ESTUDO DIRIGIDO - ENZIMAS DE RESTRIÇÃO

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Estudo Dirigido sobre Enzimas de Restrição
O que são enzimas de restrição? Qual a sua origem? Qual a...
O que são enzimas de restrição? Qual a sua origem? Qual a sua função nesses organismos
As enzimas de restrição, também chamadas de endonucleases de restrição, reconhecem uma sequência de bases específica na hélice dupla do DNA e cortam ambas as fitas da hélice, em lugares determinados. 
Sua origem advém de bactérias. Foram descobertas em organismos que apresentavam capacidade de resistência a infecção por vírus. 
Quanto a sua função, essas enzimas apresentam a capacidade de seccionar o DNA viral, fragmentando-o em porções inofensivas. Desta forma, o protege a bactéria de um DNA estranho, atuando como um sistema imune. Elas são indispensáveis na análise da estrutura dos cromossomos, no isolamento de genes e na criação de moléculas novas de DNA que podem ser clonadas.
Como é a nomenclatura das enzimas de restrição?
Como é a nomenclatura das enzimas de restrição?
O nome da enzima é derivado do nome da linhagem e espécie bacteriana em que foi isolada. A primeira letra (maiúscula) vem do Gênero; As duas próximas letras (minúsculas) vêm da Espécie; As três primeiras letras devem ser grafadas em itálico; Em alguns casos, tem-se uma outra letra maiúscula indicando a Estirpe; e no fim segue um numeral romano indicando a ordem cronológica do seu isolamento de um mesmo microrganismo. 
O que são sítios de restrição? Quais as diferenças entre ...
O que são sítios de restrição? Quais as diferenças entre eles e sua implicações?
Sítios de restrição são sequencias específicas do DNA, compostas geralmente de 4-8 nucleotídeos e são normalmente curtas sequências palindrômicas, isto é, a sequência do sítio de restrição é a mesma em ambas as cadeias quando estas são lidas no sentido 5’ e 3’. Os locais de clivagem são, portanto, definidos pela sequência de nucleotídeos, e é, portanto, esta que define o tamanho dos fragmentos obtidos.
Os sítios de enzimas de restrição apresentam características específicas. A principal delas diz respeito ao tamanho dos sítios. Quando analisada uma sequência de DNA aleatória composta de proporções iguais de A, C, G e T, a probabilidade de um sítio qualquer de 6 nucleotídeos ocorrer nessa sequência é 0,25 x 0,25 x 0,25 x 0,25 x 0,25 x 0,25 ou seja, 1/4.096. Isso quer dizer que há 1 sítio a cada 4 mil pares de base (pb), em média. Seguindo o mesmo raciocínio, enzimas que reconhecem sequências de apenas 4 nucleotídeos irão cortar, em média, 1 sítio a cada 256 pb, e enzimas que reconhecem sítios de 8 nucleotídeos irão cortar uma vez a cada 65.000 pb. No entanto, a sequência do DNA nos cromossomos dos seres vivos obviamente não é aleatória, e nem sempre moléculas de DNA apresentam igual proporção dos 4 nucleotídeos. Assim, até mesmo entre as enzimas com sítios de reconhecimento de mesmo tamanho existe uma grande variedade na frequência desses sítios em diferentes genomas. 
Como as enzimas de restrição são classificadas?
Como as enzimas de restrição são classificadas?
Podem ser classificadas como Coesivas ou Não Coesivas:
Coesivas: As extremidades coesivas apresentam um pequeno número de nucleótidos em cadeia simples, capazes de se associar por ligações por pontes de hidrogénio, com outra cadeia simples em que a sequência de bases seja complementar desta.
Não coesivas: Os fragmentos de DNA com extremidades cegas, ainda que compatíveis com outros com extremidades cegas resultantes da acção de qualquer enzima de restrição que as gere, não possuem a capacidade de estabelecer entre si pontes de hidrogénio por complementariedade de bases. Desta forma, a ligação de dois fragmentos deste tipo quando em baixa concentração é muito mais difícil que a ligação de dois fragmentos com extremidades coesivas.
Podem ainda ser classificadas quanto ao reconhecimento das sequências de DNA: 
Isoesquizomeros: Enzimas de restrição que reconhecem a mesma sequência e tem o mesmo sitio de clivagem.
Neoesquizomeros: Enzimas de restrição que reconhecem a mesma sequência, mas clivam o DNA diferentemente.
O que é uma análise de perfil de restrição? Quais as apli...
O que é uma análise de perfil de restrição? Quais as aplicações deste tipo de análise?
Enzimas de restrição podem ser usadas para gerar um mapa de restrição. Permitem determinar com precisão os diversos locais de restrição presentes num fragmento de DNA, gene ou na totalidade do genoma de um organismo. São ferramentas essenciais para desenhar estratégias de manipulação de DNA. São usados como ponto de referência para caracterizar a molécula de DNA.