MICROBIOLOGIA GERAL - CONTAGEM DE BACTERIAS - AULA 5

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MICROBIOLOGIA GERAL (A5) – PROF. FRANCISCO MARLON - UFERSA/ @_vitalmd 
 
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CONTROLE 
 
MÉTODOS DE CONTAGEM 
INDIRETOS 
• Turbidimetria 
 
 
 
 
✓ Saber a quantidade das bactérias atra-
vés da turbidez 
✓ A quantidade de luz que atravessa o 
detector é inversamente proporcional 
ao nº de bactérias 
✓ Quanto > o nº de bactérias < a quanti-
dade de luz que é transmitida 
• Atividade metabólica 
Se eu consigo mensurar a quantidade de lactose que 
a bactéria produz. Se eu tenho 10 bactérias que produzem 
100 microlitros de lactose, em 1000 microlitros de lactose 
mensurados vai ter proporcionalmente 100 bactérias. 
✓ Muito aproximado 
✓ 10 bactérias – 100ul lactose 
✓ 100 bactérias – 1000ul lactose 
• Peso seco 
Se eu consigo medir a quantidade e pe-
sar as bactérias, se pesa 100 miligramas de 
bactéria, vai ter 100 bactérias. 
✓ A cultura é centrifugada e o sobrena-
dante (líquido) desprezado 
✓ A massa sedimentada é pesada = cor-
responde a quantidade de bactérias 
DIRETOS 
• Mesófilas – 30-37º 
 
 
 
 
 
 
✓ Técnica de contagem em placa 
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Ex: 
Tem 10ml de leite, se eu conseguir quantificar as bac-
térias em 1ml, eu consigo saber quantas bactérias tem em 
10ml de leite se eu multiplicar por 10. Como eu não con-
sigo quantificar as bactérias de um frasco todo, são con-
tadas as bactérias que tem em uma pequena porção. 
Vamos dizer que eu tenha 10ml de uma amostra, se 
eu encontro 23 bactérias em 1ml, naquela solução de 
10ml, eu vou ter 230 bactérias (10x23). Só que eu faço 
isso em diluições menores. Como eu não posso calcular 
do meio todo, eu calculo o que tem em 1ml. 
Você vai contar, até que consiga encontrar o número 
de bactérias na placa que esteja superior a 30 colônias 
e inferior a 300. Porque acima de 300 a placa fica repleta 
de bactérias, impedindo a contagem e abaixo de 30 é con-
sideram que é quase 0. Então, não precisa contar porque 
não vai ter um efeito significativo sobre o leite. 
Cálculo da Unidade Formadora de Colônias 
Multiplica o número de bactérias da colônia 
pelo fator da diluição. 
159 (numero de colônias) x a diluição 10³, dá 159.000 bac-
térias (159x1000). Mas microbiologicamente você tem 
que escrever o radical entre 0 até 9,99 x a diluição que 
você passou os números. Era 159, mas 159 é a mesma 
coisa que 1,59x100, ou seja, em vez de ser 10³ vai ser 
1,59x105 ufc/ml (10²+3= 105) 
Se fosse 159 x10¹ = 1,59x10³ 
Porque 159 é 15,9 x10 mas também pode ser 1,59x100 
Volta a virgula uma casa e aumenta 1 0 na base 10. 
Ex 1: 
Uma amostra de leite, teve o seguinte resultado: 204 
bactérias na diluição 10¹, qual o número de bactérias 
na amostra de leite por ml? 
204 x 10¹ = 
2,04x10³ ufc/ml 
Porque 2,04x100 = 204 
 
