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FACULDADE ANHANGUERA DE TAUBATÉ PRÁTICAS APLICADAS EM HEMATOLOGIA E MICROBIOLOGIA CLÍNICA AULA 7 BACTÉRIAS PROFESSORA DRA DANIELA WACHTLER @danielawachtler • Pertencem ao Reino Monera. • São unicelulares e procariotos, por conta do seu material genético não ser envolvido por nenhuma membrana especial. Medem aproximadamente entre 0,2 a 2um de diâmetro e de 2 a 8um de comprimento. • A parede celular é composta por peptideoglicano. Normalmente se reproduzem por fissão binária, ou seja, nesse tipo de reprodução assexuada, acontece a divisão do organismo ao meio, originando duas células iguais. Como elas possuem flagelos, grande parte das bactérias conseguem se movimentar. BACTÉRIAS podem • Devido a sua estrutura simples, as bactérias sobreviver em todos ambientes da terra; • Podem ser encontradas no ar, solo, água, vulcão, mar profundo, fontes quentes, gelo, sal, pele dos homens, etc; • Em condições desfavoráveis ao seu crescimento algumas bactérias formam esporos, que podem sobreviver milhões de anos. CARACTERÍSTICAS: ESTRUTURA: Cápsula • Camada de consistência viscosa formada por polissacarídeos que reveste a parede celular em algumas bactérias; • Relaciona-se com a capacidade de aderência (permite maior aderência às células do hospedeiro); • É encontrada principalmente nas bactérias patogênicas. ESTRUTURA: ESTRUTURA: Parede celular • Envoltório extracelular rígido responsável pela forma da bactéria, com a função de proteger a célula contra agressões físicas do ambiente. Não possui celulose como as das células vegetais. Envolve a membrana plasmática, apresenta peptideoglicano. Membrana plasmática • Camada que delimita o espaço da célula, mantém condições adequadas para que ocorram as reações metabólicas, seleciona o que entra e sai da célula, ajuda a manter o formato celular. • Diferencia-se da dos seres eucariontes por não conter esteróis, que permite a mobilidade de sendo uma estrutura fluida, proteínas (permeases, enzimas respiratórias, enzimas hidrolíticas, etc.). Citoplasma • Local onde ocorre reações químicas vitais para a célula, entre elas a fabricação de moléculas que irão constituir as estruturas celulares. Também é responsável pelo armazenamento de substâncias de reserva. Ribossomos • Local de síntese de proteínas e enzimas. Alvo importante para drogas antibacterianas. ESTRUTURA: ESTRUTURA: Plasmídio • Moléculas circulares de DNA capazes de se reproduzir independentemente do DNA cromossómico. DNA menores. Mais encontrados em Gram negativas. Não são essenciais, mas quando presentes, conferem vantagem seletiva. (Ex: resistência aos antibióticos). Nucleoide • Região que concentra o material genético. Cromossomo • 1 único cromossomo, circular. ESTRUTURA: Flagelos • Apêndices filiformes usados na locomoção. Mais comum em bacilos que em cocos. Quimiotaxia. Pili ou fímbrias • Apêndices filamentares, de natureza protéica, mais finos e curtos que os flagelos. Nas bactérias que sofrem conjugação, as fímbrias funcionam como pontes citoplasmáticas permitindo a passagem do material genético. Quanto a morfologia (forma): As bactérias podem se apresentar de diversas formas, mas são agrupadas em quatro tipos morfológicos gerais: • cocos • bacilos • espiralados • vibrião As formas não são constantes, podem variar de acordo com o meio e com o tipo de associação. CLASSIFICAÇÃO: Quanto a morfologia (forma): Cocos (arredondadas) Podem se dividir sem um plano de orientação definido, o que leva a um grande número de arranjos diferentes. 1.Cocos isolados 2.Diplococos 3.Tetracocos 4.Sarcinas (cubos contendo 8 células) 5.Estreptococos (cocos em cadeia) 6.Estafilococos (cocos formando massas irregulares) CLASSIFICAÇÃO: CLASSIFICAÇÃO: Quanto a morfologia (forma): Bacilos (bastão) Como seu plano de divisão é fixo, ocorrendo sempre no menor eixo, os bacilos exibem uma menor variedade de arranjos, sendo encontrados: 1.Isolados 2.Diplobacilos 3.Estreptobacil os 4.Paliçada CLASSIFICAÇÃO: CLASSIFICAÇÃO: Quanto a morfologia (forma): divide os espiralados em dois Espiraladas (espiral) Um tipo de classificação grupos: 1.Espiroquetas: apresentam uma forma de espiral flexível, possuindo flagelos periplasmáticos. 