Diagnóstico Laboratorial em Virologia - métodos de análise

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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL EM VIROLOGIA 
• Vírus podem ser detectados: 
1. Diretamente: detecção de antígenos ou visualização direta (microscópio eletrônico) 
2. Indireta: detecção de anticorpos específicos 
MÉTODOS DIRETOS 
• Métodos clássicos: isolamento viral por: 
1. Cultura de células 
2. Ovos embrionados 
3. Animais 
• Métodos rápidos: 
1. Observação da partícula viral: microscopia eletrônica 
2. Detecção do antígeno viral: imunofluorescência (IF) e Ensaio imunoenzimático (EIE) 
3. Detecção do genoma viral: reação em cadeia pela polimerase (PCR) 
MÉTODOS INDIRETOS (DETECÇÃO DE ANTICORPO S) 
• Imunofluorecência (IF) 
• Ensaio imoenzimático (EIE) 
ANIMAIS EM LABORATÓRIO 
• Atualmente uso muito restrito 
• Diagnóstico de raiva em camundongos lactentes 
• Isolamento e multiplicação de vírus que não replicam bem culturas de células 
Ex: Vírus da febre amarela selvagem 
INOCULAÇÃO EM OVOS EMBRIONADOS 
• Embrião em desenvolvimento é ideal para multiplicação viral 
• Requisitos: 
1. Livres de contaminação 
2. Viabilidade 
3. Idade Ideal 
• Vantagens: sensibilidade, facilidade de realização 
• Desvantagens: contaminações e morte embrionária 
CULTURA DE CÉLULAS 
• Meio mínimo essencial 
1. Glicose 
2. Bicabornato (tampão) 
3. Indicador de pH 
4. Íons (Ca+2, Mg+2, Cl-, K+, Zn+2) 
5. Vitaminas 
6. Aminoácidos 
7. Antibióticos e antimicótiocs 
8. Água 
9. Soro Fetal Bovino – 10% em meio de cultivo e 2% em manutenção 
• Condições ambientes 
1. Temperatura (37°) 
2. Umidade 
3. Níveis de CO2 
4. pH (7,2) 
• Possíveis linhagem celular para uso: 
 
• Vírus exercem efeito citopático sobre as células de cultivo, sendo que alguns vírus causam efeitos 
específicos em determinados tipos celulares. 
 
 
• Após o isolamento viral é necessário um método específico de detecção, os quais podem ser: 
1. Imunofluorescência 
2. Amplificação do genoma viral RT-PCR/PCR 
3. Microscopia eletrônica 
4. Reação de Hemaglutinação