Ex 2: 
Uma amostra de leite, teve o seguinte resultado: 134 
bactérias na diluição 10², qual o número de bactérias 
na amostra de leite por ml? 
134x10² = 
 1,34x104 ufc/ml 
Porque 1,34x100 = 134 e 10²+²= 104 
Ex 3: 
Uma amostra de leite, teve o seguinte resultado: 1204 
bactérias na diluição 10¹, 245 na diluição 10², 36 na di-
luição 10³ e 14 na diluição 104, qual o número de bac-
térias na amostra de leite por ml? 
245x10² + 36x10³ = 24,5x10³ + 36x10³ 
60,5x10³ : 2 = 30,25x10³ : 2 = 
3,02x105 ufc/ml 
Porque 24,5x10=245 e 102+3 = 105 
Coloca na potência que está mais diluída 
Divide por 2 porque são 2 resultados 
Aumentou 2 casas, soma o 2 com a potência 3 
Ex 4: 
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Uma amostra de leite, teve o seguinte resultado: 1404 
bactérias na diluição 10¹, 135 na diluição 10², 43 na di-
luição 10³ e 31 na diluição 104 e 14 na diluição 105 , 
qual o número de bactérias na amostra de leite por 
ml? 
31x104 + 4,3x104 + 1,35x104 = 
36,65 x 104 : 3 = 12,21x104 = 1,221x105 = 
1,22x105 ufc/ml 
Porque 4,3x10 = 43 e 103+1 = 104 
1,35x100 = 135 e 10²+² = 104 
1,22x10 = 10¹+4 = 105 
Uma amostra de leite, teve o seguinte resultado: 432 
bactérias na diluição 10¹, 301 na diluição 10², 76 na di-
luição 10³ e 29 na diluição 104 e 9 na diluição 105 , qual 
o número de bactérias na amostra de leite por ml? 
76x10³ = 
 7,6x104 ufc/ml 
Porque 7,6x10 = 76 e 10¹+3 = 104 
Uma amostra de leite, teve o seguinte resultado: 432 
bactérias na diluição 10¹, 299 na diluição 10², 76 na di-
luição 10³ e 31 na diluição 104 e 9 na diluição 105 , qual 
o número de bactérias na amostra de leite por ml? 
299x10² + 76x10³ + 31x104 = 2,99x104 + 7,6x104 + 
31x104 = 41,59x104 : 3 = 13,86x104 = 
1,38x105 ufc/ml 
Uma amostra de leite, teve o seguinte resultado: 3245 
bactérias na diluição 10¹, 234 na diluição 10², 38 na di-
luição 10³ e 18 na diluição 104 , qual o número de bac-
térias na amostra de leite por ml? 
234x10² + 38x10³ = 2,34x10³ + 38x10³ 
40,34x10³ : 2 = 20,17x10³ = 10,7x10³ = 
1,07x104 ufc/ml 
Porque 2,34x10=234 e 101+3 = 104 
Coloca na potência que está mais diluída 
Divide por 2 porque são 2 resultados 
Aumentou 1 casa, soma o 1 com a potência 3 
Uma amostra de água, teve o seguinte resultado: 301 
bactérias na diluição 10¹, 134 na diluição 10², 35 na di-
luição 10³ e 9 na diluição 104 , qual o número de bac-
térias na amostra de água por ml? 
134x10² + 35x10³ = 1,34x10³ + 35x10³ 
36,34x10³ : 2 = 18,17x10³ = 
1,81x104 ufc/ml 
Porque 1,34x10=134 e 101+3 = 104 
Coloca na potência que está mais diluída 
Divide por 2 porque são 2 resultados 
Aumentou 1 casa, soma o 1 com a potência 3 
 
• Coliformes 
Coliformes são bactérias que tem 4 tipos 
diferentes de gêneros que determinam um 
padrão de higienização. 
o Escherichia coli 
o Citrobacter sp. 
o Enterobacter sp. 
o Klebsiella sp. 
 
