AULA 8 IMUNODIAGNOSTICO COM REAGENTES NÃO MARCADOS

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Imunodiagnóstico
com Reagentes não
Marcados
A PA R E C I D A D E FAT I M A 
M I C H E L I N
Sumário
Imunodiagnóstico: Interação antígeno-anticorpo 
Diagnósticos de infecções, outas doenças e outros
Reação de aglutinação 
Reação de inibição da aglutinação 
Reações de precipitação 
Bibliografica 
Agradecimento 
outros determinações. 
Imunodiagnóstico
D I A G N Ó S T I C O L A B O R AT O R I A L 
R E A L I Z A D O P O R T É C N I C A S E 
C O N H E C I M E N TO S 
I M U N O L Ó G I C O S .
INTERAÇÃO
REAGENTES
MARCADOS
INTERAÇÃO
ANTÍGENO-
Imunodiagnóstico
D I A G N Ó S T I C O L A B O R AT O R I A L 
R E A L I Z A D O P O R T É C N I C A S E 
C O N H E C I M E N TO S 
I M U N O L Ó G I C O S .
INTERAÇÃO
REAGENTES
NÃO MARCADOS
INTERAÇÃO
-ANTICORPO
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A
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Detecção de antígenos
Permite diagnosticar: infecções por agentes
neoplasias, alergias, outras enfermidadee
INFECÇÕES
(vírus, bactérias, protozoários
ou outros parasitas)
DOENÇAS 
AUTOIMUNES
ALERGIAS OUTRAS 
ENFERMIDADES
antígenos e anticorpos
agentes patogênicso, doenças autoimunes
enfermidadee e outras moléculas.
DOENÇAS 
AUTOIMUNES
NEOPLASIAS
OUTRAS 
ENFERMIDADES
MOLÉCULAS
(hormônios, medicamentos, 
etc.)
Sistema Imune e Imunodiagnóstico
Importante destacar que essas técnicas
imunes que poderiam acontecer naturalmente
forma induzida em laboratório = in vitro.
Assim, é possível estudar uma doença infecciosa
obter outras informações para realizar diversos
Uso de anticorpo
(monoclonal antibody): 
diferentes
Imunodiagnóstico
cnicas representam as reações e os mecanismos
naturalmente no organismo, isto é, in vivo, mas de 
infecciosa, o estado imune do indivíduo ou
diversos diagnósticos.
anticorpo monoclonal - mab
(monoclonal antibody): produzidos para 
diferentes antígenos
Imunodiagno ́sticos que 
marcadores (ou reagentes
Esses imunodiagnósticos se baseiam
reação entre antígenos e anticorpos, reação entre antígenos e anticorpos, 
imunes ou redes.
Reação de aglutinação
Reação de neutralização
que na ̃o requerem o uso de 
reagentes marcados)
baseiam nos mecanismos envolvidos na
, como a formação de complexos, como a formação de complexos
neutralização
Reação de precipitação
Reação de aglutinação: IgM e bactérias. Os anticorpos IgM 
são mais eficientes: cada uma pode se ligar a várias
bactérias.
Reação de aglutinação
• Princípio imunológico de
formação de complexos
imunes: a ligação entre os
antígenos e seus anticorpos
específicos.específicos.
• Caracterísitca do antígeno: é
particulado, ou seja, é fixo a uma
partícula, que pode ser bactéria,
fungo, protozoário, hemácia,
látex, entre outros.
Característica da reação
Aglomeração de partículas: formando
aglutinam.
Aglutinação pode ser observada a olho
hemácias, ou com o auxílio de microscóhemácias, ou com o auxílio de microscó
particulados menores.
• Sem aglutinação (acima).
• Com aglutinação (abaixo).
• Com aglutinação ampliada.
Pode ser realizada em
tubos, placas e lâminas.
reação de aglutinação
formando complexos antígeno-anticorpo que se
olho nu, como no caso da ligação com
microscópio óptico, no caso de antígenosmicroscópio óptico, no caso de antígenos
Efeitos relacionados à proporção
Efeito pró-zona: concentração de anticorpos
Zona de equivalência: concentrações
equivalentes.
Efeito pós-zona: baixa concentração
proporção antígeno e anticorpo
anticorpos elevada no soro.
es de antígeno e anticorpo
de anticorpos no soro.
Anticorpos em grande quantidade
reagem com poucos antígenos
Pró-zona: zona de 
excesso de anticorpo
• Há anticorpos em excesso na
solução, e a quantidade de
antígenos adicionada é pequena.
• Isso se deve ao uso de um antissoro• Isso se deve ao uso de um antissoro
que não esteja suficientemente
diluído: apresenta título elevado
diluição baixa.
• Por isso, não é possível formar
complexos com todos os anticorpos
presentes na solução e não ocorre
aglutinação.quantidade
genos.
Anticorpos e antígenos
quantidades equivalentes
Zona de equivalência
• É o momento em que as
quantidades de anticorpo e
antígeno estão proporcionais.
• A ligação entre eles é máxima,
possibilitando a formação dos
complexos imunes que são
visualizados pela aglutinação.
em
equivalentes.
