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FUNDAÇÃO EDUCACIONAL MIGUEL MOFARREJ CENTRO UNIVERSITÁRIO DE OURINHOS CURSO DE MEDICINA VETERINÁRIA NOTURNO GABRIEL GAINO ITALO LUIS LUANA RAMOS NYCHOLE MEDEIROS RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA ANÁLISE DE MEL OURINHOS-SP 2022 LISTA DE IMAGENS Imagem 01 - Transferência do Ágar do balão de fundo chato para placa de Petri em um raio de 30cm do Bico de Bunsen ................................................................................... 6 Imagem 02 - Ágar transferido do balão de fundo chato para Placa de Petri ...... 7 Imagem 03 - Transferência da agua peptonada do balão de fundo chato para a proveta em um raio de 30cm do Bico de Bunsen............................................................ 7 Imagem 04 - Imagem 04 - Mistura da agua peptonada com o mel .................... 8 Imagem 05 - Tubo de ensaio com as amostras ................................................. 8 Imagem 06 - Amostra sendo espalhada na superfície do meio de cultivo na placa de Petri .................................................................................................................... 9 Imagem 07 - Placa 1 – 1:10 ............................................................................. 10 Imagem 08 - Placa 2 – 1:100 ........................................................................... 10 Imagem 09 - Placa 3 – 1:1000 ......................................................................... 11 Imagem 10 – Tabela de chataway ................................................................... 11 SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO ................................................................................................ 4 2 MATERIAL E MÉTODOS ................................................................................ 5 2.1 Determinação de PH e temperatura .......................................................... 5 2.2 Prova de filtração ...................................................................................... 9 3 RESULTADOS E DISCUSSÃO ....................................................................... 9 4 CONCLUSÃO ................................................................................................ 12 REFERÊNCIAS ................................................................................................ 13 4 1 INTRODUÇÃO O mel é considerado um fluido viscoso, aromático e doce elaborado por abelhas a partir do néctar e/ou exsudatos sacarínicos de plantas, principalmente de origens florais, os quais, depois de levados para a colmeia por abelhas, são amadurecidos por elas e estocados no favo para a sua alimentação (BRASIL, 2000). O mel é proveniente das abelhas e algumas vespas, porém, devido a sua domesticação antiga e por ser originária dos principais consumidores, a abelha Apismellifera L. é a espécie considerada como principal produtora de mel comumente utilizado para o consumo humano, apesar da grande diversidade de espécies de abelhas existentes e que produzem mel de boa qualidade, como as abelhas sem ferrão das tribos Meliponini e Trigonini (ALVES etal, 2005). Dentre os produtos fornecidos pelas abelhas, o mel é sem dúvida o mais conhecido e difundido (ABREU, 2003). Com sua variedade de cores e sabores é provavelmente o mais interessante ingrediente e adoçante que pode ser utilizado na produção de bebidas. (NHB, 2006). A composição do mel depende, basicamente, da composição do néctar da espécie vegetal produtora e da espécie de abelha que o produz, conferindo-lhe características específicas enquanto que as condições edafo-climáticas e o manejo do apicultor têm menor influência nesta composição (WHITE JÚNIOR, 1978). O mel é constituído, essencialmente, por diferentes açucares, com predominância de glicose e frutose. que perfazem cerca de 70% do total de carboidratos, além de contribuírem na sua doçura (CRANE, 1983; MOREIRA: DE MARIA, 2001). Além dos açúcares, o mel é composto por enzimas, vitaminas, aminoácidos, minerais, substâncias bactericidas e aromáticas, ácidos orgânicos, ácidos fenólicos, flavonóides e grãos de pólen, bem como outros ingredientes, como a cera de abelhas procedentes do processo de extração, o que confere ao mel características como a cor, odor e sabor (KOMATSU; MARCHINI; MORETI, 2002; SOUZA et al., 2008). As propriedades do mel são influenciadas por vários fatores, tais como a composição, a temperatura, além da quantidade e do tamanho dos cristais. A viscosidade é um parâmetro extremamente importante para caracterizar um determinado tipo de mel. Essa propriedade é particularmente crítica durante o armazenamento, manuseio e processamento (ASSIL et al.., 1991; LARA et al., 1976). 