DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO E MOLECULAR APLICADOS À PARASITOLOGIA

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DIAGNÓSTICO SOROLÓGICO E MOLECULAR APLICADOS À PARASITOLOGIA
Professora Renata Ramos
INTRODUÇÃO
Diagnóstico Parasitológico :
Experiência
Perdas de características
Determinação apenas, em alguns casos, do gênero
Baixa carga parasitária, má conservação da amostra, coloração inadequada
Diagnóstico Sorológico – método indireto de detecção
Histórico imunológico
Compartilhamento de epítopos
INTRODUÇÃO
Respostas variáveis em cada indivíduo
Não identificação de infecção passada e infecção recente
Janela imunológica
Dificuldade do diagnóstico na fase aguda da infecção 
INTRODUÇÃO
Testes Moleculares
Amplificação do DNA do parasita
Detecção de Antígenos Circulantes por anticorpos monoclonais
Utilização de proteínas recombinantes
Trypanosoma cruzi – Doença de Chagas 
PCR
Padrão Ouro para esta parasitose
Altamente sensível 
Resultados sorológicos duvidosos
Seleção de doadores de sangue, inquéritos epidemiológicos, infecção congênita
Demorada execução, elevado custo, falsos positivos
Critério de cura pós-tratamento
Trypanosoma cruzi – Doença de Chagas 
Testes Sorológicos
Elevada complexidade antigênica
Elevada sensibilidade x Elevada especificidade?
Imunofluorescência Indireta
Teste de referência na pesquisa de IgM anti-Trypanosoma cruzi na fase aguda da doença
Falsos negativos para detecção de IgG
Qualidade da microscopia de fluorescência e dos antígenos, diluição do conjugado, critério de leitura
Trypanosoma cruzi – Doença de Chagas 
Reação positiva – toda a parede celular fluorescente
Trypanosoma cruzi – Doença de Chagas 
Western Blotting
Antígenos de secreção e excreção
 de tripomastigotas
100% de sensibilidade e especificidade
 em amostras de pacientes chagásicos,
 forma congênita, fase aguda, crônica 
 e indivíduos não chagásicos.
Leishmania – Leishmaniose 
Testes Imunológicos
Teste Intradérmico – Hipersensibilidade Retardada
Simples e bastante útil no diagnóstico da LT
Quase sempre negativo na fase aguda da LV
Imunofluorescência Indireta
Alta especificidade quando utilizadas formas amastigotas
Reações cruzadas com chagas, tuberculose e hanseníase
Leishmania – Leishmaniose 
Testes Imunológicos
Reação Imunoezimática
Antígenos específicos
Detecção apenas em caso de doença ativa
Negativos em assintomáticos
Sensibilidade e especificidade acima de 95% em pacientes com Leishmania donovani
Leishmania – Leishmaniose 
Sondas de DNA e PCR
Comparada com a sorologia para LV em cães infectados, foi 100% sensível e mais específico que a sorologia
Provável Padrão Ouro para diagnóstico da Leishmaniose
Toxoplasma gondii – Toxoplasmose 
PCR
Mesmo em pequeno número ou lisado
Alto custo e rigoroso controle para evitar resultados falsos
Ainda não padronizada de forma definitiva 
Relatos de pacientes IgM-negativos com PCR positivas estão presentes na literatura, desconfiando-se de falsa positividade ou se considerando parasitemia na fase crônica da doença
Vários casos de PCR positivas em pacientes assintomáticos são referidos e se desconhece o valor preditivo positivo do teste.
Toxoplasma gondii – Toxoplasmose 
Ensaio Imunoenzimático
ELISA – IgG
Teste de Avidez para IgG
Pesquisa de IgM – resultados falso-positivos (fator reumatóide)
Pesquisa de IgA e IgE – infecção recente
Toxoplasma gondii – Toxoplasmose
Diagnóstico Toxoplasmose Gestacional e Congênita 
Toxoplasma gondii – Toxoplasmose
Prof. Silvana Ferreira Caires, 2017 
DIAGNÓSTICO EM GESTANTES
ELISA OU IFI
IgG e IgM
NEGATIVAS
IgG / +
IgM / - 
IgG e IgM
POSITIVA
AUSÊNCIA
 DE 
INFECÇÃO
INFECÇÃO
PASSADA
TESTE DE 
AVIDEZ
AVIDEZ < 30%
INFEC. AGUDA
AVIDEZ > 60%
INFEC. LATENTE
AVIDEZ
>30% e < 60%
INDETERMINADO
DIAGNÓSTICO NO PACIENTE IMUNODEPRIMIDO 
Ressonância Magnética
Tomografia Computadorizada
Imunocompetente: 
Rastreio trimestral
Imunodeprimido:
Rastreio bimestral
RECÉM-NASCIDO
1ª semana até 1 mês após o parto
PCR
A partir da 2ª semana após o parto
IgM (teste captura)
IgA (ELISA)
Schistosoma mansoni– Esquistossomose
Ensaio Imunoenzimático – ELISA E RIFI
Pesquisa de Anticorpos
Tanto em baixa em infecção quanto em infecção avançada
IgA e IgG contra hemocianina – marcadores de fase aguda da doença
IgM e IgG (cercária, esquistossômulo, verme adulto e ovo) – marcadores de infecção tanto na fase aguda como fase crônica da infecção
Reações cruzadas com Ancylostoma, Ascaris lumbricoides
Schistosoma mansoni– Esquistossomose
Ensaio Imunoenzimático
Pesquisa de Antígenos
Sensíveis em infecções com elevada carga parasitária
Baixa sensibilidade em casos de baixa carga parasitária
Schistosoma mansoni– Esquistossomose
Ensaio Imunoenzimático