Anticorpos em pequena
quantidade reagem com 
antígenos em excesso
Zona de excesso de 
antígeno
• Conforme o antígeno é
adicionado à solução, sua
quantidade supera a de
anticorpos. Esse excesso
interfere na estabilidade dos
imunocomplexos,
solubilizando-os e desfazendo
os. Com isso, a aglutinação
não ocorre.pequena
com 
excesso.
Reação de 
aglutinação: 
principais tipos
Reação
Reação
Reação
Também
Reação
aglutinação
Reação
soro que
Negativo e Positivo
Positivo e Negativo
Reação de Aglutinação Direta,
Reação de Aglutinação Indireta
Reação de Inibição da aAglutinação.
Também podem ser consideradas:
Reação Qualitativa: ocorrência ou não de 
aglutinação.
Reação Semi-quantitativa: maior diluição do 
que é capaz de promover a aglutinação.
Reação de 
Aglutinação Direta
Anticorpo
particulado
hemácias
Nesses 
antigênicos
superfí
Técnica
bastante
diagnó
Exemplo
Anticorpo se liga diretamente ao antígeno
particulado, que pode ser bactéria, protozoário, 
cias, entre outros. 
Nesses casos, os epítopos ou determinantes
nicos se encontram naturalmente na
superfície da célula (antígeno).
cnica bastante sensível, de simples realização.É
bastante usada na tipagem sanguínea e no 
diagnóstico de diversas infecções.
Exemplo: determinação do tipo sanguíneo.
Hemaglutinação direta
Técnica de hemaglutinação possibilitou a 
descoberta dos diferentes tipos
sanguíneos ou do sistema ABO. Mais 
tarde, essa técnica passou a ser usada
também na identificação dos fatores Rh 
do sangue.
• A hemaglutinação é a aglutinação direta de
de antígenos naturais na superfície dessas
antiantígeno específico, os anticorpos se
cruzadas, de modo que uma aglutinação intensa
nu.
do sangue.
de hemácias que acontece devido à existência
dessas células. Em contato com um soro
ligam aos antígenos por meio de ligações
intensa ocorre e pode ser visualizada a olho
Reação de 
Aglutinação Indireta
ou Passiva
Fundamento
antígeno
ou partí
na ligaçã
Célula
utilizadasutilizadas
ou bentonita
O complexo
partícula
reagir
respectivamente
o antí
(a) Pesquisa de anticorpos
(b) Pesquisa de antígenos
Fundamento: fixação de um anticorpo ou um 
geno que se pretende estudar a uma célula
partícula inerte (que não causa interferência
ligação antígeno-anticorpo).
lula usada é a hemácia. Já as partículas
utilizadas são geralmente de látex, poliestirenoutilizadas são geralmente de látex, poliestireno
bentonita.
complexo partícula/célula + antígeno ou
cula/célula + anticorpo é colocado para
reagir com anticorpos ou antígenos, 
respectivamente. Se houver especificidade entre 
antígeno e o anticorpo, ocorre a aglutinação.
Exemplo HemaglutinaçãoHemaglutinação Indireta
Teste de Hemaglutinação
Fonte: Telelab
Hemaglutinação
Teste de Hemaglutinação Indireto 
LEITURA
Resultado reagente
(“véu”)
Entre reagente e não reagente = indeterminado
Indireto - Teste Quantitativo
LEITURA
Resultado não reagente
(“botão”)
Entre reagente e não reagente = indeterminado
Vamos treinar a leitura?Vamos treinar a leitura?
Fonte: Telelab
Titulação em
Imunoensaios
• A titulação é um procedimento
laboratorial comum, realizado
com o objetivo de quantificar
concentração de um reagente.concentração de um reagente.
• Em imunoensaios, o TÍTULO é
última diluição de soro (em uma
sequência crescente) com
capacidade de gerar o resultado
analisado.
Reação de Inibição
da Aglutinação
Essa reaçã
outros
particularidade
corrente
hemácias
Se o organismo
revestemrevestem
a aglutinaçã
A reaçã
utilizada
vírus causadores
rubéola
reação envolve alguns patógenos, como vírus e 
micro-organismos que apresentam uma
particularidade:ao adentrar o organismo e chegar à 
corrente sanguínea, são capazes de se ligar às
cias e de causar a aglutinação desses elementos.
organismo hospedeiro possuir anticorpos, eles as 
revestem e as impedem de se ligar às hemácias. Assim, revestem e as impedem de se ligar às hemácias. Assim, 
aglutinação não ocorre.
reação de inibição da aglutinação direta é bastante
utilizada para detectar a presença de anticorpos contra 
causadores de algumas doenças, como sarampo, 
rubéola, etc.
• Reação de Inibição da 
Aglutinação para o diagnóstico
Imunosorológico da Rubéola.
