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APS TECNOLOGIA GENÉTICA: DIAGNÓSTICO MOLECULAR E BIOINFORMÁTICA
A técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction – Reação em Cadeia da Polimerase) é atualmente amplamente utilizada para o sequenciamento de genes e diagnóstico de doenças hereditárias, identificação de impressões digitais do material genético e detecção e diagnóstico de doenças infecciosas. Por ser um método direto de alta sensibilidade, a reação em cadeia de polimerase está sendo considerada uma grande aliada na detecção de doenças infecciosas. Sua versatilidade, que permite a aplicação em diversos materiais biológicos, aliada à rapidez de análise é outro diferencial da técnica (http://www.cjflash.com.br/cace/informe,biologia-molecular-porpcr,7.html).
ATIVIDADE 1: Assista os vídeos disponíveis nos links
PCR:https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcrelectrophoresis/v/the-polymerase-chain-reaction-pcr
Eletroforese:https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcrelectrophoresis/v/gel-electrophoresis-dna
ATIVIDADE 2: Leia os textos disponíveis nos links
Reação em cadeia da polimerase:
https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dnasequencing-pcr- electrophoresis/a/polymerase-chain-reaction-pcr
Eletroforese em gel: https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencing-pcrelectrophoresis/a/gel-electrophoresis
Sequenciamento de DNA: https://pt.khanacademy.org/science/biology/biotech-dna-technology/dna-sequencingpcr- electrophoresis/a/dna-sequencing
ATIVIDADE 3: O aluno deverá copiar as questões abaixo, colar num documento de preferência, e responder qual a reposta correta.
1- Qual seria o fluxo em um laboratório de biologia molecular para se obter o resultado de um paciente que está realizando uma pesquisa de bactéria por PCR?
A) Extração de DNA --> PCR --> Eletroforese
B) Eletroforese --> PCR --> Extração de DNA
C) PCR --> Eletroforese --> Extração de DNA
D) Eletroforese --> Extração de DNA --> PCR
E) PCR --> Extração de DNA --> Eletroforese
Resposta correta A: Primeiro fazemos a extração do DNA, em seguida é utilizada a técnica do PCR e depois a Eletroforese.
2- A reação da PCR consiste em amplificar um fragmento (região específica) de DNA milhões de vezes, para que isso ocorra precisamos preparar a reação previamente. Que reagentes são necessários para a montagem de uma reação de PCR?
A) água, buffer, MgCl, DNTPs, Taq polimerase, primers e DNA
B) água, buffer, helicase, DNTPs, Taq polimerase, primers e DNA
C) água, buffer, Mgcl, DNTPs, DNA polimerase, primers e DNA
D) água, buffer, helicase, DNTPs, DNA polimerase, primers e DNA
E) água, buffer, primase, DNTPs, Taq polimerase, primers e DNA
Resposta correta A: Àgua, buffer, MgCl, DNTPs, Taq polimerase, primers e DNA
3- Qual é o propósito para o qual a PCR é usado?
A). Analisar a expressão gênica do DNA
B). Extrair o DNA de células
C). Amplificar em fragmento específico de DNA
D). Fazer todo o processo de replicação igual a célula
E). Analisar o tRNA presentes nas células
Resposta correta C: Amplificar em fragmento específico de DNA
4- O que acontece com o DNA quando o termociclador atinge a temperatura de 90-95 ° C por 30 segundos no primeiro passo da PCR?
A). Os primers se ligam na fica única de DNA
B) A taq polimerase sintetiza as novas fitas do DNA, utilizando os nucleotídeos provenientes da DNTP
C). Ocorre a desnaturação de proteínas
D). As fitas de DNA se separam
E). Ocorre a renaturação da molécula de DNA
Resposta correta D; As fitas de DNA se separam
5- As seguintes etapas constituem a reação em cadeia da polimerase (PCR), onde milhões de cópias do fragmento de DNA que se quer amplificar são gerados.
I. Desnaturação do DNA genômico (94ºC, 30s).
II. Anelamento dos iniciadores no DNA genômico (55-65ºC, 30s).
III. Desnaturação do DNA genômico (94ºC, 5min).
IV. Síntese do DNA pela polimerase (72ºC, 2-5 min).
A sequência correta da reação apresentada está na opção:
A) I - II - III - IV
B) III - II - IV- I
C) II - I - IV- III
D) IV - I -III-II
E) III - I - II - IV
Resposta correta A; I-II-III-IV