Fundamentos da Biologia Celular - Alberts et al - 2017 - 4 Edicao-174

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Capítulo 4 • Estrutura e função das proteínas 147
USANDO ANTICORPOS PARA PURIFICAR MOLÉCULAS
ANTICORPOS MONOCLONAIS ANTICORPOS COMO MARCADORES MOLECULARES
M
A A
A
A
A AAA
E P F
N
O
RD
S
C
JL B
K
Q G
H
MA
AA
E P
F
N
OR
D
S
C
J
L
B
KQ
G H
IMUNOPRECIPITAÇÃO CROMATOGRAFIA COM
COLUNA DE IMUNOAFINIDADE
Mistura de moléculas
Adição de anticorpos
anti-A específicos
Coleta de agregados de moléculas A
e anticorpos anti-A por centrifugação
Mistura de moléculas
Descarte do filtrado Coleta de antígeno A puro
Eluição do antígeno A
a partir da matriz
Matriz revestida
com anticorpos anti-A
Coluna empacotada
com esta matriz
Grandes quantidades de um único tipo de
anticorpo podem ser obtidas pela fusão de uma
célula B (retirada de um animal injetado com o
antígeno A) com uma célula de tumor. A célula
híbrida resultante se divide indefinidamente e
secreta anticorpos anti-A de um único tipo
(monoclonais).
Células de tumor em
cultura se dividem
indefinidamente,
mas não produzem
anticorpos.
A célula B de um animal
injetado com antígeno A
produz anticorpos anti-A,
mas não se divide
indefinidamente.
FUSÃO DA CÉLULA B SECRETORA DE
ANTICORPOS COM A CÉLULA DE TUMOR
A célula 
híbrida produz 
anticorpos e se 
divide indefi-
nidamente.
Ligação a um marcador 
fluorescente, partícula de ouro 
ou outro marcador especial
Anticorpos específicos
contra antígeno A Anticorpos marcados
O antígeno A é 
separado de outras 
moléculas por 
eletroforese.
A incubação com anticorpos 
marcados que se ligam ao 
antígeno A permite que a 
posição do antígeno seja 
determinada.
Nota: Em todos os casos, a sensibilidade da 
técnica pode ser aumentada com o uso de 
várias camadas de anticorpos. Esse método de 
“sanduíche” permite que um pequeno número 
de moléculas de antígeno seja detectado.
Antígeno
O segundo anticorpo
marcado (azul) se liga ao 
primeiro anticorpo (preto).
C K
NR
A
A
A
A
D
ET
EC
Ç
Ã
O
 M
IC
R
O
SC
Ó
PI
C
A
D
ET
EC
Ç
Ã
O
 B
IO
Q
U
ÍM
IC
A
etc
Pa
re
d
e
ce
lu
la
r
Anticorpos fluorescentes se ligam 
ao antígeno A no tecido e são 
detectados por microscopia de 
fluorescência. Aqui, o antígeno é 
a pectina, presente na parede 
celular de um corte histológico de 
um tecido vegetal.
Anticorpos marcados com 
partículas de ouro se ligam ao 
antígeno A no tecido e são 
detectados por microscopia 
eletrônica. O antígeno é a pectina, 
presente na parede celular de uma 
única célula vegetal.
50 μm 200 nm
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