enzimas proteoliticas

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ
CAMPUS PROFESSORA CINOBELINA ELVAS – CPCE
CURSO: Engenharia Florestal 
DISCIPLINA: Química Orgânica
DOCENTE: Profa. Dra. Francisca Diana S. Araújo
Estudo da atividade proteolíticas de enzimas presentes em frutos
Discentes: 
Greice Evangelista Avellar
Leandra Ribeiro da Silva
Bom Jesus – PI
2022
1. Introdução 
As proteínas se caracterizam por ser o grupo mais abundante de macromoléculas, encontradas dentro e fora das células, e de importância vital aos seres vivos. Suas funções vão desde catálise de reações químicas (enzimas), transporte de outras moléculas, transmissão de impulsos nervosos, proteção imunitária e até mesmo função hormonal (ALMEIDA et al., 2013)
As enzimas são proteínas que apresentam a capacidade de atuar como catalisadoras biológicas, sendo que praticamente todas as reações químicas presentes no organismo são catalisadas por essas proteínas. As enzimas possuem atividade catalítica específica, e ainda, apresentam elevada especificidade em relação aos reagentes cujas transformações químicas catalisam (HALPERN, 1997). Algumas enzimas, mais especificamente as proteases são enzimas hidrolíticas que possuem a capacidade de quebrar as ligações peptídicas das proteínas (DOS SANTOS, 2020)
No meio de incontáveis funções, a de maior destaque é a sua atividade enzimática, onde é capaz de acelerar a reação química, diminuindo o gasto de energia. Existem enzimas capazes de quebrar as ligações peptídicas das proteínas por meio de hidrólise, essas recebem o nome de enzimas proteolíticas ou protease, podendo ser encurtadas em fonte animal ou vegetal. 
Sabendo disso, o presente trabalho tem objetivo de analisar a presença ou não de enzimas proteolíticas no abacaxi e mamão, usando como substrato a gelatina, que contém a proteína colágeno.
2. 
3. Objetivos 
3.1. Objetivos gerais
Analisar a atividade enzimática do mamão e abacaxi, utilizando como substrato a gelatina, portadora da proteína colágeno.
3.2. Objetivos específicos 
Verificar a ocorrência de proteólise no suco das frutas em contato com os substratos.
4. Parte Experimental 
4.1. Materiais, reagentes e solventes
A proposta efetuada para o presente experimento foi a utilização de materiais de baixo custo. Assim, foi utilizado os seguintes listados:
· Abacaxi;
· Mamão;
· Seringa de 10ml;
· Copos descartáveis de 50ml ou 90ml;
· Copos de vidro;
· Pote de vidro de boca larga ou béquer de 500ml;
· Canudos plásticos;
· Amaciante para carne;
· Pacote de pó de gelatina (com ou sem sabor, não interfere no resultado);
· 200 ml de água;
· Colher;
· Faca;
· Peneira (se o liquidificador não tiver peneira);
· Liquidificador;
· Fogão;
· Panela pequena;
· Geladeira;
· Caneta e papel para demarcar os copos e canudos.
4.2. Procedimento experimental
No primeiro momento, as frutas (abacaxi e mamão), utilizando a faca, foram cortadas em fatias menores e processadas no liquidificador com água suficiente para fazer o suco de ambas. Após esse procedimento, o suco de ambos foi adicionado nos copos de vidro, em seguida foi feito o preparo da gelatina, seguindo as instruções da embalagem da mesma, utilizando uma panela e colocada no pote de vidro.
Os extratos, a água e o amaciante para carne foram colocados nos copos descartáveis com o auxílio da seringa, os mesmos receberam seus respectivos nomes ou numerados de 1 a 4, e logo após foi feita a sequência dos ensaios (Tabela 1).
Exemplos: tabela 1-sequência dos tubos/copos de ensaio.
	Tubos/copos
	Composição
	1
	10 ml de gelatina +3ml de água (controle negativo)
	2
	10 ml de gelatina + amaciante para carne (controle positivo)
	3
	10 ml de gelatina + 3ml de extrato de mamão
	4
	10 ml de gelatina + 3ml de extrato de abacaxi
Para contrapor os resultados, se fez um controle positivo e um negativo, onde o negativo foi utilizado água e gelatina, onde tem a ocorrência padrão do gel mostrando a não ocorrência de proteólise. O controle positivo foi inoculado amaciante de carne na gelatina, sendo o padrão para a ocorrência de proteólise, já que o amaciante tem a enzima proteolítica denominada papaína
Após ser preparada a sequência de ensaios, os copos com os substratos foram colocados na geladeira até o substrato 1 (controle negativo) se gelificar por completo, isso aconteceu entre 00h30mn à 1hr. Observa-se os resultados na (Tabela 2).
