Sorologia HIV, carga viral e CD4

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Carolina Marques
Sorologia HIV, carga viral e CD4
Visão geral → INFECÇÃO 
HIV
· No hiv a princípio temos a fase aguda na qual: (até 12 semanas)
↓CD4
↑ Carga Viral
↓Anticorpos 
· Na fase crônica temos: (primeiros 5 anos)
		 ↓ CD4 (Plato)
↓Carga Viral (Plato)
↑ Anticorpos (Plato)
· Na AIDS:
		 ↓CD4
↑Carga Viral
↓Anticorpos 
Fluxogramas de testagem → Diagnosticos
· Fluxograma 1 
Dois testes rápidos (TR1 e TR2) realizados em sequência com amostras de sangue 
· Fluxograma 2
Um teste rápido por fluido oral seguido por um teste rápido utilizando sangue 
· Fluxograma 3
Triagem com imunoensaio de 4ª geração e Teste molecular (Carga viral ( ou caso necessário, Teste complementar confirmatório) 
 
· Fluxograma 4
Triagem com imunoensaio de 3ª geração e Teste molecular como Teste complementar/confirmatório 
· Fluxograma 5
Triagem com imunoensaio de 3ª geração e Western Blot, Immunoblot ou IB Rápido como Teste complementar/confirmatório 
AVALIAÇÃO LABORATORIAL
SOROLOGIA: PESQUISA DE INFECÇÕES ATRAVÉS DOS ANTICORPOS IgG E IgM 
· Estima-se que de 50-60% dos portadores de HIV não sabem do diagnóstico. Esse atraso ocorre, muitas vezes, por desinformação ou preconceitos com relação ao HIV. 
· 1 em cada 2 pessoas que faz diagnóstico do HIV possui o vírus no organismo há pelo menos 3 meses. Entre os homens heterossexuais, o problema é ainda maior: 
· Metade dos homens heterossexuais com HIV fazem o diagnóstico 5 anos ou mais após terem se infectado. Isso só aumenta o risco de transmissão a outras pessoas. 
· Cerca de 40% das transmissões são feitas a partir de pessoas que não sabem de seu diagnóstico.
Conceitos importantes para diagnóstico sorológico
Falhas e erros no diagnóstico 
• Variações genéticas 
• Indivíduos imunosilenciosos (níveis baixou ou ausência de Ac específicos) 
• Controladores de Elite e indivíduos em tratamento com ARV 
• Erros na execução dos testes 
• Troca de amostra 
SOROLOGIA: PESQUISA DE INFECÇÕES ATRAVÉS DOS ANTICORPOS IgG E IgM 
• Diagnosticar patologias nos estágios iniciais 
• Médico consegue indicar o tratamento mais adequado, aumentando as chances de cura e amenizar os sintomas. 
• Maneira indireta de atuar no combate do contágio
Tratamento anti-retroviral
→ O objetivo do tratamento anti-retroviral é ter uma carga viral muito baixa (indetectável) e uma contagem de células CD4+ alta
Existe uma grande variabilidade inter e intra-individual A decisão de tratamento se baseia em dados clínicos e laboratoriais
O tratamento está indicado para todos os indivíduos com diagnóstico de HIV, independente da carga viral e contagem de CD4
Carga Viral
A quantificação de partículas virais plasmáticas (carga viral) avalia a imensidade da infecção. É considerada o marcador laboratorial mais adequado para o monitoramento da resposta terapêutica aos antirretrovirais, para a predição da progressão da doença e para predição do prognóstico de indivíduos infectados.
Carga viral – PCR em tempo real – Real Time PCR
PCR em tempo real – SyBr Green 
PCR em tempo real – Taq Man (sondas) 
PCR em tempo real
· No diagnóstico: A técnica de PCR qualitativa é empregada para: 
• Detectar o HIV-1 antes da soroconversão (no período de janela; 3 a 8 semanas após o contagio) 
• Fazer a confirmação de um teste de triagem reagente ou um Western Blot indeterminado 
• Avaliar a presença da infecção em crianças de mães portadoras do vírus HIV
→ Com o progresso da doença, o vírus se replica e a carga viral aumenta: Medida da carga viral dá ao médico: 
• Indicação da evolução da doença e da velocidade de replicação do vírus 
• Indicação de tratamento (juntamente com CD4+) (antigamente) 
• Quando deve ser pesquisada a resistência aos medicamentos e quando deve ser modificado o tratamento 
• Tratamento: diminuir a carga viral até níveis indetectáveis (não erradica completamente o vírus)
· CD4+
Patogênese da infecção pelo HIV está diretamente associada à diminuição do número de células T CD4+ 
Depleção progressiva dessas células associa-se à maior gravidade da doença e a prognóstico desfavorável
· AIDS
Período assintomático da infecção: a taxa média de declínio das células T CD4+ é de cerca de 50/μL. 
Quando a contagem de células T CD4+ diminui a menos de 200/μL, o estado de imunodeficiência resultante é suficientemente grave para colocar o paciente sob risco alto de infecções oportunistas e neoplasias e, desse modo, de desenvolver doença detectável clinicamente
Linfócitos CD4+ 
Papel importante na identificação, no ataque e na destruição de bactérias, fungos e vírus
Citometria
Leucócitos do sangue periférico são incubados com anticorpos monoclonais anti CD4, CD8 e CD3 marcados com diferentes fluorocromos. Posteriormente, a suspensão celular é analisada em citômetro de fluxo, que é capaz de identificar as diferentes populações linfocitárias de acordo com a fluorescência emitida pelos diferences fluorocromos após excitação com luzlaser.
Gráficos (dot plot) analisados por citometria de fluxo provenientes de dois pacientes HIV positivos (A e B) com diferentes números de contagem de células CD4 positivas
· CD4+ CD4
Leucócitos do sangue periférico são incubados com anticorpos monoclonais anti CD4, CD8 e CD3 marcados com diferentes fluorocromos. Posteriormente, a suspensão celular é analisada em citômetro de fluxo, que é capaz de identificar as diferentes populações linfocitárias de acordo com a fluorescência emitida pelos diferences fluorocromos após excitação com luzlaser.
MÉTODOS IMUNOLÓGICOS NA ANÁLISE LABORATORIAL
HIV – ELISA - Imunoensaios (IE)
HIV – Testes complementares
· Western blot (WB); 
· Imunoblot (IB); 
· Imunofluorescência indireta (IFI);
Imunoblot (IB) : Proteínas recombinantes ou peptídeos sintéticos impregnados diretamente em membranas