Aula 1 - DiagnÃstico laboratorial de DoenÃas Infecciosas 2022

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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DE 
DOENÇAS INFECCIOSAS EM AVES E SUÍNOS
Profª Drª Maria Gabriela
SISTEMA IMUNE
Biosphera
INTRODUÇÃO DE DIAGNÓSTICO LABORATORIAL
➢Suspeita clínica – diagnóstico deve ser rápido e seguro.
➢Expressão da doença infecciosa – considerar virulência do agente,
nível de exposição e susceptibilidade do hospedeiro.
➢Correlacionar – histórico, anamnese, quadro clínico, achados de
necrópsia e dados laboratoriais.
COLETA E TRANSPORTE DE MATERIAIS BIOLÓGICOS
▪ Embalagem segura
▪ Suabes com meios de transporte ou secos.
▪ Temperatura – ambiental, refrigerada ou congelado
▪ Sangue, soro (sem hemólise), urina/ urato, fezes,
secreções, tecidos, material do ambiente...
DIAGNÓSTICO DIRETO
EXAME DIRETO
CULTURA E IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS
❑Colher o bordo da lesão
❑Enviar material em envelope ou sacos tipo ziplock
– To. ambiente
❑Agar específico – Micosel, Sabouraud...
❑Enriquecimento – Azeite, batata...
❑Incubação – Tº ambiente – aproximadamente 
35oC
❑Observação por até 21 dias
❑Avaliar tempo crescimento, coloração e 
morfologia, conídeos...
Aspergillus fumigatus
Candida albicans
EXAME DIRETO
▪ Exame das fezes para detecção de ovos, oocistos e 
larvas das fezes.
▪ Exame de ectoparasitas
EXAME DIRETO 
DIAGNÓSTICO BACTERIANO
Formas bacterianas
A B
EXAME DIRETO
▪ material clinicamente suspeito (pulmão, intestino, suabe,...)
▪ Isolamento do agente 
▪ Bioquímico
▪ PCR
▪ Antibiograma
CULTURA E IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS
Caldo de enriquecimento
+ -
Crescimento em meio sólido - Plaqueamento
Bioquímico
ANTIBIOGRAMA 
▪Resistência múltipla
▪Resistência estendida 
(ESBL - Extended
Spectrum β-lactamases)
▪Pan resistência (classes)
TÉCNICAS DE VIROLOGIA
EXAME DIRETO
Isolamento viral em ovos embrionados → ovos embrionados SPF (Specific
Pathogen Free).
▪ 0,1 a 0,2 mL por ovo
▪ 6 a 12 dias de incubação
▪ 3 a 5 passagens cegas 
➢Método de médio custo e que exige boas condições laboratoriais.
INOCULAÇÃO EM OVO EMBRIONADO
CULTIVO CELULAR
Isolamento em cultivo celular – cultivos primários (Ex. FEG – fibroblastos 
de embrião de galinha) e células de linhagem (células VERO).
EX.: DIAGNÓSTICO DE CORONAVIRUS PARA 
TÉCNICAS MOLECULARES - PCR
VARIAÇÕES DA TÉCNICA
▪Multiplex
▪RT PCR
▪Nested PCR
▪Real Time PCR
▪AFLP – Tipagem...
EXAME DIRETO
MICROSCOPIA ELETRÔNICA
Aumento até 400.000 X
TÉCNICAS SOROLÓGICAS
MÉTODOS INDIRETOS
▪ Quantifica através de expressões, números, fórmulas matemáticas e estatística.
➢Objetivos dos métodos sorológicos:
▪ Conhecer níveis de ac. vacinais (comparação com perfil de normalidade).
▪ Detecção de doenças.
▪ Comprovar eficácia das vacinas.
▪ Ajustar e elaborar programas de vacinação.
VÍRUS (REFERÊNCIA)
+
SORO 
(DESCONHECIDO)
NEUTRALIZAÇÃO
POSITIVA (tem Ac)
NEUTRALIZAÇÃO
NEGATIVA (Não tem AC)
Negativo – ação viral
Confirmado positivo –
sem ação viral devido Ac
neutralizantes
SORONEUTRALIZAÇÃO
utilizada na titulação de anticorpos
perda (neutralização) 
da infectividade ou 
toxicidade in vitro ou 
in vivo
INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO (HI)
➢Ac. específicos inibem a H.A. – medindo o nível de
acs.
➢Utilizado para doenças como Newcastle, Coriza e
Bronquite Infecciosa, Influenza..
Inibição da Hemaglutinação e Hemaglutinação
AGLUTINAÇÃO (T.A.)
➢ Detecção de ac. específicos (aglutininas) no sangue bruto ou soro,
pela formação de grumos ou floculação do complexo antígeno-
anticorpo.