Figura 2. Estágio final do experimento. 
	Tubos/copos
	Composição
	Resultado
	1
	10 ml de gelatina +3ml de água (controle negativo)
	Houve ocorrência de proteólise 
	2
	10 ml de gelatina + amaciante para carne (controle positivo)
	Não houve ocorrência de proteólise
	3
	10 ml de gelatina + 3ml de extrato de mamão
	Não houve ocorrência de proteólise
	3
	10 ml de gelatina + 3ml de extrato de abacaxi
	Não houve ocorrência de proteólise
5. 
6. Resultados e Discussão 
Ao observar na figura 1, podemos ver os recipientes com seus respectivos substratos em estágio inicial do experimento, e podemos observar a figura 2, o experimento em seu estágio final. Após um tempo na geladeira retiramos os copos de plástico e introduzimos novamente os canudos para a verificação do gel. Ao analisarmos os materiais dos copos da figura 2, podemos observar a diferença na gomosidade de ambos, vendo que o único que gelificou foi o nosso controle negativo (Tabela 2).
No mamão quando introduzido os canudos, notou-se que, os canudos atravessaram, indicando a presença de enzimas no fruto, não ocorrendo o gel. Assim o procedimento se repetiu nos demais, obtendo o mesmo resultado, exceto no controle negativo.
Com isso, se prova que há enzimas proteolíticas no mamão e abacaxi. Nota-se, que as enzimas presentes impediram a formação da viscosidade da gelatina nos demais substratos (2,3 e 4), devido a quebra dos polímeros do colágeno.
Figura 1. Substratos em seu estágio inicial.
Figura 2. Estágio final do experimento.
7. Conclusões 
Portanto, percebe-se que há enzimas proteolíticas no mamão e abacaxi, pois impediram a ocorrência do gel, o que provou a não proteólise. Sendo assim, essas frutas são importantíssimas para nosso organismo na absorção de alimentos ricos em proteínas, pois faz com que ocorra hidrólise dessas proteínas nos organismos.
Questionário 
1. Quais as frutas utilizadas no experimento que apresentam enzima proteolítica? Como é possível chegar a essa conclusão?
As frutas usadas foram mamão e abacaxi, e as duas apresentam enzimas proteolíticas, se verificou isso apos o não congelamento da gelatina com as mesmas dentro . 
2. Quais variações poderiam ser feitas nesse experimento para evidenciar ainda mais o efeito da enzima? (Sugestão: relacione tais variações com os fatores que afetam atividade enzimática).
Poderia evidenciar ainda mais o efeito mudando o pH ótimo em que a enzima proteolítica atua, em torno de 7 ou 8.
3. Qual seria o resultado esperado caso fosse utilizado suco de figo no experimento? Explique.
O resultado seria semelhante ao das frutas testadas, já que esse fruto tem a enzima proteolítica Ficcina.
4. Além das descritas no texto, para quais outros fins essas enzimas proteolíticas poderiam também ser utilizadas?
Pode ser usada para substituir produtos químicos como compostos cáusticos, ácidos e solventes tóxicos que agridem o meio ambiente, também pode ser usado na clarificação de cerveja na indústria. 
5. Explique por que um fruto possui enzimas proteolíticas (relacionar com processo de amadurecimento).
As enzimas agem quebrando o amido transformando em açúcar, chegando o amadurecimento.
8. Referências Bibliográficas 
Artigos:
ALMEIDA, V. V. DE et al. Análise Qualitativa de Proteínas em Alimentos Por Meio de Reação de Complexação do Íon Cúprico. Química nova na escola, v. 35, n. 1, p. 34–40, 2013.
 
BERG, Jeremy M.; STRYER, Lubert; TYMOCZKO, John L. Bioquímica. 7. ed. E-book digital. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2014
DOS SANTOS, Yago Queiroz et al. ISOLAMENTO E IDENTIFICAÇÃO DE MICRORGANISMOS DE AMBIENTE HIPERSALINO E CARACTERIZAÇÃO DE UMA PROTEASE EXTRACELULAR. 72ª Reunião Anual da SBPC. 2020
HALPERN, M.J.Bioquímica. 1.ed, Editora Lidel, Lisboa, Portugal, p. 233-303, 1997. Editora, 2018.