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UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS INSTITUTO DE EDUCAÇÃO AGRICULTURA E AMBIENTECAMPUS VALLE DO RIO MADEIRA COLEGIADO DE ENGENHARIA AMBIENTAL MICROBIOLOGIA GERAL HUMAITÁ-AM 2021 UNIVERSIDADE FEDERAL DO AMAZONAS INSTITUTO DE EDUCAÇÃO AGRICULTURA E AMBIENTECAMPUS VALLE DO RIO MADEIRA COLEGIADO DE ENGENHARIA AMBIENTAL Daniel Alves de Araujo Filho – 21602367 Hiêza Martins Batista- 21650695 Kedna dos Santos Pessoa - 21651076 Lauriane Souza Alves – 21602368 Rizoneide Souza Faustino – 21651648 Rodrigo da Silva de O. Rebouças – 21855765 Samuel dos Santos Monteiro – 21651649 Willian Félix Galvão 21755471 RELATÓRIO: DIVERSIDADE DA MICROBIOTA DO AR HUMAITÁ-AM 2021 Relatório solicitado pelo Prof Dr. Heron Salazar como avaliação parcial da disciplina de Microbiologia Geral do curso de Engenharia Ambiental da Universidade Federal do Amazonas INTRODUÇÃO Os micro-organismos são definidos, em princípio, como seres microscópicos, individualmente invisíveis a olho nu (VERMELHO, 2006, p. 1). Os micro-organismos são encontrados em praticamente todos os ambientes naturais tais como solo, ar, água, alimentos, esgoto, corpo humano, plantas e animais (COELHO, 2006, p. 15). Ou seja, estão constantemente presentes no meio ambiente. Estes organismos são relatados apenas por seus fatores negativos, como problemas de higiene, danos à alimentos e equipamentos, além de doenças. Entretanto, sua utilização, apesar de ser não ser divulgada, é de extrema importância, visto que são responsáveis pela ciclagem de nutrientes em ambientes aquáticos e terrestres, recuperação de óleo, extração de metais (CAIXETA, 2012, p.13), dentre outras utilidades. A consequência mais importante da má qualidade do ar em ambientes climatizados seguramente diz respeito à saúde humana. Como é do conhecimento geral, diversas doenças adquiridas por via aérea têm sido associadas à qualidade do ar de ambientes confinados (Lebowitz, 1972; Riley, 1982; Samson, 1985; Sorenson et al., 1987; Wasserman, 1988; Al-Dagal & Fung, 1990; Miller, 1992; Menzies & Bourbeau, 1997). Os contaminantes biológicos incluem bactérias, fungos, vírus, artrópodes, pólen, ou substâncias deles derivadas (Solomon, 1976; Al-Dagal & Fung, 1990; Dutkiewicz, 1994; Menzies & Bourbeau, 1997). Muitas das conseqüências normalmente citadas para a saúde humana são similares àquelas descritas para os contaminantes de natureza química, como as irritações da pele e do trato respiratório, as dermatites, rinites, conjuntivites, asma, além de sintomas ou síndromes tais como tosse, dores de cabeça, tonteira e mal estar generalizado. A quantificação de microrganismos no ar torna-se necessária pelas consequências diretas para a saúde humana e pode ser usada para a detecção de fontes contaminantes. Existem diversas metodologias para a análise quantitativa de microrganismos no ar, contudo; Lee et al. (2004) afirmaram que não há um consenso entre os especialistas sobre qual metodologia deveria ser considerada como padrão. Desta maneira, para o aperfeiçoamento dos conhecimentos, baseando-se em estudos aprofundados, é necessária a coleta dos organismos, para isto, duas maneiras foram estabelecidas, a primeira consiste no esfregaço do ambiente específico, e a segunda, consiste no método de exposição de placa, ou seja, é aguardada a proliferação dos organismos na placa. Entretanto, este método possui imprecisões técnicas, pois não quantifica os micro-organismos em relação ao volume de ar, não sendo então muito recomendável (COELHO, 2006, p. 141). A verificação destes micro-organismos dá- se através da análise microscópica, pois estes constituem um grupe de seres vivos de dimensões reduzidas e bastante variáveis de acordo com o grupo a que pertencem (PADRÓN, 2006, p. 79), sendo necessário desta maneira, o manuseamento de microscópios. MATERIAL