5 No Brasil, a produção comercial do mel está ligada à apicultura cuja história teve início com a inserção das abelhas europeias Apis mellifera no Estado do Rio de Janeiro em 1839, realizada pelo Padre Antônio Carneiro. No entanto, a apicultura brasileira avançou a partir da introdução das abelhas africanas (Apismellifera scutellata) em 1956, que culminou na africanização das demais subespécies existentes no país. Após o desenvolvimento de técnicas adequadas de manejo ocorrido na década de 70 a apicultura passou a ser intensamente praticada em todos os estados brasileiros (SOUZA, 2004). Sob o ponto de vista nutricional, pode-se afirmar que o mel é um alimento bastante denso em calorias. Cerca de 100 gramas do produto contêm 78,1g de glicídios e fornecem 321,5 quilocalorias sendo, portanto, uma boa fonte energética. Além de seu valor energético o mel possui outros nutrientes como minerais e vitaminas, sendo considerado um alimento de alta qualidade para utilização na nutrição humana (FRANCO, 2001). 2 MATERIAIS E MÉTODOS 2.1 Confecção de meio de cultivo para contagem de bolores e leveduras Abaixo os meios de cultivo que podem ser utilizados: Ágar batata Dextrose – 39g / 1L Ágar rosa bengala +1% acido tartárico 10% Ágar Sabouraud Dextrose 36,4g / 1L Abaixo os meios de líquidos para diluição decimal: Solução NaCl 0,9% Solução peptona de carne 0,1% Solução peptona de carne 0,1% + NaCl 0,9% O ágar de escolha para a aula pratica foi o Batata Dextrose, até mesmo porque é o ágar que favorece o crescimento de bolores e leveduras no mel. A capacidade das placas de Petri em ml são: P: 10ml M: 20-25ml G: 50-70ml 6 Vamos utilizar as placas M para a confecção dos meios de cultivos, partindo para os cálculos: vamos utilizar 3 placas X 25ml por placa = 75ml, onde arredondamos para 100ml. O calculo para saber a quantidade de ágar a ser pesado foi da seguinte forma: X--------100 39g ---1.000L Logo X= 3,9g/100ml. O meio liquido para diluição escolhido para a aula pratica foi o Solução Peptona de carne 0,1%. Utilizar 225ml de agua deionizada que serve para diluição de meios sólidos + 9ml para tubo de ensaio para diluição decimal. Para aula pratica foi utilizado 250ml de agua deionizada, portanto deve-se pesar 0,25g de Solução Peptona de carne 0,1%. Após os resultados dos cálculos com suas devidas quantidades definidas demos inicio a elaboração das placas e ao meio de cultivo. Com auxilio de uma balança de precisão e um papel que serve como forma de transferir o ágar de forma solida, foi pesado 3,9g de ágar batata Dextrose e o mesmo foi colocado em um balão de fundo chato com 100 ml de agua deionizada, foi tampado o frasco com uma boneca e o ágar foi homogeneizado com a agua deionizada. Após este procedimento o balão de fundo chato é levado para uma auto clave onde permanece por 15 minutos a 121 graus celsius. Passados os 15 minutos do balão na autoclave, fizemos um processo de resfriamento do frasco com torneira de água e demos ínicio a transferência do ágar dobalão de fundo chato para as 3 placas que serão utilizadas. Este processo deve ser feito a um raio de 30cm do Bico de Bunsen conforme mostra a imagem 01. Imagem 01 - Transferência do Ágar do balão de fundo chato para placa de Petri em um raio de 30cm do Bico de Bunsen. 