Eletroforese: Técnica de Separação Biológica

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Eletroforese
Tem função de separar os componentes de um sistema biológico. Separar proteína e aminoácido justamente na aplicação de um campo elétrico.
Basicamente se tem um polo + e um -, pra fazer a separação se submete a um gel. Gel de poliacrilamida (ptns maiores) ou agarose (ptns menores) dependendo de qual é a finalidade, de acordo com o tamanho ou peso molecular de cada ou amostra de pnts que se tem, ai se faz uma preparação da amostra, geralmente se tem um gel desnaturante que utiliza detergente chamado STS, assim inativa sua proteína pois ao fazer interação com o detergente acontecem interações hidrofóbicas e se consegue visualizar melhor o tamanho da proteína . Se pode separar de acordo com o tamanho, carga ou interação com anticorpo. 
Eletroforese é uma técnica utilizada para separar componentes de um sistema biológico, mediante aplicação de um campo elétrico. 
Tipos de Eletroforese e suas aplicações:
1) Eletroforese em Gel 
No gel se pega duas substâncias, une e forma polímeros faz como se formasse uma rede e ai nessa rede vai reter as ptn de maior tamanho, Quando vai fazer em gel, tem o gel superior que serve para vc concentrar a amostra e o gel inferior que é para promover a separação
Quando se tem essa rede de malha fina e aplica mostra do gel a separação acontece de forma decrescente, ou seja, a de maior tamanho ficam mais próximas do ponto de aplicação, enquanto que as menores vão percorrendo uma maior distância no gel. 
O princípio básico é: promover a separação por tamanho. A maiores mais próximas do ponto de aplicação e as menores vão percorrer a distancia do gel 
Quando se trata de um gel desnaturante, detergente SDS ou um betamercatoetanol, se faz um tratamento para preparar a proteína e coloca um corante par quando aplicar a amostra saber que não vai perde-la.
Gel não desnaturante: para não desnaturar a proteína 
Eletroforese também tem função de testar pureza de uma preparação. 
Tem indicação de separar componentes de um sistema biológico de acordo com um tamanho (peso molecular), além de testar a pureza e homogeneidade de uma solução. O gel de eletroforese forma uma rede de solução. O gel de eletroforese forma uma rede de malhas finas onde as partículas de maior tamanho dicam retidas mais perto da ponta de aplicação. Antes de submeter a amostra à separação, deve-se aplicar o padrão de peso molecular, em paralelo, cuja finalidade é servir de referência para identificar o peso aproximado da amostra do gel. 
Gel vertical: bioquímica e imunologia 
Gel Horizontal: biologia molecular 
Durante o processo de eletroforese em gel usa-se um tampão para evitar uma brusca variação de pH . 
Cuidado com proteínas diméricas ou oligoméricas pois dependendo da preparação ou corrente pode levar a dissociação de ptns diméricas ou de maior numero de subunidades. 
2) Eletrofocalização ou Focalização isoeletrônica 
Quando o pH está abaixo do seu ponto isoelétrico a pnt pode adquirir uma carga positiva; 
Quando ela já está acima do seu ponto isoelétrico a pnt fica carregada negativamente. 
É indicado para identificar o ponto isoelétrico de uma partícula (proteínas, aminoácidos, por exemplo). O sistema é constituído de uma resina que mediante a amostra de anfólitos (partículas com carga negativa e positiva) forma um gradiente de pH.
 
Ao submeter uma amostra no sistema, ou seja, aplicar a amostra na resina está tende a ser atraída pelo polo contrário, passando por regiões distintas de pH. Em determinada região de pH, a amostra fica com carga líquida final=0 e fica estacionado, este pH representa seu ponto isoelétrico. 
3) Imunoeletroforese
É indicado para identificar um determinado antígeno mediante aplicação de um anticorpo. A primeira etapa a ser executado é a separação eletroforetica da amostra para, posteriormente, transferir os componentes da amostra para uma base de nitrocelulose. Em seguida, aplica-se um anticorpo primário afim de associar-se ao antígeno, e por fim, um anticorpo secundário para associar-se ao anticorpo primário. O anticorpo secundário pode ser radiativo, emitir fluorescência ou a reação pode ser colorimétrica.