Imunologia

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RELATÓRIO 
AULA PRÁTICA 
 
IMUNOHEMATOLOGIA 
 
Tipagem sanguínea Direta / Reversa 
e Coombs Direto (TAD) 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TIPAGEM SANGUINEA 
 
A tipagem sanguínea representa a detecção dos tipos sanguíneos por meio da evidenciação da 
presença das aglutininas nas membranas eritrocitárias. 
A realização da tipagem sanguínea é útil para se evitar problemas de incompatibilidade em 
transfusões sanguíneas e também para prevenir reações adversas em transplante de órgãos e 
complicações gestacionais, como no caso da doença hemolítica do recém-nascido (DHRN). Neste 
último, os anticorpos maternos Anti-Rh, adquiridos após a gestação de uma criança com fator Rh +, 
passam pela placenta para a circulação fetal, causando hemólise fetal, resultando em complicações 
como anemia e icterícia (HASSAN, 2017). 
 
O sistema imunológico em cada indivíduo tem a habilidade natural de formar aglutininas contra os 
Aglutinogênios do sistema ABO que não fazem parte da sua constituição. Esta produção é 
estimulada quando é inserido no organismo moléculas que compõem as aglutininas do sistema ABO 
que em alimentos ou mesmo em microrganismos. Desta forma, indivíduos com sangue do tipo A 
produzirão algutininas anti-B, enquanto indivíduos do tipo B formarão aglutininas anti-A. Os 
indivíduos do tipo sanguíneo O, por não possuírem ambos aglutinogênios A e B, produzirão 
aglutininas anti-A e anti-B. Já os indivíduos com o tipo sanguíneo AB, menos comum, não 
produzem tais aglutininas (DEAN, 2005). 
 
Diferentemente do que ocorre no sistema ABO, os anticorpos do sistema Rh não existem 
naturalmente no soro. Estes são gerados somente a partir de imunização com antígenos do sistema 
Rh, que podem ocorrer em casos de transfusões incompatíveis, e em mulheres que já tiveram uma 
gestação cujos fetos apresentam Rh+ (RECHE & DE PAULA, 2014). 
 
A tipagem Rh é realizada com soro anti-D e determina a presença ou ausência do antígeno D nas 
hemácias testadas (BANCO DE SANGUE-DOM BOSCO). 
 
OBJETIVOS 
 
Compreensão na prática dos fenômenos básicos com respeito à ação da genética na seleção dos tipos 
e dos fatores sanguíneos e o mecanismo de compatibilidade sanguínea. 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 4 - Escolha da veia para a punção e então retirar o 
garrote tão logo para que o sangue flua pelo tubo. 
Figura 3 - Localizar a veia e fazer assepsia da pele, 
utilizando álcool 70% e algodão. 
MATERIAIS E MÉTODOS 
 
 COLETA DE SANGUE 
1. Tubo de coleta tampa roxo (EDTA) 5. Descarpack 
2. Tubo de coleta tampa vermelha 6. Garrote para punção 
3. Adaptador para agulha 7. Algodão 
4. Agulha 8. Curativo 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 1 - Ajustando o garrote no braço do aluno 
valuntário 
Figura 2 - Movimento de abre e fecha das mãos para facilitar 
a localização da veia. 
 
Figura 6 - Coletado as amostras, fez-se movimentos suaves de 
inversão dos tubos coletados. 
 
 
 
 
TIPAGEM ABO DIRETA - AMOSTRA SANGUE TOTAL 
 
Determina a presença/ausência dos antígenos do sistema ABO nas hemácias do receptor, utilizando 
reagentes (soro anti-A, soro anti-B, soro, anti-AB). 
 
MATERIAIS E MÉTODOS 
 
1. Estante de tubo 6. Pipeta Pasteur (se necessário) 
2. Tubo de hemolise 7. Ponteiras descartáveis 
3. Centrifuga covencional para tubo hemolise 8. Dispenser para ponteiras 
4. Pipeta de 50 μl 9. Solução Salina a 0,9% 
5. Pipeta de 100 μl 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Figura 5 – Pressionou-se o local com algodão emanteu-se o 
mesmo sem dobrar o braço. 
 
