RESUMO TÉCNICAS DE PREPARO DE MATERIAIS MICROSCOPIA DE LUZ - LABORATÓRIO DE BIOLOGIA CELULAR - BIO 112

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Resumo-Técnicas de Preparo 
de Materiais para 
Microscopia de Luz 
Materiais mais líquidos, é 
espalhado na lâmina por outra 
lâmina a fim de formar uma 
monocamada de células. 
 Material sólido, porém 
pouco espesso. É simplesmente 
colocado na lâmina, ajustado e 
observado no microscópio 
Forma a obter uma 
melhor visualização das células, 
pois o esmagamento faz com 
que haja uma separação das 
células acompanhada pela 
formação de uma fina camada 
que é facilmente atravessada 
pela luz. 
Na aula: 
 Foi feito com raiz de 
cebola, pingando gotas de ácido 
acético (facilita a separação 
das células durante o 
esmagamento). É feita a 
fixação da raiz com fixador 
ETANOL-ÁCIDO ACÉTICO 3:1. 
Cobre-se a lâmina com a 
lamínula para realizar pressão, 
dissociando os núcleos. 
Obs.: em geral, com esses 
tipos de técnica de preparo 
são obtidas lâminas não 
permanentes 
-Lavagem com solução 
salina 0,9% de NaCl para 
remoção de sangue. 
 -Corte do material em 
pequenos fragmentos 
(aumenta área de contato e 
permite que o fixador alcance 
rapidamente as células do 
tecido) e transferência para 
uma nova solução salina para 
que o restante do sangue seja 
removido 
-OBJETIVO: estabilização das 
estruturas celulares e 
extracelulares, mantendo-as o 
mais próximo possível da sua 
condição in vivo, uma vez que o 
fixador impede a autólise 
(inativação das enzimas 
lisossômicas e 
consequentemente a 
proliferação de micro-
organismos. 
-Corte do fígado em pedaços 
ainda menores para facilitar o 
processo de inclusão. 
-Lavagem do material em 3 
banhos seguidos com água 
destilada para remover o 
excesso de fixador. 
 
-OBJETIVO: gradualmente 
substituir a água pelo solvente 
mais apolar, facilitando a 
penetração da resina 
-São banhos sucessivos de 
concentrações crescentes de 
ETANOL ou ACETONA 
-banho em mistura de glicol 
metacrilato e etanol absoluto 
na proporção de 1:1, por 
aproximadamente duas horas, 
em temperatura ambiente que 
permitem a penetração da 
resina pura e não polimerizada. 
-permanece embebido em uma 
solução de glicol metacrilato 
puro por uma noite. 
RESUMINDO: PRÉ-
INFILTRAÇÃO E INFILTRAÇÃO 
SÃO DOIS BANHOS 
SUCESSIVOS EM 
GLICOLMETACRILATO (RESINA). 
-Material é colocado em moldes 
plásticos contendo 
glicolmetacrilato e catalisador. 
-Parafilme para diminuir o 
contato da resina com oxigênio, 
o qual interfere no processo de 
polimerização. 
 
-Material é removido do molde 
e colocado num suporte de 
madeira, o qual será preso ao 
micrótomo (aparelho que faz 
cortes nanométricos). 
 
 
-Cortes são transferidos p/ 
um recipiente com água em 
temperatura ambiente. 
-Após distendidos, são 
colocados na lâmina e aquecidos 
numa chapa a 45°C por 45 
minutos. 
-Aumento de contraste entre 
as regiões intracelulares 
-Hematoxilina + Eosina (HE) 
 
-OBJETIVO: proteger o material 
corado. 
-Corte é coberto por uma 
lâmina usando uma resina de 
montagem (ENTELLAN) 
-Lâmina permanente é seca 
em uma placa aquecida e está 
pronta.