Técnicas de laboratório bacteriologia e micologia

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Técnicas laboratoriais bacteriologia e micologia 
 
Nesta aula foram aplicadas 4 técnicas, sendo elas: 
1- Técnica de esterilização da alça de platina; 
2- Técnica de isolamento de microrganismos (esgotamento da alça de platina); 
3- Preparo do esfregaço bacteriológico para coloração de GRAM; 
4- Coloração de GRAM 
 
Material utilizado: 
 Bico de Bunsen 
 Alça de platina 
 Estante de tubos de ensaio 
 Tubos de ensaio 
 Fluído salino estéril 
 Placas de Petri contendo Ágar nutriente ou Sabourauhd 
 Lâmina 
 Pregador 
 Pipeta 
 
Material Infeccioso utilizado: 
 Bactéria de mucosa de felino 
 Suspensão de fungo 
 Bactéria de lactobacilos 
 
Após a vestimenta dos EPIs, jaleco, cabelos presos em um coque, máscara e 
protetor de cabelo. Não foi utilizado luvas pois utilizaremos fogo. Inicialmente a 
professora demonstrou cada técnica e em seguida os alunos deveriam reproduzir. 
 
1- Técnica de esterilização da alça de platina; 
Seguindo todas as técnicas de segurança peguei a alça de platina como segura uma 
caneta e levei-a até a chama fria passando por três vezes de forma controlada e moderada, 
deixando por alguns segundos e após inclinar em ângulo de 45 graus na chama quente, 
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sem retirar a alça da chama apenas subindo da chama fria para a chama quente, até ficar 
rubra. Após este procedimento a alça encontra-se esterilizada e poderá ser usada para as 
técnicas sem sair do halo de esterilidade. Caso saia do halo deverá ser esterilizada 
novamente. 
 
2- Técnica de isolamento de microrganismos (esgotamento da alça de platina); 
Os materiais fúngicos e bacterianos foram previamente diluídos pela professora e 
dispostos em tubos de ensaio na bancada dentro das estantes. O aluno deveria escolher 
com qual material gostaria de trabalhar sendo bacteriano ou fúngico e assim escolher o 
meio de cultivo sendo Sabouraud para fungos e ágar nutriente para bactérias. Após a 
escolha identificar a placa de Petri com tipo de cultivo, nome do aluno e data. Em seguida, 
realizada a esterilização da alça de platina e sem sair do halo de esterilidade, foi iniciado 
a técnica de isolamento de microrganismos. Com a alça de platina na mão direita pegou-
se o tubo de ensaio, com a mão esquerda, de escolha do aluno, passando sua boca 
rapidamente na chama fria para esterilizar (flambagem). Seguindo os trâmites realiza-se 
o esfriamento da alça de platina no início do tubo. Após esfriar pega-se o material 
bacteriano ou fúngico já diluído e sem encostar nas laterais do tubo, retira-se a alça e abre-
se a placa de Petri com uma das mãos, usando dois dedos para apoiar e dois dedos para 
abrir. Após a abertura esgotar a alça com a técnica escolhida, neste caso foi usado a 
técnica de esgotamento em toda a placa em zigue zague, até o final, realizando o 
esgotamento da alça de platina. Fechar a placa e guardar no local adequado para que seja 
cultivado (bacia plástica que ficará em temperatura ambiente para a incubação e 
crescimento. Esterilizar a alça de platina conforme técnica já apresentada e todos os itens 
sem sair do halo de esterilidade. 
 
3- Preparo do esfregaço bacteriológico para coloração de GRAM; 
O material bacteriano foi previamente diluído pela professora e dispostos em 
tubos de ensaios na bancada dentro das estantes. Após realizada a esterilização da alça de 
platina e sem sair do halo de esterilidade foi iniciado a técnica de esfregaço. Com a alça 
de platina na mão direita pegou-se o tubo de ensaio, com a mão esquerda passando sua 
boca rapidamente na chama fria para esterilizar (flambagem). Após realiza-se o 
esfriamento da alça de platina no início do tubo. Após esfriar pega-se o material 
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bacteriano ou fúngico já diluído e sem encostar nas laterais do tubo retira-se a alça com 
uma gotícula do material e coloca o material bem no centro da lâmina de forma uniforme. 
Esterilizar a alça de platina e após guardá-la na estante na bancada. Pegar a lâmina com 
o pregador para realizar a secagem. A lâmina deve ser disposta na parte superior da 
chama, sem sair do halo, sem contato direto com a chama para desidratar sem queimar o 
material utilizando seu calor, até observar o material ficando opaco na lâmina. Após 
alguns minutos para fixar desce-se a lâmina rapidamente até a chama fria, por três vezes, 
sem sair do halo de esterilidade. 
 