2.Espirilos: exibem geralmente morfologia de espiral incompleta e rígidos, possuem flagelos externos. CLASSIFICAÇÃO: NUTRIÇÃO A nutrição dos procariontes ocorre principalmente por absorção, já que não é possível a realização da fagocitose devido a parede celular espessa. São classificados conforme as fontes de energia e carbono usadas para o seu crescimento. Quanto a fonte de energia, temos: Fototróficos: Utilizam a luz. Quimiotróficos: Utilizam compostos químicos. Quanto a fontes de carbono: Autotróficos: Usam fontes inorgânicas. Heterotróficos: Usam fontes orgânicas. NUTRIÇÃO Além das fontes de energia e carbono, as bactérias precisam de nutrientes, alguns em pequenas quantidades (micronutrientes) e outros em maiores quantidades (macronutrientes). CRESCIMENTO BACTERIANO Os fatores que favorecem o crescimento microbiano podem ser divididos em: físicos (temperatura, pH, pressão osmótica) e químicos (carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo, oxigênio). IDENTIFICAÇÃO GRAM POSITIVA E GRAM NEGATIVA Gram-positivas: são bactérias que possuem uma espessa camada de peptideoglicano e ácido teicóico e que, portanto, coram-se de azul. Gram-negativas: são bactérias que possuem uma fina camada de peptideoglicano, sobre a qual se encontra uma camada composta por lipoproteínas, fosfolipídeos, proteínas e lipopolissacarídeos. Estas bactérias coram-se de vermelho. A coloração de Gram é um passo muito importante na caracterização e classificação inicial das bactérias. Afinal, esse método de coloração permite que as bactérias sejam visualizadas no microscópio óptico, uma vez que sem a coloração é impossível observá-las ou identificar sua estrutura. DIFERENÇA ENTRE BACTÉRIA GRAM-POSITIVA E GRAM-NEGATIVA A princípio, há diferentes graus de permeabilidade na parede dos microrganismos Gram-positivos e Gram- negativos. As bactérias Gram-positivas retém o cristal violeta devido à presença de uma espessa camada de peptidoglicano (polímero constituído por açúcares e aminoácidos que originam uma espécie de malha na região exterior à membrana celular das bactérias) em suas paredes celulares, apresentando-se na cor roxa. Já as bactérias Gram-negativas possuem uma parede de peptidoglicano mais fina que não retém o cristal violeta durante o processo de descoloração e recebem a cor vermelha no processo de coloração final. Exemplos de bactérias Gram-positivas: Bacillus, Nocardia, Clostridium, Propionibacterium, Actinomyces, Enterococcus, Cornyebacterium, Listria, Lactobacillus, Gardnerella, Mycoplasma, Staphylococcus, Streptomyces, Streptococcus. Exemplos de bactérias Gram-negativas: Escherichia, Helicobcater, Hemophilus, Neisseria, Klebsiella, Enterobacter, Chlamydia, Pseudomonas, Salmonella, Shigella. PRINCÍPIO DA COLORAÇÃO DE GRAM Em suma, o procedimento de coloração de Gram permite que as bactérias retenham a cor com base nas diferenças nas propriedades químicas e físicas da parede celular. De fato, o uso dos corantes permite aumentar o contraste e evidenciar a estrutura bacteriana. A coloração envolve 3 etapas principais: Coloração com violeta de cristal (um corante solúvel em água, roxo); A descoloração (utilizando etanol / acetona); A contra-coloração (utilizando corante Safranina, vermelho). PASSO A PASSO DA METODOLOGIA DE GRAM Cubra o esfregaço com violeta-de-metila e logo após deixe por aproximadamente15 segundos; Adicione igual quantidade de água sobre a lâmina coberta com violeta- de-metila e então deixe agir por mais 45 segundos; Escorra o corante e lave em um filete de água corrente; Cubra a lâmina com lugol diluído (1/20) e deixe agir por aproximadamente 1 minuto; Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente; Adicione álcool etílico (99,5º GL) sobre a lâmina; descorando-a, até que não desprenda mais corante; Lave em um filete de água corrente; PASSO A PASSO DA METODOLOGIA DE GRAM Cubra a lâmina com safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos; Lave em um filete de água corrente; Deixe secar ao ar livre, ou seque suavemente com o auxílio de um papel de filtro limpo; Visualize no microscópio. Logo após leia em objetiva de imersão (100 X). APLICAÇÃO E BENEFÍCIOS DA COLORAÇÃO DE GRAM De fato a metodologia irá ajudar na identificação de uma infecção bacteriana, determinando qual é o tipo de bactéria. Em outras palavras, a diferenciação das bactérias Gram-negativas e Gram-positivas permite ao médico determinar um tratamento eficaz ao paciente, dessa forma aplicando a terapia adequada em cada caso. https://eaulas.usp.br/portal/video?idItem=25254 https://eaulas.usp.br/portal/video.action?idItem=25791 https://eaulas.usp.br/portal/video.action?idItem=25791 https://eaulas.usp.br/portal/video.action?idItem=25791 https://eaulas.usp.br/portal/video.action?idItem=25791 https://eaulas.usp.br/portal/video.action?idItem=25791 1. As bactérias possuem uma espessa parede celular que mantém a integridade da célula e determina sua forma característica. Em relação às diferenças entre as bactérias gram-positivas e as gram-negativas é correto afirmar: a) A parede celular de ambas bactérias gram-positivas e gram-negativas possui uma camada interna constituída por lipopolissacarídeos. b) A parede celular das bactérias gram-positivas não possui peptidoglicano na sua constituição, somente as bactérias gram- negativas a possuem. c) A parede celular das bactérias gram-positivas possui uma camada interna constituída por lipopolissacarídeos. d) A parede celular das bactérias gram-positivas possui uma quantidade muito maior de peptidoglicano do que as gram-negativas. QUESTÕES 2. Sobre a técnica de coloração de Gram e as características da parede celular bacteriana, considere as seguintes afirmativas: 1. A parede celular das bactérias consideradas Gram positivas é mais delgada, permitindo a entrada do corante na célula bacteriana. 2. As bactérias Gram positivas apresentam coloração azul ao final da técnica. 3. A parede celular das bactérias consideradas Gram negativas é composta por lipopolissacarid́eos, fosfolipid́ios, lipoproteínas e uma fina camada de peptidoglicano. 4. As bactérias consideradas Gram negativas apresentam coloração rósea (se usada fucsina) ao final da técnica. Assinale a alternativa correta. a) Somente afirmativa 2 é verdadeira. b) Somente as afirmativas 3 e 4 são verdadeiras. c) Somente as afirmativas 1, 2 e 3 são verdadeiras. d) Somente as afirmativas 1, 3 e 4 são verdadeiras. QUESTÕES 3. As bactérias são organismos bastante simples e geralmente são classificadas de acordo com sua forma e arranjo. Uma bactéria de formato cilíndrico, por exemplo, deve ser classificada como: a) Coco. b) Espirilo. c) Bacilo. d) Vibrião. e) Espiroqueta. 4. As bactérias são tradicionalmente classificadas de acordo com seu formato e arranjo, porém podem ser diferenciadas também de acordo com a estrutura de sua parede celular. Uma bactéria que apresenta parede celular complexa, com uma camada de peptidoglicano e uma porção externa de lipopolissacarídeo é chamada de: a) estreptobacilo. b) micoplasma. c) gram-positiva. d) gram-negativa. e) sarcina. QUESTÕES 5. O Vibrio cholerae, também chamado de vibrião colérico, é a bactéria causadora da cólera. O termo vibrião indica uma classificação dessa bactéria com base no seu formato. Analise as alternativas e marque aquela que indica o formato de um vibrião. a) Formato esférico. b) Formato oval. c) Formato de vírgula. d) Formato cilíndrico. e) Formato espiral. 6. Na imagem a seguir, observamos bactérias do tipo cocos unidas. Elas formam uma estrutura que lembra um cubo. Essas bactérias recebem a denominação de: a) Diplococos. b) Tétrades. c) Sarcina. d) Estreptococos. e) Estafilococos. QUESTÕES QUESTÕES 7. Cite as estruturas fundamentais da célula bacteriana. 8. Quais são as principais funções da parede celular bacteriana? 9. Qual a estrutura da parede celular de bactérias Gram positivas? 10. Qual a estrutura da parece celular de bactérias Gram negativas? TRABALHO PARA O DIA 24/10/2022 Elaborar o Manual de Boas Práticas Laborais do LEAC. Seguir o exemplo anexado e adaptar para o Leac. Em grupo. Cada grupo faz uma parte, no final une todo o trabalho e apresentem no dia 24/10/2022. Entregar o arquivo em PDF com o nome dos alunos e uma cópia impressa e encadernada.
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