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1 Marjorie Y. Chiesa ATM 2026/B Bio mol- Prova I Síntese proteica- tradução - é o processo pelo qual o mRNA é usado para ordenar e unir os aminoácidos sob a forma de uma cadeia polipeptídica - Existe uma colinearidade entre a sequencia de nucleotídeos presentes no mRNA e a sequência de aminoácidos da proteína que seria produzida NÃO ESQUECER: AUG: METIONINA- código de iniciação UAA, UAG, UGA- stop códons São 60 tipos de códigos que codificam 20 aminoácidos; - São lidos em triplets, ou seja, cada sequencia de 3 nucleotídeos (códon) é “lida" a partir de um ponto de inicia sobre o mRNA - O código genético é degenerado pois apresenta mais de um códon determinando um mesmo aminoácido Estrutura de genes e síntese proteica O trecho compreendido entre o códon de iniciação da síntese proteica e um dos três códons para terminação da síntese proteica (designados aqui por stop) determina a sequência de AAs do polipeptídeo final, o produto do gene. Este trecho é frequentemente designado ORF (open reading frame) ou Cds (coding sequence = sequência codificadora). GENE EUCARIOTO Estrutura típica de um gene procarioto: RBS = sítio ligador de ribossomo ATG = códon de iniciação da síntese protéica ORF = quadro aberto de leitura Cds = sequência codificante stop = qualquer um dos três códons de finalização da síntese protéica terminador = região terminadora da transcrição ESTRUTURA DE GENES E SÍNTESE PROTÉICA Diagrama de um gene hipotético eucarioto: Além das regiões, sítios e características já descritas para o gene procarioto, há ainda sinais (S) entre o promotor e o códon de iniciação (pequenas sequências que determinam o destino do mRNA, sua duração e outros parâmetros importantes na fisiologia da célula) e uma divisão da ORF em regiões codificantes (formadas por exons) e regiões intercalares (formadas por introns). ESTRUTURA DE GENES E SÍNTESE PROTÉICA 2 Marjorie Y. Chiesa ATM 2026/B Além das regiões, sítios e características já descritas para o gene procarioto, há sinais (s) entre o promotor e o códon de iniciação (pequenas sequências que determinam o destino do mRNA, sua duração e outros parâmetros importantes na fisiologia da célula) e uma divisão da ORF em regiões codificantes (formadas por exons) e regiões intercalares (formadas por introns) Em resumo: Componentes da síntese proteica: - RNA (mensageiro, transportador e ribossômico) - Enzimas aminoacil sintetase - Aminoácidos - Ribossomos Os três tipos de RNA - mRNA: “contém” a informação genética transcrita do DNA sob a forma de uma série de sequências trinucleotídicas (códons), cada um dos quais especificando um AA determinado. - tRNA: necessário para decifrar os códons no mRNA; cada tipo de aminoácido possui seu 3 Marjorie Y. Chiesa ATM 2026/B próprio conjunto de tRNAs, os quais se ligam ao AA e o transportam para a extremidade em crescimento de uma cadeia polipeptídico - ANTICÓDON - rRNA: se associa a um conjunto de proteínas para formar os ribossomos Exemplo de questão: Síntese proteica: Proteínas e mRNA são produtos dos processos celulares de ____ e _____, respectivamente. Existe uma colinearidade direta entre a sequência de _____ presente no mRNA e a sequência de _____ da cadeia polipeptídica formada. Escolha uma opção: a. Tradução / transcrição / aminoácidos / nucleotídeos. b. Tradução / transcrição / nucleotídeos / aminoácidos. c. Transcrição / tradução / nucleotídeos / aminoácidos. d.Tradução / replicação / nucleotídeos / aminoácidos. Síntese proteica: A sequência (de _____) ATG, quando transcrita, gera o códon ___ (no_____) que, segundo o diagrama abaixo, codifica para o aminoácido _____. Escolha uma opção: a. RNA / AUG / DNA / metionina. b. DNA / AUG / mRNA / valina. c. RNA / ATG / DNA / serina. d. DNA / AUG / mRNA / metionina. O tRNA deve ser capaz de interagir com: ribossomos, mRNAs e fatores de alongamento Dentre suas características esta: - ponta 5’ fosforilada - Alça do anticódon, contém 7 bases Os três RNAs: mRNA, tRNA e rRNA tRNA Devem ser capazes de