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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO – UFRJ Prática 4 – Visualizações microscópicas Rio de Janeiro 2020 1 INTRODUÇÃO A técnica de coloração de Gram faz a separação das bactérias em dois grandes grupos: As gram-positivas (gram +) e as gram-negativas (gram -). Esse método de coloração é amplamente utilizado para identificação de bactérias, porem é mais utilizado para bactérias em fase de crescimento. O princípio da técnica está baseado na diferença de composição da parede celular de diferentes bactérias e na capacidade que essa parede apresenta de reterem os corantes utilizados. Sendo assim, as bactérias gram-positivas possuem uma parede celular mais espessa que as bactérias gram-negativas. O cristal violeta é responsável pela formação de um complexo com compostos que se ligam a parede celular das bactérias gram +, que apresentam na sua composição magnésio e ácidos ribonucleicos. A ligação complexa forma é difícil remoção. 2 OBJETIVO O objetivo da prática experimental é analisar em microscópio óptico as seguintes bactérias: Staphylococcus aureus; Escherichia coli; Bacillus subtillis; Streptomyces spp. 3 PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL A primeira bactéria analisada foi a Staphylococcus aureus que através da coloração de Gram foi possível observar que é uma bactéria gram-positiva e pela análise em microscópio com o aumento de 1000x, notou-se que é uma bactéria em formato de cacho com forma similar a cachos de uva. Figura 1: Microscopia de Staphylococcus aureus A segunda bactéria analisada foi a Escherichia coli que através da coloração de gram, pode-se concluir que é uma bactérias gram-negativa, pois apresenta uma coloração vermelho-rosáceo em sua região central e com a utilização de microscópio foi observado que essa bactéria apresenta formato de bastão – é um bactéria em forma de coco-bacilo. Figura 2: Microscopia de Escherichia coli A terceira bactéria analisada foi a Bacillus subtillis que é uma bactéria gram- positiva, pois através do teste de coloração de Gram foi possível observar que as estruturas da bactéria encontravam-se coradas apenas na borda, e em forma de elipsodois – são os endósporos, que não se coram pela coloração de gram. Por meio da microscopia foi observado que essas bactérias apresentam formato de bastonete (bacilo) e são produtoras de endosporo. Figura 3: Microscopia de Bacillus subtillis Por fim foi analisada a bactéria Streptomyces spp. que é uma actinobactéria que é uma bactéria filamentosa, no entanto, a observação da célula filamentosa em microscópio é bem difícil. Por meio da coloração de gram foi mostrada uma coloração roxa, demonstrando dessa forma que são bactérias gram-positivas, por meio do microscópio é notada a presença de cadeia de esporos (aglomerados) que são características marcantes de Streptomyces. No entanto, observaram-se áreas rosácea-avermelhadas, demonstrando assim que não ocorreu a homogeneização ideal e dessa maneira há alteração na cor e podem ser obtidos resultados falso positivos ou falso negativos. Figura 4: Microscopia de Streptomyces spp. 4 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS VERMELHO, A. B.; PEREIRA, A. F.; COELHO, R. R. R.; SOUTO-PADRÓN, T. C. B. Práticas de Microbiologia. Editora Guanabara Koogan. Disponível em: <https://farmatecaunicatolica.files.wordpress.com/2017/12/prc3a1ticas- de-microbiologia-vermelho.pdf>. Acesso dia 09/10/2020. Disponível em: <http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont/Staphylococcus_aureus.ht ml>. Acesso dia 09/10/2020. Disponível em: <https://www.luciacangussu.bio.br/atlas/escherichia- coli/>. Acesso dia 09/10/2020. Disponível em: <https://www.sciencephoto.com/media/10904/view>. Acesso dia 09/10/2020. Disponível em: <http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont/Streptomyces.html>. Acesso dia 09/10/2020. https://farmatecaunicatolica.files.wordpress.com/2017/12/prc3a1ticas-de-microbiologia-vermelho.pdf https://farmatecaunicatolica.files.wordpress.com/2017/12/prc3a1ticas-de-microbiologia-vermelho.pdf http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont/Staphylococcus_aureus.html http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont/Staphylococcus_aureus.html https://www.luciacangussu.bio.br/atlas/escherichia-coli/ https://www.luciacangussu.bio.br/atlas/escherichia-coli/ https://www.sciencephoto.com/media/10904/view http://fundacionio.org/img/bacteriology/cont/Streptomyces.html
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