Meios de Cultura de Microrganismo

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MEIOS DE CULTURA DE MICRORGANISMOS
Meios de cultura são composições de substâncias que fornecem nutrientes necessários para o desenvolvimento de microrganismos. 
Além dos nutrientes, existem condições ambientais para o crescimento microbiano, como temperatura, pH, umidade, presença ou não de oxigênio (condição aeróbia e anaeróbia), entre outros
O que são meios de cultura?
De acordo com seu estado físico, podendo ser:
sólido, quando possui agentes solidificantes como o ágar; 
semissólido, quando a consistência de ágar e/ou gelatina é intermediária, 
líquido, quando não possui solidificantes, caracterizando-se como caldo.
Classificação
Devido à diversidade dos microrganismos, existem vários meios de cultura específicos que atendem às exigências para o desenvolvimento de cada um.
 Os meios básicos permitem o crescimento, porém não atendem a nenhuma condição nutricional específica de um determinado microrganismo.
 São exemplos de meio de cultura simples o caldo e o ágar simples.
Já os meios especiais ou complexos possuem condições específicas que atendem às exigências de determinado microrganismo,
 pois contêm substâncias que propiciam a produção de enzimas e secreções específicas de determinados microrganismos, 
e que impedem o crescimento de outros que não são de interesse de análise. 
Um exemplo de meio de cultura especial é o Manitol, um meio salino com indicador de pH que tem a sua cor alterada quando ocorre o processo de fermentação e produção de ácido. 
Nesse meio é possível a identificação da bactéria Staphylococcus aureus.
De acordo com o tipo de microrganismo a ser identificado, os meios de cultura possuem diferenciação química, podendo ter:
 extratos vegetais (malte, tomate),
 animais (carne), 
microrganismos (levedura) e sintéticos.
Meios de Enriquecimento – São preparações liquidas normalmente que promove o aumento das bactérias.
 Esses meios têm a propriedade de estimular o crescimento de determinados microrganismos, mas existem alguns que também podem inibir o crescimento de outros. 
Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para cultivo de Salmonelas (líquidos). 
De acordo com a finalidade bacteriológica ou micológica os meios especiais podem ser classificados em:
Diferenciais - quando contém substâncias que permitem estabelecer diferenças entre microrganismos muito parecidos, tais como meio de Azul de Metileno (diferencial para coliformes)
Seletivos - os que contém substâncias que inibem o desenvolvimento de determinados grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros.
 Exemplo:, ágar Salmonella-Shigella (SS) e ágar MacConkey
Identificação - prestam-se para a realização de provas bioquímicas e funções fisiológicas do organismos submetidos a identificação (meios Oxidação/Fermentação, Ágar Citrato, Caldo nitrato) 
TÉCNICAS DE SEMEADURA E ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS
Isolamento de um microrganismo: 
O isolamento consiste na obtenção de uma cultura pura (colônias isoladas de um único microrganismo, separando-o de outros que se encontram no mesmo material).
CONCEITOS IMPORTANTES
Finalidades do isolamento: 
Identificação de um microrganismo.
 A simples observação de caracteres morfológicos não é suficiente para a identificação e classificação dos microrganismos. 
Para isto, são avaliadas várias características como: características bioquímicas, sorológicas, de patogenicidade, etc. 
O estudo destas características está na dependência do microrganismo que se pretende identificar. 
Semeadura: 
Consiste na inoculação ou plantio de um microrganismo em um meio de cultura, a partir de um material contaminado qualquer.
Repique: 
Consiste na transferência de um microrganismo de um meio de cultura para outro. 
Temperatura de armazenamento de 3 a 5°c
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Semeadura em Meio Sólidos
 TÉCNICAS DE SEMEADURA
SEMEADURA EM TUBOS DE ENSAIO
Esgotamento de alça: 
técnica utilizada para obtenção de crescimento bacteriano e/ou para a observação de propriedades bioquímicas da bactéria. 
A semeadura é, geralmente, feita da base do meio para a extremidade do mesmo (pode também ser chamada de estriamento).
SEMEADURA EM PLACAS DE PETRI: 
O material a ser semeado deverá conter poucos microrganismos porque o inóculo para o isolamento deve ser leve. 
Lembrar que cada colônia formada na superfície de um meio sólido é originada de um ou alguns microrganismos. 
Quanto maior o número, menor possibilidade de isolamento e maior probabilidade de crescimento confluente.
Consiste em espalhar o material com o auxílio de uma alça bacteriológica, fazendo estrias sucessivas até o esgotamento do material, de modo a obter-se um perfeito isolamento das bactérias existentes na amostra. 
A semeadura poderá ser realizada em um sentido ou em vários, de acordo com a pessoa que realizará a técnica, lembrando-se sempre que o objetivo principal desta técnica de semeadura é a obtenção do isolamento bacteriano.
Estrias Múltiplas para Isolamento
“ESPALHAMENTO” EM PLACA.
Alternativamente, para se obter um tapete uniforme de crescimento microbiano, ou colônias isoladas (após diluição) utiliza-se o método de “espalhamento” em placa. 
Consiste em espalhar o material (suspensão bacteriana na maioria das vezes) com o auxílio de um swab (para obtenção de tapete uniforme) ou alça de Drigalski (para obtenção de colônias isoladas após diluição), fazendo a semeadura por toda a superfície da placa de Petri a ser utilizada nesta técnica.
Deve-se ter o cuidado para que toda a superfície da placa seja semeada, evitando regiões sem semeadura. 
Recomenda-se que faça o procedimento de semeadura com o swab em três direções distintas, com a alça em toda a superfície rodando a placa.
Em Profundidade ou Incoporação: “Pour-Plate” - técnica que consiste em se adicionar 1 mL de uma suspensão bacteriana que esteja sendo estudada (analisada) a 20 mL de um meio de cultura fundido e resfriado, com posterior homogeneização com movimentos circulares. 
É utilizada por alguns microbiologistas para quantificar microrganismos.
Difusão: Técnica que consiste em acrescentar microrganismos através da alça ou agulha de platina em meio líquidos.
Tem como principal finalidade a observação de propriedades bioquímicas através de testes microbiológicos, bem como poderá ser utilizada para o favorecimento do crescimento bacteriano, quando é realizada em meios que possibilitem o enriquecimento.
Segurar a alça com a mão direita, flambar primeiro na chama azul, depois na amarela. 
Esperar esfriar (a alça é flambada na posição vertical e deverá ficar atrás da chama para proteção do operador);
Técnica para semeadura em meios líquidos:
Flambar a boca do tubo, e retirar o inóculo com a alça fria; 
 Flambar novamente a boca do tubo e fechar; 
 Pegar o tubo onde se irá realizar a semeadura, retirar a rolha e flambar;
Semear o material, flambar a boca do tubo e fechar; 
 Esterilizar a alça, identificar o tubo semeado e levar para incubação em estufa.