interagir com: Ribossomos mRNAs Fatores de alongamento Cadeias unitárias de 73-95 ribonucleotídeos 4 Marjorie Y. Chiesa ATM 2026/B - Sequencia de bases na ponta 3’de tRNAs maduros é CCA Ele permite o alinhamento dos aminoácidos de acordo com a sequência de nucleotídeos no mRNA; funcionam como adaptadores Aminoacil sisntetases - é uma enzima bem específica Antes que um aminoácido seja incorporado a uma cadeia proteica, ele é ligado pelo seu terminal carboxila à extremidade 3’ OH (CCA) da molécula apropriada de tRNA - o primeiro passo, a ligação do aminoácido apropriado a um tRNA é catalisada por uma aminoacil-tRNA sintetase específica Essa ligação do aminoácido ao tRNA tem 2 funções: - ela liga covalentemente o aminoácido ao tRNA que contém o anticódon certo, sendo que o pareamento códon-anticódon permite que cada aminoácido seja inserido em uma cadeia cresce de proteína de acordo com o que está determinado ao mRNA - Ativação do AA, gerando uma ligação de alta energia na sua extremidade carboxila, de forma que possa reagir com o grupo amino do próximo aminoácido, na sequência da proteína, para formar a ligação peptídica Principais funções da aminoacil sintetases - participar diretamente do processo de decodificação - Responsáveis pelo reconhecimento do par: AA e o tRNA correspondente - Catalisam (aceleram) o acoplamento covalente do COOH do AA no 3’OH do tRNaA: ligação altamente energética - São específicas: acoplam 1 AA em seus respectivos tRNAs, com excessão de algumas bactérias que acoplam mais de um AA em diferentes tRNAs Exemplo de questão: Síntese proteica: Sendo um dos primeiros passos no processo de tradução, a ligação do terminal carboxila do _____ à extremidade 3’-OH da molécula apropriada de _____ é catalisada por _____. Assim, esta enzima liga covalentemente o _____ ao tRNA que contém o _____ correto, sendo que o pareamento códon-anticódon permite que cada aminoácido seja inserido em uma cadeia crescente de _____ de acordo com o que está determinado no _____. Escolha uma opção: a. Aminoácido / tRNA / uma aminoacil-tRNA sintetase específica / aminoácido / anticódon / proteína/ mRNA anticódon / proteína / mRNA. b. tRNA / aminoácido / uma aminoacil-tRNA sintetase específica / mRNA / códon / DNA / mRNA. c. Aminoácido / tRNA / endonuclease / aminoácido / anticódon / proteína / DNA. d. Aminoácido / mRNA / uma aminoacil-tRNA sintetase específica / ribossomo / anticódon / proteína / tRNA. 5 Marjorie Y. Chiesa ATM 2026/B Síntese proteica: Assinale verdadeiro (V) ou falso (F) e selecione a alternativa que apresenta a combinação correta de respostas de cima para baixo: (_) Os 20 aminoácidos encontrados nas proteínas são codificados por 61 códons. (_) Um aminoácido pode ser codificado por diferentes códons. (_) Os códons de terminação da síntese proteica são UAA, UAG, UGA. (_) Em procariontes somente uma espécie de cadeia polipetídica é sintetizada a partir de uma molécula de RNA, por isso os RNAs são chamados de monocistrônicos. PROCARÍOTICO É POLICISTRÔNICO (_) Em procariotos o processo de tradução inicia a partir do códon AUG próximo a sequência Shine-Dalgarno. Escolha uma opção: a. V, V, V, V, V. b. V, F, V, F, V. c. V, V, V, F, V. d. F, F, F, V, F Ribossomos As reações descritas para a síntese de proteínas necessitam de um aparato catalítico para guiá- las. A extremidade crescente de uma cadeia polipeptídica, por exemplo, deve ser mantida em sincronia com a molécula de tRNA para assegurar que cada códon sucessivo do mRNA se encaixe precisamente no anticódon do tRNA. - cada subunidade contém rRNA e várias proteínas - A unidade de medida dos ribossomos é o Svedberg (s) - Procariotos tem ribossomos 70S, constituidos de uma subunidademenor de 30s e outra de 50S - Eucariotos tem ribossomos 80S, sendo uma unidade 40S e outra 60S - Mitocôndrias e cloroplastos tem ribossomos 70S Em geral, sobre uma molécula de mRNA, são encontrados múltiplos ribossomos, cada um deles com um segmento de proteína nascente. Se olharmos da extremidade 5’ para a 3’ do mRNA, veremos os ribossomos