4- Coloração de GRAM 
Apesar da boa vontade da professora o material separado pela equipe do 
laboratório estava errado e por isso a demonstração não deu certo. 
 
Resultado das placas de petri cultivadas pela aluna após 1 semana. 
 
 Fungo: 
 
Bactéria 
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Relatório aula 2– dia 08/06/2021 
 
Nesta aula foram aplicadas 2 técnicas novas, sendo elas: 
1- Antibiograma 
2- Coloração de GRAM 
 
Material utilizado: 
 Bico de Bunsen 
 Estante de tubos de ensaio 
 Alça de platina 
 Placas de Petri contendo Ágar nutriente 
 Placa de Petri cultivada da aula anterior com material bacteriano 
 Lâmina 
 Pregador 
 Pipeta 
 Pinça 
 Água destilada 
 Violeta Genciana 
 Lugol 
 Álcool Absoluto 
 Fucsina 
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 Swab 
 Discos de antibiótico – Gentamicina, Azitromicina, Tetraciclina e Amicacina 
 
Material Infeccioso utilizado: 
 Placa de petri com material bacteriano cultivado na aula anterior, da mucosa 
do Matildo 
 Material fecal do coelhudo 
 
Após a vestimenta dos EPIs, jaleco, cabelos presos em um coque, máscara e 
protetor de cabelo. Não foi utilizado luvas pois utilizaremos fogo. Inicialmente a 
professora demonstrou cada técnica e em seguida os alunos deveriam reproduzir. 
 
 
1- Antibiograma 
Foi realizado o antibiograma do material levado por uma aluna, de xixi e fezes de 
um coelho. Dentro do halo de esterilidade, fazer a esterilização da alça de platina 
ensinada na aula 1, pegar o material do coelho com um swab e espalhar de forma 
homogênea na placa de petri com Ágar nutriente. Pegar a pinça, passar na chama fria para 
esterilizar rapidamente, e após pegar os discos de antibiótico. Colocar discos variados, 
sendo 1 ao centro e os demais ao redor, nas laterais e em cima e baixo do disco colocado 
no centro, dando espaço para o halo fechar e flambar a pinça, após colocando-a na estante. 
Colocar em local adequado para o cultivo e resultado do antibiograma. 
 
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2- Coloração de gram 
 
Dentro do halo de esterilidade e após a esterilização da alça de platina pegamos 
uma gotícula do material infeccioso, placa de petri cultivada com a mucosa oral do 
Matildo, e espalhar no centro da lâmina de modo uniforme. Depois secar próxima ao calor 
do bico de Bunsen, quando o material estiver seco passar rapidamente por 3 vezes na 
chama, igual técnica 3 realizada na aula passada - Preparo do esfregaço bacteriológico 
para coloração de GRAM. Após o material seco levar a lâmina com pregador para a pia 
e com a pipeta pegar a violeta de Genciana e pingar sobre o material bacteriano seco na 
lâmina, em quantidade suficiente para cobrir o material, aguardar 1 minuto e lavar com 
água destilada. Com outra pipeta pegar o Lugol e pingar sobre o material, aguardar 1 
minuto e lavar com água destilada. Com outra pipeta pegar álcool absoluto e colocar sobre 
o material por 15 segundos e lavar com água destilada. Com outra pipeta pegar fucsina e 
pingar sobre o material aguardar 30 segundos e lavar com água destilada. Em seguida 
levar o material ao bico de Bunsen para secar. Após seco pingar óleo e observar ao 
microscópio e identificar. Na minha lâmina foi observado cocos levemente queimados 
conforme imagem. 
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