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Gnotobiologia Definições: ● Gnotobiótico GNOTOS ( bem conhecido) BIOTA (formas de vida associada) ● Animal Gnotobiótico: Possui microbiota associada conhecida Vive em ambiente controlado Ramo da ciência que estuda animais de laboratório como modelos e reagentes biológicos cuja formas de vida associadas são conhecidas. Padrão sanitário dos animais: ● CONVENCIONAIS – Sem barreiras ● MONITORADOS – Barreiras de baixa segurança ● SPF: livres de patógenos específicos – barreiras eficientes ● AXÊNICO (GERMFREE): livres de microbiota associada – mantidos em isoladores ● GNOTOBIÓTICO: com microbiota associada definida – mantidos em isoladores Objetivos da Gnotobiologia: Obtenção, manutenção e reprodução de animais livres de patógenos em biotério para pesquisa biológica; Elucidação das inter-relações entre o hospedeiro e microbiota associada; Eliminação da interferência da microbiota no estudo de fenômenos biológicos. Obtenção dos animais Gnotobióticos: A obtenção de animais livres de patógenos ocorre por Histerectomia. ● histera, matriz, útero; ● ektome, Excisão Objetivos: ● Eliminação da maioria dos patógenos de animais que apresentam transmissão horizontal. ● Útil para obtenção de colônias livres patógenos Por repetição do processo Princípio: ● O ambiente uterino é estéril ● Maioria dos patógenos não sofrem transmissão transplacentária ● Remoção dos fetos em ambiente estéril vai mantê-los ● sem contaminação externa Adoção por matrizes de alto padrão sanitário Isolador: Equipamento fundamental no surgimento da Gnotobiologia. Estrutura fundamental: ● Estrutura principal ● Corpo ou envelope ● Porto de passagem ● Lucas de manuseio ● Filtros de ar ● Motor de insuflação Características do Isolador em Gnotobiologia: ● Pressão positiva ● Filtro HEPA para entrada de ar (99,99% de eficiência) ● Porto de passagem para esterilização química ● Manutenção da condição microbiológica interna Utilização de Isoladores nos Centros de bioterismo: ● Manutenção do padrão sanitário ● Quarentena até certificação da qualidade ● Auxílio na obtenção de animais livres de contaminação - Derivação cesariana Reprodução assistida: Conjunto de técnicas que tem como objetivo, viabilizar a gestação na incapacidade da concepção ou na dificuldade em conduzir a prenhez até o final. Aplicada aos animais de laboratório Modelo para pesquisa em reprodução humana e veterinária Desenvolvimento de animais geneticamente modificados Auxílio em linhagens com perdas reprodutivas Técnicas utilizadas: ● Auxílio na reprodução Fertilização in vitro (Fertilização de óvulos fora do organismo materno) Transplante de ovário (Remoção de tecido ovariano de fêmeas que não levam a prenhes a termo para implante em outra fêmea) Implante de embriões ● Preservação de linhagens Congelamento de embriões Congelamento de gametas Congelamento de tecido ovariano Indicações: ● Auxílio para linhagens com dificuldade de concepção ● Auxílio para linhagens com dificuldade em manter a gestação ● Manutenção de linhagens com alelos recessivos deletérios ou que levam a infertilidade ● Manutenção (estoque)de embriões oriundos de colônias de fundação Criopreservação: ● Embriões ● Ovário ● Espermatozoides Processo onde células ou tecidos biológicos são preservados através do congelamento, geralmente −196 °C Vantagens da Criopreservação: ● Banco de embriões: Reposição imediata de linhagens Perpetuação de padrão genético Perpetuação do padrão sanitário Otimização de espaço Estoque de grande número de linhagens, reprodução conforme demanda. ● Congelamento de ovários e espermatozoides Preservação do genoma haploide Backup do banco de embriões
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