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Microbiologia Bacteriologia Prof. Dr. Tercio Lemos de Morais E-mail: terciotms@gmail.com História da Microbiologia • No inicio da história da humanidade acreditava-se que as pessoas ficavam doentes por um castigo divino, independente da religião da pessoa. Depois de um tempo foi criada a: • Teoria miasmática (ou teoria dos miasmas): termo utilizado para algo que fica disperso no ar e fazendo mal para as pessoas, como se fosse “uma poluição”, portanto, acreditava-se que seria isso que causava as doenças nas pessoas. • Anton Van Leevwenhoek (Século XVII) – 1º microscópio de luz (aumento de aprox. 300x) – visualização de seres microscópicos (bactérias e células corpo humano) História da Microbiologia • Século XVIII – Teoria dos germes • Louis Pasteur – descobriu bactérias que eram responsáveis por azedar os vinhos ou torna-lo pouco saboroso ou improprio para o consumo humano. Portanto percebeu que aquecendo as bebidas até aproximadamente 48ºC faziam com que as bactérias morressem, surgindo o processo de pasteurização • Robert Koch (bacteriologista alemão)– identificou os causadores do antraz (1877) (Bacillus anthracis), da tuberculose, 1882 (Mycobacterium tuberculosis) e da cólera, 1883 (Vibrio cholerae). Também desenvolveu meios de cultura, utilizados para cultivar bactérias. • Foi contemplado com o Prêmio Nobel de Fisiologia e Medicina de 1905. História da Microbiologia • Junto com a microbiologia também surgiu a EPIDEMIOLOGIA • John Snow - Durante um surto de cólera em Londres conseguiu perceber que todas as pessoas doentes estavam bebendo água de uma mesma fonte, e ele supôs que ali tinha bactérias causadoras dos casos de cólera, solicitando que essa fonte fosse fechada (pai da epidemiologia moderna). • Ignaz Semmelweis (médico húngaro) - pioneiro dos procedimentos antissépticos. Descobriu como evitar contágios apenas lavando as mãos. Lançou um apelo para que as mulheres não parissem nos hospitais, pelo risco de morrerem de febre puerperal, também conhecida como febre das parturientes. Microbiologia • Conceitos gerais sobre microrganismos • Existem aproximadamente 2000 espécies diferentes na natureza de microrganismos patogênicos (causadores de doenças) • A cada ano surgem aproximadamente 10 bilhões de novas infecções; • E aproximadamente 12 milhões de mortes (incidência maior em países subdesenvolvidos). • Virulência: Capacidade infecciosa (causar doença) de um microrganismo • Fator de virulência: são estruturas, produtos ou estratégias que as bactérias utilizam para “driblar” o sistema de defesa do hospedeiro e causar uma infecção (doença). Microbiologia • Conceitos gerais sobre microrganismos • Vírus • Menores partículas infecciosas • 16 a 600 nanômetros • Contém RNA ou DNA (Citomegalovírus possui DNA e RNA) • Cápsula proteica • Envelope (alguns tipos) • Parasitas intracelulares obrigatórios • Possuem tropismo Microbiologia • Quando surge uma INFEÇÃO VIRAL, duas coisas podem acontecer: • Replicação rápida e destruição celular • Ciclo lítico • Incorporação do DNA/RNA viral no genoma da célula infectada • Doenças virais crônicas • Retrovirais (ex. HIV) • Ciclo lisogênico Microbiologia • Conceitos gerais sobre microrganismos • Fungos • Seres mais complexos a serem estudados • São eucariontes • Alguns são unicelulares (leveduras) e outros pluricelulares (bolores/ filamentosos) • Reprodução sexuada e assexuada • São organismos oportunistas (maioria) Microbiologia • Bactérias • São microrganismos unicelulares, procariontes (desprovidos de envoltório nuclear e organelas membranosas) e em geral possuem um só cromossomo (DNA bacteriano). • Características • A palavra bactéria vem do Grego, significa “bakteria” – significa bastão. • As bactérias são encontradas em todos os ambientes da Terra. • As bactérias são seres microscópicos. A maioria apresenta reprodução assexuada (divisão binária) e/ou reprodução sexuada (transferência de material genético). • Conjugação • Transferência • Transdução BACTERIOLOGIA • Características bacterianas • São unicelulares (unidade de medida é micrômetro) • Procariontes (desprovidas de núcleo) • Células desprovidas de organelas membranosas • Única organela encontrada é o ribossomo • Podem ser visualizadas na forma isolada ou em colônias • Podem viver na presença de oxigênio (aeróbias) ou na ausência (anaeróbias) ou ainda serem anaeróbias facultativas. • São