 SUSPENSÃO DE HEMÁCIAS A 5% 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 Pegou-se um tubo e colocou-se 1mL de solução salina a 0,9% + 50μL de sangue total) 
 Obs: Os tubos com a solução salina e o sangue total foram lava 2 vezes. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Homogeneizou-se e colocou-se para centrifugar durante 1 minuto. 
 Passado o tempo,observou-se no tubo o botão de hemacia sedmentada, e o soro 
 fisiológico suspendido. 
 Despressou-se a salina (soro fisiológico), na pia do laboratório. 
 
As duas ou três lavagens são importantes para reduzir a taxa residual, removendo proteínas 
plasmáticas, e também para verificar a integridade das hemácias, observadas pela presença ou 
ausência de hemólise. 
 
 
 
 
 
 Reagentes : anti-A(azul);anti-B(amarelo);anti-AB e anti-
D(branco) 
Pegou-se 4 tubos e identificou-se como: A, B, AB e Dfraco. 
Foi colocado em cada tubo: 
▪ 1 gota do reagente anti-A no tubo com descrição A 
▪ 1 gota do reagente anti-B no tubo com descrição B 
▪ 1 gota do reagente anti-AB no tubo com descrição AB, e 
▪ 2 gotas do reagente anti-D no tubo com descrição D 
 
 
 
 
 Identificação dos tubos 
 
PRINCÍPIO DO TESTE ABO: Os reagentes causam aglutinação direta macroscópica das 
hemácias que carregam os antígenos correspondentes. As hemácias possuidoras do antígeno A se 
aglutinam quando misturadas ao reagente anti-A; igualmente , hemácias possuidoras do antígeno B 
aglutinam na presença do reagente anti B. O teste adicional empregando-se o reagente anti-A e anti 
B facilita o reconhecimento de sub-grupos raros de baixa reatividade aglutinando as hemácias dos 
grupos A,B e AB. 
 
Colocado as gostas em seu respectivos tubos, homogeneizou-os e colocou-se na centífuga por 
exatamente 30 segundos. 
Logo, fez-se a leitura dos tubos. 
 
 
 
RESULTADO 
 
Foi analizado e verificou-se que o valuntário (Douglas), possui sangue tipo B Rh+ 
Isso é: 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
TIPAGEM REVERSA - AMOSTRA: SORO 
 
Tipagem reversa: determina a presença/ausência de anticorpos plasmáticos (anti-A e anti-B), 
utilizando reagentes de hemácias A e B. Os resultados obtidos nas tipagens direta e reversa são 
interpretados e a amostra sanguínea é classificada para o grupo ABO. 
 
Identificar 2 tubos como: REV-A e REV-B 
Colocou-se em cada um dos tubos 100μl do soro teste. 
Tubo REV-A – 1 gota de hemácias A 
Tubo REV-B – 1 gota de hemácias B 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Homogeneizou e centrifigou-os por 30 segundos a fim de observar a presença ou não deglutinação. 
 
RESULTADO 
 
 
 
 
 
 
 
 
Observou-se que não ouve aglutinação, isso é , não há 
anticorpo na membrana da hemácia. 
 
 
 
 
 
COOMBS DIRETO (TAD) - AMOSTRA SANGUE TOTAL 
 
Esse teste avalia a presença de IgG e/ou da fração do complemento que esteja revestindo a 
superfície dos eritrócitos in vivo, verificando se há anticorpos ligados à hemácia e se esses 
anticorpos são derivados do próprio sistema imune ou recebidos por transfusão. Esse teste 
normalmente é realizado para detectar anemias hemolíticas autoimunes (Fleury- Medicina e 
saúde). 
O soro Coombs, destina-se a detectar anticorpos que tenham sido adsorvidos ou se fixado 
imunologicamente à superfície das hemácias, quer “in vivo” (teste de coombs direto) quer “in 
vitro” (teste de coombs indireto). 
 
RESULTADO 
 
Observar a presença ou não de aglutinação: 
Presença de aglutinação: positivo (+) Ausência de aglutinação: negativo(-) 
 
IMPORTANTE: Se após esta etapa o resultado ainda for negativo para fator Rh, é necessário 
pesquisar o fenótipo D fraco (Du) por meio da técnica de Coombs indireto. 
 Colocar 2 gotas 
do Soro Coombs Tubos identificados como: cd 1e 
2 e o numero da bancada 
50μlda suspenção de hemácias a 
5% 
Centrifigar por 30 segundos