E MÉTODOS DESCRIÇÃO DO LOCAL DE ESTUDO: O objeto de estudo deste trabalho foi a análise da diversidade morfológica da microbiota do ar do laboratório de solo, fitossanidade e saneamento. do IEAA (Instituto educação de educação, agricultura e ambiente campus vale do rio madeira), para isso o laboratório de fitossanidade foi utilizado com o intuito de obter o melhor cenário de avaliação. Materiais utilizados: • Algodão; • Água Destilada; • Autoclaves; • Agitador/Aquecedor magnético; • Barra magnética para o agitador; • Bastão de vidro; • Balão volumétrico; • Bast; • Becker; • Bico de bunsen; • Bico de bunsen; • Balão volumétrico; • Cabine de fluxo laminar; • Câmara de germinação; • Contador de colônia (lupa); • Chapa aquecedora/Agitador; • Estufa; • Erlenmeyer; • NA (Nutrient Agar); • Papel toalha; • PDA (Potato Dextrose Agar); • Papel aluminio; • Placa de Petri; • Plástico filme; • Pêra de sucção; • Pisseta; • Pipeta graduada; • Proveta; • Sabão Líquido; • Tetraciclina (antibiótico). Coleta de dados: No dia, a turma de engenharia ambiental realizou um experimento cujo objetivo era analisar a diversidade da microbiota do ar presente em um dos laboratórios do IEAA, para ter uma ideia do nível de contaminação. Para isso foi necessário fazer a higienização de todo o material que viria ser usado, e observando sempre as boas práticas de laboratório, toda equipe envolvida foi cuidadosa dentro do ambiente, cuidados como higienizar as mãos, o uso de jaleco e máscara foi indispensável durante o ato. Um preparo para os meios de cultivo foi realizado, e então dois meios de cultivos foram adotados para a execução do mesmo, utilizando os nutrientes PDA (potato dextrose agar) e NA (nutrient agar). Na preparação, os dois meios foram preparados com a proporção de 15g de cada nutriente em respectivos 500 ml de água destilada, onde foram aquecidas por meio de uma chapa de aquecimento magnético. E por diante, todas as soluções foram dispostas na máquina Autoclave, onde foram esterilizadas por calor úmido em 120°C por aproximadamente 20 minutos. Passado o tempo, as misturas foram retiradas, levadas a cabine laminar que estava totalmente purificada e distribuídas em 7 placas de Petri - 2 NA+ (com antibiótico), 1 NA- (sem antibiótico), 2 PDA+ (com antibiótico) e 2 PDA- (sem antibiótico), onde estas foram reservadas e expostas ao ar condicionado do Laboratório de Fitossanidade, usando a técnica de sedimentação em placas de Petri. As amostras ficaram em exposição em cima da bancada por aproximadamente 15h de um dia para o outro. Logo em seguida foram vedadas com plástico filme com o número de amostragem, datadas e encaminhadas para a câmara de germinação, ficando em repouso para a observação do crescimento das colônias de microrganismos. Foram feitas as análises durante dois dias, utilizando o contador de colônias, onde os microrganismos que se desenvolveram foram agrupados de acordo com as características morfológicas observadas visualmente pelos discentes. Análise da qualidade microbiológica do ar: A análise do ar ou análise microbiológica do ar foi feita por meio de fluxo forçado, da observação da manifestação de cultura por meios ópticos, através de leituras periódicas das placas. Identificação das bactérias: O que adotamos como procedimento para fazer a análise foram os aspectos morfológicos, um dos primeiros elementos considerado para fazer essa análise foi os aspectos como cor, borda, textura, pigmentação e outros elementos que podem ser usados como diferenciado, para isso, se fez necessário leituras periódicas ao longo de um certo tempo, pois as colônias vão aparecendo e elas podem mudar de aspecto visual ao longo da sua evolução. Tipo de isolamento utilizado: O isolamento aplicado foi por fluxo forçado, colocando as placas abertas por10 segundos na frente da saída do aparelho de ar condicionado. E por