classificadas quanto a forma (morfologia), grau de agregação (arranjos) e espessura da parede celular. BACTERIOLOGIA • Citologia bacteriana • Membrana plasmática • Parede celular • Cápsula • Cromossomo (DNA bacteriano) • Plasmídeo (DNA extra-cromossômico) • Ribossomos • Grânulos de reserva • Flagelos • Fímbrias • Pili • Esporos BACTERIOLOGIA • Membrana Citoplasmática (80% proteínas, 20% lipídios) • Consiste principalmente de fosfolipídeos que são as substâncias químicas mais abundantes na membrana, e proteínas. Não possuem esteróis, e por isso são menos rígidas. • Funções : • Seletividade, digestão de nutrientes e na produção de energia – contêm enzimas capazes de catalisar as reações químicas que degradam os nutrientes e produzem ATP. • Algumas bactérias possuem invaginações na membrana plasmática (cromatóforos ou tilacoides) que contém pigmentos e enzimas envolvidas na fotossíntese – Fotossintetizantes. • Mesossomos – invaginações grandes e irregulares (artefatos e não estrutura), pode participar no processo de divisão celular e pode conter enzimas respiratórias. BACTERIOLOGIA • Parede celular • Estrutura complexa e semirrígida • Funções: • Da forma a célula bacteriana • Circunda a membrana plasmática protegendo-a das alterações adversas do meio externo • Previne a ruptura da célula bacteriana quando a pressão da água dentro da célula é maior que fora dela (principal função) • Contribui para que algumas espécies causem doenças • Local de ação de alguns antibióticos • Sítio de reação com anticorpos e proteínas do complementos • Sua composição química é usada para diferenciar os principais tipos de bactérias • Gram positivas e Gram negativas BACTERIOLOGIA • Composição e características da parede celular • Composta por peptideoglicanos ou também conhecida como mureína; • O peptideoglicano consiste em um dissacarídeo ligado por polipeptídeos para formar a parede celular • O dissacarídeo é composto por monossacarídeos denominados N- acetilglicosamina (NAG) e ácido N-acetilmurâmico (NAM) Dependendo da quantidade de camadas BACTERIOLOGIA • Parede celular de bactérias Gram-positivas • Consiste em muitas camadas de peptideoglicanos, formando uma estrutura espessa e rígida. • Contêm duas classes de ácidos: Ácido teicóico da parede e o ácido lipoteicóico que atravessa a parede e liga-se a membrana. • Funções: • Se ligam e regulam o movimento de cátions (íons positivos) para dentro e para fora da célula. • Também podem assumir um papel no crescimento celular, impedindo a ruptura extensa da parede e a possível lise celular. • Fornecem especificidade antigênica da parede e, portanto, tornam possível identificar bactérias gram-positivas utilizando determinados testes laboratoriais BACTERIOLOGIA • Parede celular de bactérias Gram-negativas • As paredes celulares das bactérias gram-negativas consistem em uma ou poucas camadas de peptideoglicano e uma membrana externa; • A camada de peptideoglicano liga-se a membrana externa através de lipoproteínas (estão localizadas no espaço periplasmático). • Periplasma: É semelhante a um gel, entre a membrana externa e a membrana plasmática. • Contém uma alta concentração de enzimas de degradação e proteínas de transporte. • BGN por possuírem somente uma pequena quantidade de peptideoglicano, são mais suscetíveis ao rompimento mecânico • Membrana externa da célula gram-negativa: consiste em lipopolissacarídeos (LPS), lipoproteínas e fosfolipídeos. • Funções especializadas: • Sua forte carga negativa é um fator importante na evasão da fagocitosee nas ações do complemento (causa lise de células e promove a fagocitose); • Também fornece uma barreira para certos antibióticos (p. ex., penicilina), enzimas digestivas como a lisozima, detergentes, metais pesados, sais biliares e certos corantes; • As porinas (proteínas transmembranares) permitem a passagem de moléculas como nucleotídeos, dissacarídeos, peptídeos, aminoácidos, vitamina B12 e ferro • Lipopolissacarídeo (LPS): É uma molécula grande e complexa que contém lipídeos e carboidratos e que consiste em três componentes: • Lipídeo A – é a porção lipídica do LPS e está inserido na parede superior da membrana externa. Quando bactérias gram-negativas morrem, elas liberam lipídeo A, que funciona como uma endotoxina. responsável pelos sintomas associados a bactérias gram- -negativas, como febre, dilatação de vasos venosos, choque e formação de coágulos sanguíneos. • Cerne