➢ Formas de realizar os testes de aglutinação:
- Aglutinação rápida em placa
- Aglutinação lenta em tubos
IMUNODIFUSÃO EM ÁGAR GEL (A.G.P.)
➢ Visualiza o complexo antígeno-anticorpo como uma linha de
precipitação em meio de difusão semi-sólido (agarose ou ágar).
➢ Detecta ac. presentes no soro das aves e suínos e na gema dos
ovos.
➢ Influenza aviária e laringotraqueíte infecciosa das ave e 
Histoplasmose em suínos.
ENSAIO IMUNOENZIMÁTICO EM FASE SÓLIDA (ELISA)
➢Reação sorológica com ag. e ac.
marcados com enzimas.
➢Teste mais utilizado – Elisa Indireto.
➢Newcastle, Mycoplasma, Influenza e
laringotraqueíte infecciosa das aves
AMOSTRAGEM
Tamanho do Rebanho N
1- 25 
26 - 30
Todos
26
31 - 40 31
41 – 50 35
51 – 70 40
71 - 100 45
101 - 200 51
201 – 1200
+ 1200
57
59
SENSIBILIDADE E ESPECIFICIDADE
▪ Sensibilidade: identificação de doentes
Testes sensíveis tem menor taxa de F –
▪ Especificidade: identificação saudáveis 
Testes específicos tem menor taxa de F+
▪ Falso + reação cruzada, vacinação e Ac. Maternais.
▪ Falso - doenças imunossupressoras, alergia e 
tempo de infecção (janela imunológica)
INTERPRETAÇÃO
➢Não comparar resultados de dois métodos.
➢Pode ocorrer variações nas amostras
➢Amostragem – estabelecer de acordo com grau de confiança desejado,
níveis de incidência da doença.
➢Intervalo das colheitas das amostras
➢Títulos altos – vacinação/desafio
➢Estabelecer perfil de ac. “normal”.
▪ Uma granja de poedeiras de 30 semanas composta por 4 galpões (2 da mesma idade e
outros 2 de idades diferentes). Nos dois galpões de aves com idades diferentes observou-se
uma mortalidade de 0,5-0,7% por semana (0,2% o padrão semanal) e algumas semanas
chegaram a 1%. O proprietário relata que utilizou gentamicina injetável em alguns animais
sintomáticos, mas não observou melhora. Observou-se também fezes amareladas e uma
ligeira diminuição na porcentagem de postura. Na necropsia clínica foi observada lesões
fibrino-necrótica no ceco com material caseoso na luz e, em alguns animais, hepatite
necrosante.
▪ Quais materiais fariam coleta?
▪ Quais exames solicitariam?
▪ Qual orientação dariam para o
proprietário (a)?
VAMOS ALINHAR A LINGUAGEM
QUAL É A ORDEM CORRETA DE NÚMEROS E LETRAS?
1. Mortalidade
2. Vetor biológico
3. Vetor
4. Vias de eliminação
5. Transmissão vertical
6. Letalidade
7. Fonte de infecção
8. Vetor mecânico
9. Transmissão horizontal
10. Morbidade
1. É o animal vertebrado que alberga o
agente etiológico e o elimina para o meio
exterior.
2. São animais, geralmente artrópodes, que
transmitem o agente infeccioso ao hospedeiro
susceptível.
3. É o vetor no qual o agente etiológico se
multiplica ou se desenvolve.
4. É o vetor que serve apenas de transporte ao
agente etiológico. Não é um local de
desenvolvimento ou multiplicação.
5. Trajeto pelo qual o agente, a partir do
reservatório ou fonte de infecção, atinge o meio
ambiente. Os tratos respiratório e digestivo são
as principais vias de eliminação, cabendo citar
também a urina, sangue, pele, mucosas e
secreções.
6. Ocorre quando a infecção é transmitida de
qualquer segmento de uma população para
outro. Pode ser direta ou indireta.
7. Ocorre quando a infecção é transmitida de 
uma geração para a próxima por meio da 
infecção do embrião ou do feto enquanto no 
útero (in utero) ou no ovo (in ovo). 
8. É uma variável característica das 
comunidades de seres vivos, refere-se ao 
conjunto dos indivíduos que adquirem doenças 
(ou determinadas doenças) num dado intervalo 
de tempo em uma determinada população. A 
morbidade mostra o comportamento das 
doenças e dos agravos à saúde na população.
9. É um indicador que mede a proporção de 
óbitos que ocorre no total de casos de uma 
doença ou agravo à saúde.
10. Mortes per capita numa população em um 
intervalo de tempo em uma determinada 
população. 
OBRIGADA!!