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As colorações simples, diferenciais ou estruturais, mesmo se combinadas com diferentes tipos de cultivo e observação das características das colônias, não são, em muitas das vezes, suficientes para a identificação de bactérias isoladas. Desta forma, devemos lançar mão de outras técnicas ou metodologias que, combinadas com as outras características descritas anteriormente, possibilitem determinar com precisão qual a bactéria com que se está trabalhando e/ou pesquisando. Crescimento ou inibição das bactérias nos meios de cultura Alguns grupos de bactérias crescem em diferentes meios de cultura utilizados na rotina laboratorial e outras não apresentam crescimento, sendo esse o primeiro passo para a identificação do microrganismo. Características morfológicas das colônias nos diferentes meios Após análise do crescimento nos diferentes meios de cultura empregados, devemos observar as características das colônias nesses meios. Quanto ao tamanho: Grande: maior que 1mm de diâmetro (Klebsiella pneumoniae). Média: 1mm de diâmetro (Enterococcus faecalis). Pequena: menor que 1mm de diâmetro (Streptococcus pyogenes). As bactérias também podem ser classificadas quanto á aparência na cultura: Densidade: Transparente: é possível ver através da colônia. Opaca: não é possível ver através da colônia. Translúcida: é possível ver através da colônia somente com luz passando através da colônia. Consistência: Visualizada quando pegamos uma colônia com alça ou fio bacteriológico – (amanteigada), pegajosa, seca, mucoide e quebradiça. Coloração: Cinza, branca, amarela, rosa, esverdeada, alaranjada, negra, incolor, creme e etc. Aparência da superfície da colônia: Rugosa, granular, embaçada, cremosa, brilhante. Reações das diferentes bactérias nos meios de cultura Hemólise: O meio de ágar sangue é utilizado principalmente para isolar cocos gram-positivos, já que alguns produzem lise das hemácias presentes no meio de cultura. A hemólise é classificada como parcial, total ou ausência de hemólise. Total (Beta-hemólise) – Representada por uma zona clara ao redor das colônias ou ao remover a colônia a hemólise total é visualizada. Parcial (Alfa-hemólise) – Há formação de um halo esverdeado em volta da colônia, indicando hemólise parcial das hemácias. Ausência de hemólise (Gama-hemólise) – O meio permanece íntegro em volta das colônias. Produção de Odor O odor produzido por muitas bactérias em determinados meios de cultura é característico e utilizo em microbiologia para diferenciar algumas espécies. Não cheirar diretamente a placa, abrir a placa na distância do braço estendido e sentir o odor que emana. Odor de uva: Pseudomonas aeruginosa. Odor de fermento de pão: Klebsiella pneumonie e Candida spp. Odor de vinagre: Escherichia coli. Odor de queijo: Staplyloccocus aureus. Odor de peixe: Acinetobacter spp. Odor de carniça: Proteus spp. Identificação das colônias a partir de testes manuais específicos ➢ Que tipo de substrato a bactéria utiliza? ➢ Que tipo de enzima a bactéria produz? ➢ Qual é o produto do metabolismo das bactérias? ➢ A bactéria necessita de substâncias especiais para o crescimento? Dentro dos inúmeros testes bioquímicos podemos citar a utilização de citrato como fonte de carbono por algumas enterobactérias, a produção de urease que degrada o meio contendo ureia, ou a produção de gás pela bactéria quando em um meio contendo glicose.
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