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RNA Caracterizar o RNA (tipos e funções) do tRNA, mRNA, RNA ribossômico e RNAi. O RNA é feito por meio da junção de ribonucleotídeos livres, que são moléculas compostas por um grupo fosfato e uma ribose associada com uma base nitrogenada, adenina, guanina, citosina e uracila. Essa ligação entre ribonucleotídeos livres corresponde a uma ligação fosfodiéster. O RNA é transcrito mediante a uma fita única de DNA e é uma fita única. É capaz de catalisar reações biológicas. (riboenzimas). RNA mensageiro é intermediário entre o DNA e a proteína. É transcrito através do DNA e é um intermediário necessário para a expressão gênica, ou seja, para a síntese de uma proteína que é produto final e influencia o fenótipo. RNA funcionais são o próprio produto funcional final. tRNA transportador é o responsável por levar o aminoácido correto para o mRNA no processo de tradução. rRNA ribossômico é o principal componente do ribossomos, que são macromoléculas condutoras da montagem da cadeia de aminoácidos. snRNA pequenos e RNA nucleares são parte de um sistema que processa os RNA transcritos nas células eucarióticas. Alguns formam os spliceossomos, que removem os íntrons dos rRNA eucarióticos. RNA que suprimem a expressão gênica e mantém a estabilidade do genoma. RNA de interferência miRNA microRNA regula a quantidade de proteínas produzidas por muitos genes eucarióticos siRNA RNA de interferência e piRNA RNA de interação piwi ajudam na proteção da integridade dos genomas. O siRNA inibe a produção de vírus, e ele junto com o piRNA impedem a transposição de elementos para outros loci cromossômicos. xistRNA RNA de inativação do cromossomo X Atividade gênica é inativada e a cromatina fica compactada, formando o corpúsculo de Barr. teRNA RNA da telomerase Recupera o DNA telomérico perdido durante as divisões nas células germinativas. * São codificados por um pequeno número de genes. polRNA Responsável pela síntese dos diversos tipos de RNA. RNA II sintetiza o RNAm, miRNA e maioria dos pnRNA. RNA I sintetiza o RNA45S. RNA III sintetiza o RNA5S, os tRNA e o pcRNA e alguns pnRNA. Compreender transcrição e seus estágios A transcrição é a síntese de RNA com molde numa fita de DNA, isso ocorre por meio da união de nucleotídios U, C e G, que são alinhados devido a sua complementariedade. RNA → DNA A → T U → A C → G G → C As ligações são não covalentes entre o DNA e o RNA em formação, e os nucleotídios são sintetizados e formam a ligação fosfodiéster, C5 da ribose se liga ao C3 da ribose seguinte, dessa forma é sempre 5’ com um fosfato em sua extremidade e uma hidroxila na sua extremidade 3’, essas ligações são catalisadas por RNA polimerases. → Somente a cadeia 3’→5’ é transcrita. → Apenas um segmento da cadeia de DNA, de cerca de 10 pares de nucleotídios, são separados, formando uma “bolha de transcrição”. → O RNA traduzido corresponde em polaridade e na sequência de nucleotídios à cadeia 5’→ 3’ do DNA (sentido de transcrição). → A sequência do gene é definida pela sua cadeia 5’→ 3. 1) O promotor do gene liga-se à RNA polimerase e faz com que o DNA interaja no sítio em que a transcrição deve ter início. 2) A RNA polimerase forma uma “bolha”, pois separa de forma localizada duas cadeias do DNA. 3) Estabelecimento de uma ligação não covalente com a base do nucleotídeo do DNA com uma base complementar e o nucleosídeo. 4) RNA polimerase propicia uma ligação fosfodiéster entre dois nucleotídeos. 5) Alongamento progressivo do RNA, através do deslizamento da RNA polimerase na direção 5’→ 3’, avançando a bolha 6) Encerra a transcrição ao fim do gene (ponta 3’), a enzima se desprende, assim como o RNA que passa a se chamar transcrito primário. Processamento do RNA O transcrito primário é um segmento de RNA com segmentos sem função aparente, como íntrons e espaçadores. Ao processar o transcrito primário, é removido esses segmentos não utilizáveis. Remoção dos íntrons (sequência no codificante) e acréscimo de estruturas denominadas cap (5’) e poliA(3’). Algumas adeninas são metiladas (é adicionado o grupo metil). * São alterações necessárias para que os mRNA saim do núcleo e funcione no citosol. - Cap (capuz) é um nucleotídio metilado que se liga ao nucleosídeo da extremidade 5’. Entre os nucleotídios se estabelece uma ligação trifosfato entre o C5’ de duas pentoses. * Sua incorporação é cotranscricional. * O cap evita a degradação da extremidade 5’ por fosfatases ou nucleases e é requerido durante a remoção dos íntrons, além de necessário para conectar o mRNA ao ribossomo no início da tradução. - Poliadenilação é a adição de aproximadamente 250 adeninas na extremidade 3’ do mRNA. Fatores específicos (CPSF, CSTF, CFI e CFII) reconhecem no transcrito primário uma sequência denominada sinal de poliadenilação formada pelos nucleotídios AAUUAAA. Um deles corta o mRNA cerca de 20 nucleotídeos após o sinal de poliadenilação, desligando-se do DNA. O restante do gene é transcrito até a sequência de finalização. É degradado, pois não tem o cap. Assim, uma enzima denominada poli A polimerase une as 250 adeninas à sua extremidade 3’. * Protege a extremidade 3’ do mRNA da degradação enzimática e ajuda o mRNA a sair do núcleo. * mRNA das histonas não sofre esse processo, mas desenvolve um arco que também o protege. - A remoção dos íntrons 1) mRNA é recortado entre os íntrons e os éxons. As pnRNP (U1, U2, U4, U5 E U6) formam um complexo denominado spliceossoma. 2) Os íntrons são expulsos GU início do íntron e AG término do íntron (devem ser complementados) A é o ponto de ramificação. 3) Éxons emendam-se entre si - U1 une-se à extremidade 5’ do íntron e a U2 ao ponto de ramificação. Essa última etapa é dependente de ATP. A U1 corta o RNA entre a extremidade 3’ do éxon e o GU da extremidade 5’ do íntron. Após o corte, o íntron dobra-se sobre si mesmo e forma uma alça. Ao final dessa etapa, de um lado, o primeiro éxon com sua extremidade 3’ livre e do outro uma alça composta pelo íntron e éxon seguintes. - U5 (também requer energia). Essa ribonucleoproteínas, corta-o no local em que se une ao éxon e emenda esse éxon ao outro separado na etapa anterior. * Não exige que exista a poliadenação. * Só sai da carioteca se for removido todos os íntrons. Definir o silenciamento gênico. RNA de interferência É um processo molecular que envolve o bloqueio de genes específicos e, provavelmente, está envolvido no sistema genético de defesa contra vírus e ácidos nucleicos invasores. SILENCIAMENTO GÊNICO: CONCEITOS, APLICAÇÕES E PERSPECTIVAS EM PLANTAS LENHOSAS Amancio José de Souza
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