polissacarídico: Seu papel é estrutural – fornecer estabilidade. • Polissacarídeo O: funciona como um antígeno, sendo útil para diferenciar espécies de bactérias gram- negativas. BACTERIOLOGIA • Paredes celulares atípicas • Entre os procariotos, certos tipos de células não possuem paredes ou têm pouco material de parede. • Gênero Mycoplasma: são as menores bactérias conhecidas. Devido ao seu tamanho e por não terem paredes celulares, passam através da maioria dos filtros bacterianos, tendo sido inicialmente confundidos com vírus. • São as únicas a possuírem na membrana plasmática lipídeos denominados de esteróis, os quais podem protege-las da lise (ruptura); • Arquibactérias: podem não ter a parede ou ter incomum – compostas de polissacarídeos e proteínas (mas não de peptideoglicano), denominada de pseudomureína. • Geralmente não podem ser coradas pelo gram, mas aparentam ser gram-negativas por não conterem peptideoglicano. BACTERIOLOGIA • Cápsula/ Glicocálice • Envoltório externo viscoso presente em algumas bactérias; • Composta de polissacarídeos • Dependendo da concentração (+ ou -) • Funções: • Antigênicas • Protege contra dessecamento • Reservatório de nutrientes • Evita a lise celular e absorção de bacteriófagos • Proteção contra a fagocitose • Permite adesão bacteriana a superfícies Cápsula: mais concentrada; polissacarídeo gelatinoso acoplado firmemente na parede celular Glicocálice: menos concentrada; material viscoso frouxo que circunda algumas bactérias. O glicocálice é um componente muito importante dos biofilmes: podem crescer em diversas superfícies, como pedras em rios com correnteza rápida, raízes de plantas, dentes humanos (S. mutans). BACTERIOLOGIA • Cromossomo bacteriano ou nucleoide • É uma grande fita de DNA circular e solto no citoplasma (sem carioteca) • Carrega todos os dados necessários para as estruturas e as funções celulares • O cromossomo está fixado à membrana plasmática • Acredita-se que proteínas na membrana plasmática sejam responsáveis pela replicação do DNA e pela segregação dos novos cromossomos para as células-filhas, na divisão celular. BACTERIOLOGIA • Plasmídeo • Pequena fita de DNA circular (Extracromossômico) • Replicam-se independentemente do cromossomo bacteriano • Não determinam características essenciais para a sobrevivência da bactéria • Confere vantagens a bactéria dependendo do tipo • Podem ser adquiridos ou perdidos sem causar dano à célula. • Tipos de plasmídeo e funções: • Plasmídeo R: resistência a antibióticos e metais pesados • Plasmídeo F: fertilidade bacteriana (conjugação) • Plasmídeos de virulência • Produção de toxinas • Síntese de enzimas BACTERIOLOGIA • Ribossomos • Todas as células eucarióticas e procarióticas contêm. • Função: Síntese de proteínas. • São compostos de duas subunidades (30s e 50s – denominados ribossomos 70S ), cada qual consistindo de proteína e de RNA ribossômico (rRNA). Células eucariontes – ribossomos 80s. • Vários antibióticos atuam inibindo a síntese proteica nos ribossomos procarióticos • Estreptomicina e a gentamicina fixam-se à subunidade 30S e interferem com a síntese proteica. • Eritromicina e o cloranfenicol, interferem na síntese proteica pela fixação à subunidade 50S. Devido às diferenças nos ribossomos procarióticos e eucarióticos, a célula microbiana pode ser morta pelo antibiótico enquanto a célula do hospedeiro eucariótico permanece intacta. BACTERIOLOGIA • Grânulos de reserva/ Inclusões • No citoplasma bacteriano existe varias inclusões (depósitos de reserva). As células podem acumular certos nutrientes quando eles são abundantes e usá-los quando estão escassos no ambiente • Grânulos metacromáticos: reserva de fosfato inorgânico que pode ser usada na síntese de ATP. São encontrados em algas, fungos e protozoários, bem como em bactérias. • Corynebacterium diphtheriae: agente causador da difteria. • Grânulos polissacarídico: compostas de glicogênio e amido. • Inclusões lipídicas: armazenamento de lipídeos (Mycobacterium, Bacillus, Azotobacter). • Grânulos de enxofre: Gênero Thiobacillus – obtêm energia oxidando o enxofre e compostos contendo enxofre. • Carboxissomos: inclusões que contêm a enzima ribulose-1,5-difosfato-carboxilase, enzima importante para as bactérias que fazem fixação de dióxido de carbono durante a fotossíntese. • Magnetossomos: são inclusões de óxido de ferro (Fe3O4). BACTERIOLOGIA • Flagelo bacteriano • Filamentos finos, proteicos