Imunofluorescência: Mecanismo de Agressão e Defesa

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IMUNOFLUORESCÊNCIA
MECANISMO DE AGRESSÃO E DEFESA II
CARACTERÍSTICAS DA IMUNOFLUORESCÊNCIA
A imunofluorescência permite:
 A detecção e localização de antígenos em células e tecidos utilizando anticorpos específicos, marcados com fluorocromos.
 A localização dos antígenos se torna visível ao microscópio de fluorescência.
 Se pode detectar e localizar anticorpos em fluidos biológicos usando seu antígeno correspondente.
 Método de alta sensibilidade e alta especificidade.
 FLUOROCROMOS
 Na imunofluorescência são empregados JUNTOS compostos de anticorpos ligados covalentemente a moléculas reveladoras denominadas fluorocromos
 Fluorocromos são substâncias que absorvem luz ultravioleta e emitem luz visível, ou seja, ficam fluorescentes.
 Isotionato de fluoresceína e compostos da rodamina são os fluorocromos mais usados para conjugação com anticorpos
MICROSCÓPIO DE EPIFLUORESCÊNCIA
 Reação imunofluorescente é desencadeada no microscópio de epifluorescência através da emissão de luz de cor pela excitação do fóton por luz de curto comprimento de onda (UV).
 Para deixar passar somente a emissão secundária desejada, devem-se utilizar filtros apropriados dependendo da cor do fluorocromo.
‘’MICROSCÓPIO DE EPIFLUORESCÊNCIA’’
VALOR: R$ 22.000.00
TIPOS DE IMUNOFLUORESCÊNCIA 
Esta técnica é utilizada para detectar:
 Vírus, parasitas, antígenos de tumor em amostras clinicas como: fezes, urina, secreções, utilizando um anticorpo marcado com fluorocromos.
 Em bacteriologia, um dos poucos métodos de IFD ainda usados em laboratório clínico é a identificação do Streptococcus do grupo A.
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA 
‘’Glomerulonefrite pós ‐ infecciosa analisada por Imunofluorescência’’ Padrão de guirlanda
ETAPAS DA PREPARAÇÃO
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA 
FIXAÇÃO DO ESFREGAÇO NA LAMINA
TRATAMENTO COM ANTICORPO MARCADO
INCUBAÇÃO
LAVAGEM PARA REMOVER O EXCESSO DOS QUE NÃO SE LIGARAM
VISUALIZAÇÃO NO MICROSCOPIO DE IMUNOFLUORESCÊNCIA 
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA 
ILUSTRAÇÃO
Y
Y
Y
Y
Y
Conjugado
Antígeno Pesquisado 
 O anticorpo específico marcado com Fluorocromo (conjugado) é adicionado e se fixa ao antígeno, formando um imunocomplexo estável.
Lâminas para imunofluorescência
VANTAGENS e DESVANTAGENS
VANTAGENS
Alta especificidade 
Possibilidade de detecção de proteínas intracelulares e de sua localização.
IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA 
DESVANTAGENS
Alto custo do microscópio de fluorescência
Necessidade de um conjugado para cada antígeno 
Subjetividade de leitura
TIPOS DE IMUNOFLUORESCÊNCIA 
Esta técnica é utilizada para detectar:
 Varias doenças infecciosas como a doença de chagas, a AIDS, as hepatites e complexos em doenças auto-imunes.
 Este teste é feito no soro do paciente por meio de antígenos fixados em uma lamina.
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA 
‘’DOENCA DE CHAGAS TRIAGEM E DIAG’’ Fonte: Ministério da Saúde 1998 
ETAPAS DA PREPARAÇÃO
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA 
ANTÍGENOS PADRONIZADOS SÃO FIXADOS NA LAMINA DE VIDRO
SORO DO PACIENTE É DILUIDO , COLOCANDO SOBRE O ANTÍGENO E INCUBADO PARA FORMAÇÃO DO COMPLEXO ANTÍGENO-ANTICORPO
LAVAGEM PARA RETIRADA DOS ANTICORPOS NÃO LIGADOS
PREPARAÇÃO INCUBADA COM O CONJUGADO FLUORESCENTE 
VISUALIZAÇÃO NO MICROSCOPIO DE IMUNOFLUORESCÊNCIA 
Y
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA 
PESQUISA DE ANTICORPOS ILUSTRAÇÃO
Y
Y
Y
Y
Conjugado
Antígeno Pesquisado 
 Antígenos padronizados são fixados a lâminas de vidro.
 Soro do paciente é diluído e colocado sobre o antígeno e incubado para a formação do complexo antígeno-anticorpo
 A preparação é incubada com o conjugado fluorescente e, se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo específico para o antígeno.
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Anticorpo pesquisado
Y
PESQUISA DE ANTICORPOS
Y
(Retirado na lavagem da lamina) 
Y
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA 
PESQUISA DE ANTÍGENOS ILUSTRAÇÃO
Y
Y
Y
Y
Conjugado
Antígeno Pesquisado 
 Incubação da célula com o anticorpo especifico obitido em animal ou monoclonal para formação do imunocomplexo
 Preparação é incubada com um conjugado anti imunoglobulina, marcado com fluorocromo, produzido em outra espécie de animal.
 Observação em microscópio de fluorescência
Y
Y
Y
Y
Y
Y
Anticorpo Monoclonal
Y
PESQUISA DE ANTÍGENOS
(Retirado na lavagem da lamina) 
VANTAGENS
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA 
SENSIBILIDADE
ESPECIFICIDADE
 SIMPLES PADRONIZAÇÃO E EXECUÇÃO
O MESMO CONJUGADO PODE SER USADO EM SISTEMAS DIFERENTES
CONJUGADOS ESPECÍFICOS PARA DETERMINAR AS CLASSES E SUBCLASSES DE ANTICORPOS
DESVANTAGENS
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA 
NECESSIDADE DE MICROSCÓPIO DE FLUORESCÊNCIA
NÃO-AUTOMAÇÃO 
 SUBJETIVIDADE NA LEITURA
APLICADA IMAGENS
IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA 
‘’Reação de Imunofluorescência indireta (RIFI) para o diagnóstico da Neospora caninum.’’ (bovinos)
‘’Reação de Imunofluorescência indireta (RIFI) para o diagnóstico da Leishmaniose.’’ (cão)
AVANÇOS RECENTES DA IMUNOFLUORESCÊNCIA
Revista Integrada de Ciências Farmacêuticas e Saúde Junho de 2019
CONCLUSÕES
devido, principalmente á subjetividade de leitura, impossibilidade de automação e a necessidade do microscópio de fluorescência, essa técnica está cada vez menos sendo utilizada sendo substituída por testes imunoenzimaticos 
Mas continua sendo uma importante ferramenta para a analise de antígenos nos tecidos ou em suspensões celulares
REFERÊNCIAS
 
1. REPIZO, L P & SANTOS, R R S.2017 Glomerulonefrite pós ‐ infecciosa
 
2. Doença de Chagas – Triagem e diagnóstico sorológico em unidades hemoterápicas e laboratórios de saúde público. – Brasília: Ministério da Saúde, Coordenação Nacional de Doenças Sexualmente Transmissíveis e Aids. 1998. 76. p. : il (Série TELELAB) 
3. SILVA, A, A, B. 2010 universidade federal da bahia instituto de ciências da saúde – departamento de biointeraçãodisciplina: imunologia imunofluorescência
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