM) --- 0.3 mL
Q2 x 106=0,75 nmol
0,025 mM --- 1000 mL 
Q5(mM) --- 0.3mL
Q3 x 106=1,5 nmol Q4 x 106=3 nmol Q5 x 106=7,5 nmol
0,05 mM --- 1000 mL 
Q6 (mM) --- 0.3 mL
Q6 x 106=15 nmol
0,1 mM --- 1000 mL 
Q7 (mM) --- 0.3mL
Q7 x 106=30nmol
3. F.C.P.:
3
4. F.C.M.:
- Cálculos das amostras:
1. Quantidade de GSH emamostra:
1.1. Métodomatemático:
Q fígado= 1,861 x10-3nmol.UF-1x 8915 UF =16,59 nmol
Q cérebro= 1,861 x10-3nmol.UF-1x 5920 UF =11,02 nmol
1.2. Métodográfico:Equaçãodareta:y=508,8x+68,20,sendox=Q’amostraey=Fluorescência.
Q’ fígado=xf Q’ cérebro =xc
2. Fator direto(FD):
Fator de diluição: fd
fd=V f i n a l = 3 00 μL =L = C L =6
Vinicial 50μL =L =CL
3. Concentração de GSH emamostra:
3.1. Método do FD:Conc. = Fluorescência x FD x fator de 
diluiçãoConc. fígado= 8915 UF x 0,03722 nmol.UF-1x 6 =1990,9 
nmol.mL-1Conc. cérebro= 5920 UF x 0,03733 nmol.UF-1x 6 
=1322,1nmol.mL-1
3.1. Método gráfico:
Conc. fígado:17,39 nmol --- 0,05mL
xf --- 1mL
xf = 347,8 x 6 =2086,8 nmol. mL-1
Conc. cérebro:11,50 nmol --- 0,05 mL
xc --- 1mL
xc = 230 x 6 =1380,0 nmol. mL-1
3,2. Método matemático:
Fígado:
16,59nmol --- 0,05mL
Conc. fígado --- 1 mL
Conc. fígado = 331,8 x 6 =1990,8 nmol.mL-1
Cérebro:
11,02nmol --- 0,05 mL
Conc. cérebro --- 1 mL
Conc. cérebro = 220,4 x 6 =1322,4 nmol.mL-1
3.3. Concentração de GSH em nmol.g-1de tecido:
1 g --- 10 mL (diluição 1:10)
x ---0,05mL(50μL =L =CL)
x =5 x10-3g de amostra
Fígado:
16,59 nmol --- 5 x10-
3gxc’ --- 1g
xc = 3318 x 6 =19908 nmol.g-1
Cérebro:
11,02 nmol --- 5 x10-
3gxf’ ---1g
xf’ = 2204 nmol.g-1x 6 =13224 nmol.g-1
	DETERMINAÇÃO DE GLUTATIONA REDUZIDA EM AMOSTRA BIOLÓGICA
	Princípio do método: O método consiste na determinação da fluorescência de isoindol-GSH que é excitado em 350 nm e emite fluorescência em 420 nm. Este composto é obtido através da reação de o-ftaldialdeíto com GSH. Logo, a fluorescência obtida pode ser relacionada com a GSH presente nas amostras de cérebro e defígado.
	2. RESULTADOS:
	2. Quantidade de GSH nos pontos da CurvaPadrão:
	4. F.C.M.:
	1. Quantidade de GSH emamostra:
	2. Fator direto(FD):
	3. Concentração de GSH emamostra:
	3.1. Método gráfico:
	3,2. Método matemático:
	3.3. Concentração de GSH em nmol.g-1de tecido:
	x =5 x10-3g de amostra