Métodos utilizados em imunologia clínica

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Métodos utilizados em imunologia clínica 
quarta-feira, 29 de setembro de 2021 16:32 
PRECIPITAÇÃO 
• Método físico de precipitação; 
• Quantificação de precipitados de antígeno-anticorpo complexados; 
○ Perfil do comportamento da curva 
 
 
 
○ Antígeno-anticorpo: ligação fraca e interação forte (múltiplas interações
acontecendo) 
• Reversíveis! 
• O precipitado formado pode voltar a se dissolver 
○ Região de equivalência: 
○ Fenômemo prozona ou hook -> excesso de anticorpos que causam erros no
resultado 
• Falso negativo 
 
AGLUTINAÇÃO: 
• É possível visualizar a aglutinação a olho nu com um contraste 
• Direta 
○ Partículas que apresentam determinantes antigênicos expressos em sua
superfície -> bactérias, protozoários, hemácias 
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• Indireta ou passiva 
○ Partículas inertes -> látex, estireno com o anticorpo ou o antígeno na
superfície dela (recoberta) 
• Ao se ligarem, formam um agregamento e a aglutinação 
• Sensibilizar: 
○ Preencher a superfície da esfera de látex com o antígeno e permitir com que o
anticorpo se ligue 
 
HEMAGLUTINAÇÃO 
• Placas de 96 poços com o fundo cônico 
• Ao invés de utilizar uma esfera inerte, utiliza-se uma hemácia recoberta com o
antígeno -> sensibilizada 
• Diluir o soro do paciente -> 1/2 até 1/24 
• Títulos: última diluição testada que apresentou resultado positivo 
○ Paciente 1: 1/64 
• Mais anticorpos que o paciente 2, pois apresentou resultado mesmo
estando mais diluído. 
• Paciente 6: ocorreu a prozona -> tinha tanto anticorpo que voltou para a solução 
 
ENSAIOS LÍTICOS 
Fixação de complemento: 
Aula de toxoplasmose 
 
IMUNOFLUORESCÊNCIA: 
Filtros são os componentes necessaários para capturar a emissão de fluorescencia 
 
Direta: 
Patógeno diretamente envolvido na placa = anticorpo fluorescente 
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Indireta: 
Patógeno -> lamina de microscópio 
Anticorpo do paciente 
Anticorpo marcado com o fluorófilo 
 
TESTES COM MARCADORES RADIOATIVOS: 
Pode ser com o anticorpo no poço e usar Ag marcado radioativamente: 
Quanto mais antígeno presente no paciente, menor vai ser a marcação
radioativa, pois há menos espaço para os Ag marcados se ligarem 
Ac marcado -> sanduiche 
Precursor do ELISA! 
 
ELISA: 
 
 
Formação de cor -> absorbância 
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• Tipos de ELISA: 
○ Indireto: 
• Antígeno adsorvido no fundo da placa 
• Anticorpo secundário conjugado com uma enzima + ser Anti-IgG 
○ Direto: 
○ Captura de IgM: 
• Anticorpo Anti-IgM no fundo do poço 
○ Sanduíche: 
• Placa com o anticorpo + Antígeno do paciente + antígeno marcado 
○ Competição: 
• No fundo do poço: antígeno 
• Anticorpo do paciente + anticorpo marcado 
• Se eu tiver muito anticorpo no paciente, a absorbância vai ser baixa. 
• Menos cor e menos reação de enzima e substrato 
WESTERN BLOT 
• Em uma membrana de PVDL um antígeno 
• + Anticorpo do paciente + anticorpo secundário 
•
TESTE IMUNOCROMATOGRÁFICO: 
 
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• Utilizado como teste de gravidez também 
 
TURBIDIMETRIA 
• Espectrofotômetro 
• Proteína C reativa 
○ Fase aguda 
○ Quadro inflamatório agudo 
• Nefelometria: difração de luz 
• Medida do espalhamento da incidência de luz 
○ Se há formação de AG-AC -> deslocamento da luz 
• Ensaio quantitativo 
 
CITOMETRIA DE FLUXO 
• Monitoramento de pacientes com HIV 
• Quantifica alguns parâmetros celulares 
• FSC -> tamanho 
• SSC -> complexidade ou granulosidade 
 
• Avalio fluorescência no microscópio de fluorescência