a ele associados apresentando proteínas nascentes progressivamente maiores, pois os ribossomos mais próximos da extremidade 3’ estão mais próximos do fim da síntese do polipeptídeo. A esta estrutura formada por uma molécula de mRNA associada a vários ribossomos dá-se o nome de polissomo. Os ribossomos possuem quatro sítios: um para o mRNA e três para tRNA (A, P e E) 6 Marjorie Y. Chiesa ATM 2026/B Síntese proteica: Correlacione as frases abaixo a (1) Aminocil-tRNA Sintetase ou (2) Peptidil Transferase: (_) Antes que um aminoácido seja incorporado a uma cadeia proteica, ele é ligado pelo seu terminal carboxila à extremidade 3’-OH da molécula apropriada de tRNA. (_) Cada um dos 20 diferentes tipos desta enzima reconhece um aminoácido e todos os seus RNAs compatíveis. (_) Esta enzima liga covalentemente o aminoácido ao tRNA que contém o anticódon correto, sendo que o pareamento códon- anticódon permite que cada aminoácido seja inserido em uma cadeia crescente de proteína de acordo com o que está determinado no mRNA. (_) A extremidade carboxil da cadeia polipeptídica se separa da molécula de tRNA no sítio P e se liga, por uma ligação peptídica, ao aminoácido ligado a uma molécula de tRNA do sítio A; este processo é catalisado por uma enzima. (_) Proteínas citoplasmáticas (fatores de liberação) ligam-se a qualquer códon que alcance o sítio A no ribossomo e esta ligação altera uma enzima em específico, fazendo com que esta catalise a adição de uma molécula de água ao invés de um aminoácido. Escolha uma opção: a. 1, 2, 1, 2, 1. b. 2, 2, 2, 1, 1. c. 1, 1, 1, 2, 2. d. 2, 1, 2, 1, 2. Controle da expressão gênica Unidades organizacionais de genomas procarióticos - Genes - Motivos: seq. nt curtas (2-dezenas pb); podem estar dispersas ou agrupadas; em muitos casos são unidades formadoras de repetições. - repetições: unidades de repetição curtas (menos de 10 pb). - Domínios: regiões extensas, definidas, do ponto de vista estrutural por interações com proteínas e por padrões de superenrolamento do DNA. Operon: unidade funcional do genoma; pode ter 2 ou mais regiões codificadoras ocupando posições adjacentes e tem sua transcrição controlada Elementos transponíveis Sequências de DNA capazes de se integrarem (transposição) no genoma - transposons DNA: codificam proteinas que - Movem o DNA diretamente para uma nova posição ou Operon: unidade funcional do genoma; pode ter 2 ou + regiões codificadoras ocupando posições adjacentes e tem sua transcrição controlada. Unidades organizacionais de genomas procarióticos 7 Marjorie Y. Chiesa ATM 2026/B - Replicam o DNA e integram o DNA replicado em outro lugar (procariotos e eucariotos) - Retrotransposons: codificam a transcriptase reversa e fazem cópias de DNA a partir dos RNAs transcritos Elementos transponíveis causam alterações genéticas e fazem contribuições importantes para evolução dos genomas: • Inserção em genes • Inserção em sequências regulatórias (modificam expressão genética) • Produção de mutações cromossômicas Porque regular? Pois há um alto custo para produção das proteínas Para uma proteína de tamanho médio (300 aminoácidos): - 1350 moléculas de ATP - 1650 átomos de Carbono - 540 átomos de Nitrogênio Fatores que determinam a quantidade de cada proteína: - concentração de mRNA - Eficiencia da tradução do mRNA - Estabilidade da proteína extraída Genes constitutivos: estão constantemente sendo expressos, independente do que está ocorrendo; estão fora do controle Genes induzíveis: genes cuja expressão varia de acordo com as condições da célula Tipos de controle transcricional: Controle negativo: uma proteína reguladora atua como um repressor se ligando ao DNA e inibindo a transcrição Controle positivo: uma proteína reguladora atua como ativados, estimulando a transcrição Ambos podem ser subdivididos com respeito à presença de um sinal (realizado por uma molécula sinalizadora), realizando indução ou repressão GENE E PROTEÍNA em organismos procarióticos não tem colinearidade
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