Exercício 03 - PCR e Eletroforese (1)

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Disciplina: Biologia Molecular 
Docente: Dr. Rodrigo de Oliveira 
 
EXERCÍCIO – PCR e ELETROFORESE 
 
QUESTÃO 01: Há inúmeros microrganismos 
coabitando em diversas partes do corpo humano, 
denominando-se microbiota. O conhecimento 
científico sobre as interações humanas 
relacionadas à essa diversidade de 
microrganismos se desenvolveu nos últimos 
anos em diferentes áreas da ciência. 
Pesquisadores, por exemplo, estudam a 
mudança da microbiota oral em crianças, de 
acordo o seu desenvolvimento, através da 
amplificação de um marcador molecular de 
diversidade bacteriana denominado como gene 
16S. A cada ano de vida, coleta-se amostras da 
cavidade oral de crianças, extrai-se o DNA total 
e realiza-se a técnica de PCR para amplificação 
desse marcador molecular. Um ponto importante 
é a conservação das amostras coletadas, uma 
vez que o DNA da amostra pode ser degradado 
e dificultar a detecção do marcador molecular 
investigado. 
Nesse contexto, considere que a figura abaixo represente o resultado de uma eletroforese (gel de agarose) de amostras 
de DNA extraídas da cavidade oral de quatro crianças (Poço X representa o ladder; Poço 1 a 4 representam amostras 
de crianças) 
Baseado no texto e figura acima, qual amostra apresenta melhor integridade para se aplicar a técnica de PCR? 
 
 
(a) Amostra do Poço 1. 
(b) Amostra do Poço 2. 
(c) Amostra do Poço 3. 
(d) Amostra do Poço 4. 
(e) Ladder do Poço X. 
 
 
 
 
QUESTÃO 02: “A gripe H1N1 consiste em uma doença causada por uma mutação do vírus de RNA da gripe. Também 
conhecida como gripe Influenza tipo A ou gripe suína, ela se tornou conhecida quando afetou grande parte da 
população mundial entre 2009 e 2010. Os sintomas da gripe H1N1 são bem parecidos com os da gripe comum e a 
transmissão também ocorre da mesma forma. O problema da gripe H1N1 é que ela pode levar a complicações de 
saúde muito graves, podendo ser fatal. O vírus vive por duas a oito horas em superfícies e lavar as mãos com frequência 
ajuda a reduzir as chances de contaminação.” (Adaptado do texto: Gripe H1N1 – Sintomas e Prevenção. Suely 
Amarante - Site IFF/Fiocruz) 
Nesse contexto, considere um paciente infectado por H1N1. Para se quantificar a carga viral de H1N1 nesse paciente, 
sugere-se utilizar 
(a) PCR em tempo real. 
(b) PCR com transcriptase reversa. 
(c) PCR convencional. 
(d) Nested PCR. 
(e) PCR combinada com eletroforese. 
 
QUESTÃO 03:O Brasil, nos últimos anos, foi assolado por uma 
epidemia de dengue que ainda não está controlada, a despeito 
da queda nos índices de infecção verificada em 2003. Tanto é 
assim que os quatro sorotipos da doença que afetam o homem 
já foram detectados no País. Procurando atender a essa 
demanda, os pesquisadores desenvolveram um teste molecular 
para dengue, empregando a metodologia de PCR, que amplifica 
o RNA viral de forma seletiva em amostras de plasma (Adaptado 
de “Diagnóstico de Dengue”, Site Fleury). 
Considere que a figura (ao lado) represente o resultado de uma 
eletroforese (gel de agarose) de reações de PCR específicas 
para a detecção de Dengue virus 1 (Poço X representa o ladder; 
Poço 1 representa o controle positivo; Poço 2 e 3 representam 
amostras de pacientes; Poço 4 representa o controle negativo) 
Baseando-se no texto e na imagem, é correto afirmar: 
(a) A detecção do vírus da dengue foi realizada através de uma PCR em tempo real. 
(b) A reação de PCR visualizada na imagem não foi realizada corretamente, uma vez que se apresenta 
contaminada. 
(c) O marcador molecular do vírus da dengue é de aproximadamente 150bp. 
(d) A amostra do poço 2 é positiva para o vírus da dengue. 
(e) O paciente do poço 3 está coinfectado por dois tipos de vírus. 
 
 
QUESTÃO 05: Câncer é o nome dado a um conjunto de mais de 100 doenças que têm em comum o crescimento 
desordenado (maligno) de células que invadem os tecidos e órgãos, podendo espalhar-se (metástase) para outras 
regiões do corpo. Pesquisadores tentam entender qual a base genética e celular para o desenvolvimento dessa doença. 
Abaixo, encontra-se um gráfico gerado em uma PCR em tempo real para o gene PSMA, para medir o nível de 
expressão desse segmento gênico em células cancerosas (curva A) e células normais (curva B). O threshold está 
representado pela linha apontada pela seta. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Baseado no gráfico acima, pode-se sugerir: 
(a) O gene PSMA é menos expresso nas células cancerosas em comparação às células normais. 
(b) O gene PSMA é mais expresso nas células cancerosas em comparação às células normais. 
(c) Não há diferença de expressão do gene PSMA entre as células cancerosas e normais. 
(d) O gene PSMA está presente nas células normais e ausente nas células cancerosas. 
(e) O gene PSMA é mais expresso nas células normais em comparação às células cancerosas.