• Fonte: JoVE
Reação de Inibição da da Hemaglutinação
Reação de 
Neutralização ou
Soroneutralização
Técnica
e a quantidade
Tem o 
capazes
Em geral
também
ambos 
las à morte
Por isso
para proteger
Os anticorpos bloqueiam as estru-
turas do vírus usadas para se aderir à 
membrana celular do hospedeiro ou os
anticorpos impedem que o capsídeo do 
vírus seja desestruturado. Em ambas 
as situações, o vírus acaba sendo
inativado (neutralizado).
cnica imunológica usada para detectar a presença
quantidade de anticorpos no soro.
Tem o objetivo de detectar os anticorpos que são
capazes de neutralizar determinado antígeno.
geral, esse antígeno é um vírus, mas pode ser 
m uma toxina de um agente infeccioso, sendo
ambos capazes de gerar prejuízos às células ou levá-
morte. 
isso, esses agentes precisam ser neutralizados
proteger o organismo.
Reação de 
Neutralização A reaçã
ser usada
para
caso
o vírus
• Vírus da poliomielite (possui
variações antigências): tipo I, o tipo
II e o tipo III. Em um primeiro
momento, um diagnóstico
imunológico pode indicar a presença
de poliovírus na amostra de um
paciente.
Para 
animais
anticorpos
antígeno
hiperimune
em contato
neutraliza
paciente.
• Para identificar o tipo do vírus da
poliomielite (I, II ou III),
realizar outras reações de
neutralização no soro: antipólio I,
antipólio II e antipólio III. Na reação
em que o vírus for neutralizado, o
soro específico usado nela
determina qual variação do vírus
está presente na reação.
reação de neutralização também pode
usada em diagnósticos de virologia, 
para detectar um vírus isolado. Nesse
caso, os anticorpos são conhecidos, mas
rus (antígeno) não.
Para isso, são utilizados soros de outros
animais, como coelhos, que produzem os
anticorpos específicos para determinado
geno viral. Esse soro é considerado
hiperimune a esse antígeno e, ao entrar
contato com o vírus isolado, 
neutraliza-o.
Reação de neutralização
É uma técnica imunológica que apresenta
princípios da reação entre o anticorpo
neutralização do antígeno, é preciso que
só será neutralizado por um anticorpo especí
altamente específica e sensível.
Além de ser um teste qualitativo, a possibilidade
do anticorpo neutralizante faz com que
essas características, a reação de neutralizaçã
conhecer o grau de imunidade de uma populaçã
determinar a capacidade imunológica da
neutralização
apresenta muitas vantagens. Baseia nos
anticorpo e o antígeno e, para que haja a
que haja determinado anticorpo (o antígeno
específico para ele). Por isso, a reação é
possibilidade de determinar a concentração
esse teste seja também quantitativo. Por
neutralização é comumente utilizada para
população a certos agentes infecciosos e
da vacinação.
Reação de Precipitação
Caracterizada pela formação de precipitados
ligação entre antígenos e anticorpos solúveis
Esses complexos imunes formam agregados
sedimento, quando estão em meio líquidosedimento, quando estão em meio líquido
quando se encontram em gel. Podem ser
de um microscópio óptico.
É́ necessário que a quantidade
proporcionalmente equivalentes – zona
pró-zona e pós-zona.
Precipitação ou Imunoprecipitação
precipitados: complexos imunes formados pela
solúveis.
agregados que se apresentam na forma de
quido, ou na forma de linhas de precipitaçãoquido, ou na forma de linhas de precipitação
ser observados a olho nu ou com o auxílio
de antígeno e anticorpos sejam
zona de equivalência. Evitar a ocorrência de
Técnicas de imunodifusão radial (simples e 
Imunodifusão radial simples:́ empregada quantificar
e outras proteínas do soro.
Um reagente imobilizado em um meio (no
conhecida ser capaz de proporcionar a difusã
O reagente colocado na cavidade se difundeO reagente colocado na cavidade se difunde
concentrações do antígeno e do anticorpo
complexos imunes que se precipitam na forma
O diâmetro do halo é diretamente proporcional
cavidade, o antígeno, por exemplo. Isso ocorre
anticorpo) imobilizado no gel é uniforme por
radial (simples e dupla)
quantificar os anticorpos (como IgG, IgA e IgM)
(no caso o gel) e presente em concentração
difusão de moléculas do outro reagente.
difunde radialmente pelo gel e, quando asdifunde radialmente pelo gel e, quando as
anticorpo atingem a zona de equivalência, formam
forma de halo em torno da cavidade.
proporcional à concentração do reagente presente na
ocorre porque a concentração do reagente (o
por todo meio.
Imunodifusão
• Os antígenos aplicados no gel se
concentrações de antígeno e de anticorpo
se precipitam formando halos.
radial simples
se difundem e, à medida em que as
anticorpo se equivalem, os complexos imunes
Bibliografia
• Silva, Adeline Gisele 
Teixeira. Imunologia aplicada : Teixeira. Imunologia aplicada : 
fundamentos, técnicas laboratoriais e 
diagnósticos. 1. ed. São Paulo : 
Érica, 2014.
• Podes ter de travar uma 
batalha mais de uma vez, para 
a vencer.
Margaret Thatcher
Obrigada!!!!