sedimentação ficou das 17:00 às 08:00h do dia seguinte no laboratório. Análise experimental dos dados: Para a análise experimental dos dados utilizados dois meios de cultura, um meio com antibiótico e o outro meio sem antibiótico, que teve o intuito de verificar a forma e os meios de análise dessa diversidade que consta no local estatisticamente significativa foram diferentes, comprovado pelo teste de variação do meio. OBJETIVO • Análise da diversidade da microbiota do ar, nos ar condicionado dos laboratórios de fitossanidade e saneamento. RESULTADOS E DISCUSSÕES CONTAGEM DE COLÔNIAS Os dados para contagem de colônias em meio BDA e NA contendo antibiótico e sem antibiótico, sendo analisado um total de sete amostras, subdivididas em: 02 amostras sendo BDA+ (com a presença de antibiótico); 02 amostras sendo BDA- (sem a presença de antibiótico); 02 amostras sendo de NA+ (com presença de antibiótico) e 01 amostra sendo NA-( sem presença de antibiótico) como mostra as tabelas a seguir nos dias 22 de setembro de 2021 às 17:00 h e do dia 23 de setembro de 2021 às 16:00 h. Data Ambiente Placa Meio de Cultura Bactéria Fungo Coloração 22/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 1 BDA- Inúmeros 12 Colônias Branca 22/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 2 BDA- Inúmeros 14 Colônias Branca/rosa da/amarela 22/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 4 BDA+ 0 14 Colônias Branca 22/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 6 BDA+ 0 7 Colônias Branca Data Ambiente Placa Meio de Cultura Bactéria Fungo Coloração 22/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 5 NA+ 0 2 Colônias Branca 22/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 7 NA+ 2 Colônias 4 Colônias Branca 22/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 3 NA- 10 Colônias 6 Colônias Branca Tabela1- Contagem de colônias no meio BDA Fonte: autores Fonte: autores Tabela2- Contagem de colônias no meio NA Data Ambiente Pla ca Meio de Cultu ra Bactéri a Fungo Coloração 23/09/2021 Laboratório Fitossanida de e saneamento 1 BDA- Inúmero s 15 Colônia s Branca/Laranja 23/09/2021 Laboratório Fitossanida de e saneamento 2 BDA- Inúmero s 20 Colônia s Verde/preta/rosa/bran ca 23/09/2021 Laboratório Fitossanida de e saneamento 4 BDA+ Inúmero s 15 Colônia s Branca 23/09/2021 Laboratório Fitossanida de e saneamento 6 BDA+ Inúmero s 7 Colônia s Branca Data Ambiente Placa Meio de Cultura Bactéria Fungo Coloração 23/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 5 NA+ Inúmeros 11 Colônias Branca 23/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 7 NA+ Inúmeros 5 Colônias Branca 23/09/2021 Laboratório Fitossanidade e saneamento 3 NA- Inúmeros 12 Colônias Branca Tabela3- Contagem de colônias no meio BDA Tabela4- Contagem de colônias no meio NA Fonte: autores Fonte: autores Observou-se que tanto no meio BDA+ e BDA-, a tendência é mais a proliferação de colônias de fungos, e no meio NA- foi mais a produção de colônias de bactérias e no NA+ predominou as colônias de fungos. Em ambos os meios analisados, as colônias possuíam formas, tamanhos e cores diferentes. Mesmo no meio BDA-, onde a predominância de colônias de fungos foram as que mais predominaram, algumas colônias de bactérias estavam presentes, a maioria de tamanho pequeno, com formato arredondado, lisa e de cor creme. Tanto no meio BDA+ como no meio NA +, não houve a proliferação de bactérias e isso deu pelo fato da presença de antibiótico, pois, o mesmo tem a função de impedir o crescimento das bactérias e favorecer a proliferação da colônia de fungos. Nos meios, onde não continha a presença de antibiótico foi notável que algumas colônias de bactérias podem se proliferar. Quanto as características citadas á cima o tamanho varia entre colônias grandes, médias e pequenas, com maiores predominâncias de inúmeras colônias pequenas e que