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Existe um padrão de quantificar as bac-
térias em alimento, em água, na carne, no 
frango, no leite, no celular, superfícies de 
bancadas, balde para ordenha. 
É importante porque como elas determi-
nam um padrão de higiene, no local pode 
ter outras bactérias que não é possível 
quantificar. Então, se existe coliformes, 
existem outras bactérias. 
✓ Classificação 
o 37 ºC - Coliformes totais 
▪ Todos os 4 gêneros são 
▪ Mesófilas 
▪ Origem ambiental 
o 44,5 ºC – Coliformes termotolerantes 
(fecais) 
▪ Genes que favorece com que ela 
cresça nessa temperatura 
▪ Oriunda das fezes 
▪ Escherichia coli e algumas Klebsiel-
las sp. 
✓ Características 
o Todas são Gram (-) 
o Sobrevivem em ambientes com au-
sência de oxigênio 
o Fermentação de lactose 
▪ Utiliza a lactose na ausência do 
oxigênio produzindo CO2 
o Resistente ao Verde brilhante 
▪ Corante que junto com a bile dani-
fica a membrana plasmática de al-
gumas bactérias 
o Produção de CO2 
Meios de cultura que permitem que essas bac-
térias sobrevivam. Todas as outras são inativadas. 
o Caldo verde brilhante 
o Caldo EC 
Técnica NMP (Técnica do Número mais provável) 
A contagem de coliformes tem 3 fases. 
A fase presuntiva, que é a que presumimos que 
possa ter coliformes. A fase 2 que a fase que quan-
tifica as bactérias coliformes totais, e a fase 3, que 
quantifica as bactérias coliformes termotolerantes. 
Dessa amostra de água, ou da amostra de leite, carne, 
frango, vai ser colocada no Erlenmeyer e ser diluída. Será 
utilizado 55,5 ml do material. 
Pegar 10ml e colocar em 10ml de caldo lactosado, depois 
repetir isso 5 vezes. Depois pegar da amostra principal e 
colocar 1ml da amostra em cada um dos 5 tubos e nos 
outros 5 tubos põe 0,1ml em cada. Fazer isso para que 
tenha valores médios de quantidades diferentes relacio-
nadas da amostra. 
Tem um tubo invertido em cada um dos tubos, o tubo de 
Duran. A bactéria fermenta a lactose e visualizamos o CO2 
preso no tubo invertido. Esse caldo lactosado não inibe 
nenhuma bactéria, ou seja, todas crescem. 
São 15 tubos no total, vai ser positivono tubo todos aque-
les que apresentam CO2. Olhar 24 horas depois cada 
amostra em todos os 15 tubos e anotar os que gás. 
A mesma metodologia é utilizada para os 5 tubos de 1 
ml e os 5 tubos de 0,1 ml. 
Se todos os 15 tubos não apresentarem gás, o número de 
coliformes é 0. 
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Hipoteticamente 3 tubos de 10ml deram positivos, no de 
1ml e 0,1ml ou irá encontrar a mesma quantidade ou me-
nos. 
 No tubo de 1ml 3 deram positivos e nos tubos de 0,1ml 
deram 3 positivos. 
Pega um pouco da solução de cada tubo positivo (9) e 
transfiro para tubos com tubo de Duran e semeia um 
caldo verde brilhante e bile 2% a 37°C em 24h. O caldo 
danifica a membrana plasmática das outras bactérias, dei-
xando só as coliformes. 
Hipoteticamente nos tubos de 10ml, 2 deram positivo, nos 
tubos de 1ml 1 deu positivo e nos tubos de 0,1ml 1 deu 
positivo. 
Pega um pouco da solução dos 5 tubos e semeia no caldo 
EC a 44,5 °C (Caldo Escherichia coli). Deixa por 24. 
Hipoteticamente, 2 deram positivos para coliformes totais. 
Para saber os que deram positivo para coliformes termo-
tolerantes tem que olhar se tem gás no tubo de Duran. 
A sequência foi: 
2-1-0 para coliformes totais, de acordo com a tabela 1 
NMP 
1-1-0 para coliformes termotolerantes, de acordo com 
a tabela 4 NMP. 
Na legislação só vai ter problemas para coliformes 
termotolerantes, não pode ter. De 5 amostras, so-
mente uma amostra pode ser termotolerante, se ti-
ver 2 amostras tem que condenar o lote da amostra. 
Exemplo: 
Se eu encontrar 4 tubos na diluição 10, 1 tubo em 1 e 
0 tubo na de 0,1 pra quantificar os coliformes totais, 
não pode impedir de ser importado.