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• Vírus podem ser detectados: 1. Diretamente: detecção de antígenos ou visualização direta (microscópio eletrônico) 2. Indireta: detecção de anticorpos específicos Métodos diretos • Métodos clássicos: isolamento viral por: 1. Cultura de células 2. Ovos embrionados 3. Animais • Métodos rápidos: 1. Observação da partícula viral: microscopia eletrônica 2. Detecção do antígeno viral: imunofluorescência (IF) e Ensaio imunoenzimático (EIE) 3. Detecção do genoma viral: reação em cadeia pela polimerase (PCR) Métodos indiretos (detecção de anticorpos) • Imunofluorecência (IF) • Ensaio imoenzimático (EIE) Animais em laboratório • Atualmente uso muito restrito • Diagnóstico de raiva em camundongos lactentes • Isolamento e multiplicação de vírus que não replicam bem culturas de células Ex: Vírus da febre amarela selvagem Inoculação em ovos embrionados • Embrião em desenvolvimento é ideal para multiplicação viral • Requisitos: 1. Livres de contaminação 2. Viabilidade 3. Idade Ideal • Vantagens: sensibilidade, facilidade de realização • Desvantagens: contaminações e morte embrionária Cultura de Células • Meio mínimo essencial 1. Glicose 2. Bicabornato (tampão) 3. Indicador de pH 4. Íons (Ca+2, Mg+2, Cl-, K+, Zn+2) 5. Vitaminas 6. Aminoácidos 7. Antibióticos e antimicótiocs 8. Água 9. Soro Fetal Bovino – 10% em meio de cultivo e 2% em manutenção • Condições ambientes 1. Temperatura (37°) 2. Umidade 3. Níveis de CO2 4. pH (7,2) • Possíveis linhagem celular para uso: • Vírus exercem efeito citopático sobre as células de cultivo, sendo que alguns vírus causam efeitos específicos em determinados tipos celulares. • Após o isolamento viral é necessário um método específico de detecção, os quais podem ser: 1. Imunofluorescência 2. Amplificação do genoma viral RT-PCR/PCR 3. Microscopia eletrônica 4. Reação de Hemaglutinação
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