não foi possível contabilizar a olho nu. No quesito cor, as cores variaram entre branco, amarelo, cinza e algumas com presença de pontos pretos. Foi notável que, praticamente as maiores em todas as amostras eram cinzas com pontos pretos, e as pequenas eram brancas e as medias, mais rosadas. Já as formas delas, variavam de acordo com o tamanho, onde as maiores eram esponjosas e as medias tinham uma forma de ramos e esporulando e as pequenas se tornavam mais lisas. Fazendo uma comparação entre os dias 22 e 23, observou-se que analisando as contagens de colônias, houve um grande aumento tanto na quantidade como no tamanho, pois a tendencia é essa, elas crescerem ao passar dos dias. Não foi possível determinar quais foram os tipos de fungos e bactérias presentes nas analises, devido que, necessitaria de uma análise microscópica mais detalhada, pois o laboratório não tinha uma estrutura adequada para esse tipo de procedimento. Não sendo possível também, determinar a UFC (Unidade Formadora de Colónias devido ao fato de não saber as espécies de cada tipo de fungo e bactérias presentes na amostra. Portanto, observou que na análise da microbiota do ar, do ar condicionado do laboratório de fitossanidade foi encontrado inúmeros colônias de fungos e bactérias. O fator temperatura tem grande importância nessa análise pois, conforme a alteração de temperatura, contribui para o crescimento microbiológico desses organismos presentes no ar. Quanto mais altas forem as temperaturas, mais crescimento de fungos haverá no local, pois o calor contribui para a proliferação desses organismos. E além do que, um ambiente climatizado artificialmente, deve-se atentar para a manutenção dos aparelhos de ar condicionado do local, cuja limpeza dos filtros interfere diretamente na contagem microbiana do ar. Afonso et al., (2004) apontam que ambientes com sistema de ar condicionado podem conter bactérias e fungos que são capazes de sobreviver em ambientes secos por longos períodos de tempo. Até o momento, nenhuma metodologia padrão foi definida para o controle da qualidade microbiológica do ar de ambientes internos. A variedade de métodos disponíveis hoje para a coleta e enumeração de microrganismos do ar, cada um com características peculiares, dificulta a elaboração ou a escolha de uma metodologia padronizada. CONCLUSÃO Observou-se que os dados obtidos com o monitoramento da qualidade do ar, referente ao ar-condicionado do laboratório de fitossanidade, foram encontradas inúmeras colônias de fungos e bactérias, a partir da análise inicial de contagem de colônias após o dia 22 e 23 de setembro, compreendendo o rápido crescimento no número de colônias e seu tamanho. Com isso, podemos dizer que, com o passar dos dias as colônias cresciam cada vez mais, pois no de acordo com os dias analisados ouve uma diferença quanto a seus tamanhos. Devido a limitação de realizar uma análise mais detalhada, não pode determinar quais foram os tipos de fungos e bactérias presentes nas analises, ainda assim, se mostra necessário uma atividade de higiene periódica dos ar condicionados do IEAA, exigindo constante atenção quanto ao processo de renovação do ar e realização da manutenção periódica, para que operem devidamente, cumprindo sua função de garantir o bem-estar e a saúde dos indivíduos já que esses vilões chegam nos ambientes climatizados através do corpo humano ou pelo ar externo. REFERENCIAS BIBIOGRAFICAS AFONSO MSM, TIPPLE AFV, SOUZA ACS, PRADO MA, ANDERS PS. A qualidade do ar em ambientes hospitalares climatizados e sua influência na ocorrência de infecções. Rev Eletrônica Enf. 2004;6(2):181-8.CAIXETA, D. S. Manual Prático de Microbiologia Geral. Cuiabá, 2012. VERMELHO, A. B.; COELHO, R. R. R.; PADRÓN, T. S. Práticas de microbiologia. São Paulo: Guanabara Koogan, 2006 MICROBIOLOGIA GERAL
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