e longos • Motilidade celular • Gira como o motor de um barco (360º) • Respostas flagelares: • Quimiotática – fugir de antibióticos • Fototática – fugir da luz ou ir ate a luz Esta ancorado à membrana citoplasmática e à parede celular por uma estrutura denominada de corpo basal, composta por: • 2 anéis – Bactérias Gram positivas • Parede celular • Membrana celular • 4 anéis – Bactérias Gram negativas • Anel C – Citoplasma • Anel MS – membrana plasmática • Anel P – parede celular • Anel L – Membrana Externa • Composição do flagelo: • Constituído por subunidades de flagelina (proteína), dispostas de maneira a formar uma estrutura cilíndrica. A proteína flagelar (antígeno H) é útil para diferenciar as variações dentro de uma espécie de bactérias gram- negativas. Por exemplo, existem no mínimo 50 antígenos H diferentes para a E. coli. BACTERIOLOGIA • Fímbrias • Apêndices semelhantes a pelos que são mais curtos, retos e finos que os flagelos (consistem em uma proteína denominada pilina). • Podem estar nos polos da célula bacteriana ou em toda sua superfície; • Elas podem variar em número, de algumas unidades a muitas centenas por célula. • Se aderem a superfícies (envolvidas na formação de biofilmes) • Estrutura fundamental no processo de adesão. • Ex. Neisseria gonorrhoeae, o agente causador da gonorreia, auxiliam a bactéria a colonizar as mucosas. BACTERIOLOGIA • Pili sexual • São mais longos que as fímbrias, e há apenas um ou dois por célula; • Estão envolvidos na mobilidade celular (translocação bacteriana) • Transferência de DNA: Conjugação • Nesse processo, o pili sexual de conjugação de uma bactéria chamada de célula F+ conecta- se ao receptor na superfície de outra bactéria (F-) de sua própria espécie ou de espécies diferentes. As duas células fazem contato físico, e o DNA da célula F+ é transferido para a outra célula (F-). • O DNA compartilhado pode adicionar uma nova função à célula receptora, como a resistência a um antibiótico ou a habilidade de degradar o seu meio com mais eficiência. BACTERIOLOGIA • Endosporos • Quando os nutrientes essenciais se esgotam (nutrientes chaves – fontes de carbono ou nitrogênio), certas bactérias gram-positivas como as dos gêneros Clostridium e Bacillus formam células especializadas de “repouso”, denominadas endosporos. • Os endósporos são células desidratadas altamente duráveis, com paredes espessas e camadas adicionais. Eles são formados dentro da membrana celular bacteriana. • Podem sobreviver a temperaturas extremas, falta de água e exposição a muitas substâncias químicas tóxicas e radiação • Formaçãodo endosporo: denominado de esporulação ou esporogênese, podendo levar varias horas. Capa de proteína se forma em torno de toda a membrana externa. Esse revestimento é responsável pela resistência dos endosporos a muitas substâncias químicas agressivas BACTERIOLOGIA A maioria das bactérias varia de 0,2 a 2,0 μm de diâmetro e de 2 a 8 μm de comprimento. BACTERIOLOGIA • Coloração de Gram • Foi desenvolvida em 1884 pelo bacteriologista dinamarquês Hans Christian Gram. Ela é um dos procedimentos de coloração mais úteis, pois classifica as bactérias em dois grandes grupos: gram-positivas e gram-negativas. • Corantes: • Cristal violeta • Iodo/lugol • Álcool • Safranina/ Fucsina • Lâmina de vidro – esfregaço BACTERIOLOGIA O cristal violeta e o iodo penetram facilmente as células gram-positivas e gram-negativas (ambas coram de roxo) . Dentro das mesmas, o cristal violeta e o iodo se combinam para formar o complexo CV-Iodo. Esse complexo é maior que a molécula de cristal violeta, e devido a isso não é removido pelo álcool nas bactérias GRAM POSITIVA. GRAM NEGATIVA: o álcool rompe a camada externa de lipopolissacarídeo, e o complexo CV-I é removido através da camada delgada de peptideoglicano. Ficando incolores e posteriormente sendo coradas pela Safranina/ Fucsina de ROSA. BACTERIOLOGIA BACTERIOLOGIA • Coloração de Ziehl-Neelsen/ Coloração álcool-ácido resistente • Utilizada para identificar todas as bactérias do gênero Mycobacterium • Mycobacterium tuberculosis, o agente causador da tuberculose, e • Mycobacterium leprae, o agente causador da lepra. • Gênero Nocardia sp. • Micobactérias: • Bacilos finos • Possuem grande quantidade ácidos graxos (chamados de ácido micólico) • Bactérias intracelulares obrigatórias. Corante vermelho carbolfucsina FIM
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