7 A placa fica sobre o balcão, o balão de fundo chato é aberto e flambado sua boca, sendo feita a transferência do agar para a placa. Os 100ml foi utilizado nas 3 placas de forma igual para todas, conforme mostra a imagem 2: Imagem 02 - Ágar transferido do balão de fundo chato para Placa de Petri. Para o preparo da Agua peptonada foi utilizado 250ml de agua deionizado em um balão de fundo chato e com auxilio de uma balança de precisão e um papel, foi pesado 0,25g de Solução de peptona de carne 0,1% que foi colocada e homogeinizada com a agua deionizada. Logo após este procedimento com auxilio da balança de precisão e um plástico estéril foi pesado 25g de mel puro. Com auxilio de uma proveta, dosamos 225ml da agua peptonada, em um raio de 30cm do Bico de Bunsen conforme mostra a imagem 3. Imagem 03 - Transferência da agua peptonada do balão de fundo chato para a proveta em um raio de 30cm do Bico de Bunsen. 8 Após feita essa transferência, colocar esses 225ml de agua peptonada nos 25g do mel que foi pesado e está no plástico e homogeneizar.a amostra, conforme mostra a imagem 4. Imagem 04 - Mistura da agua peptonada com o mel. No próximo passo foi utilizado 3 tubos de ensaio, onde em 2 tubos foi colocado 9ml de agua peptonada e no que sobrou foi colocado 10ml da amostra de agua peptonada com o mel conforme mostra a imagem 5 abaixo. Imagem 05 - Tubo de ensaio com as amostras. A amostra com 10ml da agua peptonada com o mel vai ser a amostra 1:10, desta amostra de 1:10 com auxilio de uma pipetadora automática é retirado 1 ml da amostra e colocado no tudo 2 onde essa amostra vai ser 1:100 e desta amostra de 1:100 também com auxilio de uma pipetadora automática foi retirado 1ml e 9 transferido para o tubo 3 onde esse tubo se tornou a maostra 1:1000. Novamente em um raio de 30cm do Bico de Bunsen vai ser feita a transferência dessas amostras dos tubos de ensaio para as placas de Petri. Após feita a transferência com um auxilio de um rodinho de vidro é feito o espalhamento da amostra pela superfície do meio de cultivo da placa conforme mostra a imagem 6. Imagem 06 - Amostra sendo espalhada na superfície do meio de cultivo na placa de Petri. Após feita a confecção das placas, elas foram identificadas como 1:10, 1:100 e 1:1000 e levadas para uma estufa, onde ficaram por 4 dias. 2.2 teste de percentual de umidade Com auxilio de um refratômetro Brix e umas gotas do mel, foi realizado a medida de umidade do mel. 3 RESULTADO E DISCUSSÃO Passados 4 dias que as placas com as amostras estavam na estufa, fomos realizar a observação das mesmas para ver se houve crescimento de bolores e leveduras e os resultados obtidos estão nas imagens abaixo: 10 Imagem 07 - Placa 1 – 1:10 Conforme podemos ver na imagem acima teve o crescimento de 3 colônias de levedura. Imagem 08 - Placa 2 – 1:100 Conforme podemos ver na imagem acima, teve o crescimento de 4 colonias de leveduras. 11 Imagem 09 - Placa 3 – 1:1000 Conforme podemos ver na imagem acima, não houve crescimento de nenhum tipo de colônia. O resultado do teste de percentual de umidade foi de 79%. Imagem 10 – Tabela de Chataway 12 4 CONCLUSÃO Concluímos que o mel está apto a venda e consumo de acordo com os testes físico-químico, já em relação a parte microbiológica, não há uma legislação que cubra valores de referência, com exceção da salmonela. Portanto, de acordo com os resultados obtidos podemos observar que não houve nenhuma adulteração ou fraude e consequentemente o mel analisado não compromete a saúde. 13 REFERÊNCIAS 1. ABREU, B. X. Avaliação físico-química e microbiológica de méis não inspecionados comercializados no Estado do Rio de Janeiro. Rio de Janeiro, 2003. 56f. Monografia (Graduação Medicina Veterinária), Universidade Estácio de Sá. 2. ALVES, Rogério Marcos de Oliveira; CARVALHO, Carlos Alfredo Lopes de; SOUZA, Bruno de Almeida; SODRÉ, Geni da Silva; MARCHINI, Luis Carlos. Características físico-químicas de amostras de mel de MeliponamandacaiaSmith (Hyme noptera: Apidae). Revista Ciência e Tecnologia de Alimentos v. 25, n. 4. p. 644- 650. Campinas, 2005. 3. AROUCHA E. M. M.; OLIVEIRA A. J. F.; NUNES, G. H. S.; MARACAJÁ P. B. Qualidade do mel de abelha produzidos pelos Incubados da iagram e comercializado no Município de Mossoró/RN. Caatinga, Mossoró, v.21, n.1, p.211-217, janeiro/março de 2008. FUNDAÇÃO EDUCACIONAL MIGUEL MOFARREJ CENTRO UNIVERSITÁRIO DE OURINHOS CURSO DE MEDICINA VETERINÁRIA NOTURNO NYCHOLE MEDEIROS OURINHOS-SP 2022 1 INTRODUÇÃO 2 MATERIAIS E MÉTODOS 3 RESULTADO E DISCUSSÃO 4 CONCLUSÃO REFERÊNCIAS