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Bactérias de interesse em medicina veterinária - Cocos (cocóides), espiroquetas (leptóspira e bacilos (ou bastonetes) * Não tem membrana celular, algumas com cápsula outras não, com flagelo ou não Citologia: Morfologia: vejo no microscópio Morfologia citologia: cocos, bacilos 04:00 escutar a diferença - Constituintes de parede: * Temos GRAM negativa e positiva e microbactérias * O LPS pode sair quando a célula morre e pode ser como endotoxinas * Ácidos proteicos TAXONOMIA: ● Forma: bastonete, cocos e espiroqueta ● Se é GRAM negativa e positiva ● E utilização do oxigênio * Não vamos falar de cocos negativos * Tem mais cocos+ e Bacilos -, são os mais frequentes * Isolamento, escolha da coleta e faz a identificação * Vamos ver: staphylococos e estreptococos/enterococos STAPHYLOCOCOS SP - Célula bacteriana que tem os eixo de crescimento em cacho tanto pra cima quanto para os lado, colônias grandes e são côncavas (cresce a cima do alo) Família: micrococaceae Gênero: - Staphylococos - Jeotgalicocus - Macrococus - Micrococcus CARACTERÍSTICAS DESSE GÊNERO: - Maioria é anaeróbia facultativa - Tem cachos e cresce fácil - Tem hemólise→ virulência (agar sangue), espécie mais patogênica - São catalase positivas: enzima que quela (acho que é isso mesmo) oxigênio - Não forma esporos - Estáveis no meio ambiante - Patógenos oportunistas (aproveita o desiquilíbrio para se desenvolver) se virulência e se tiver desequilíbrio tem doença - Mecanismo de patogenicidade: transforma fibrinogênio em fibrina → coagulase 26:00 catalase (não entendi) * Se não apresenta coagulase- staphylococcus coagulase negativa (ECN) carregando menos virulência * Strepto não tem catalase * Mecanismo importante de patogenicidade é a produção de coagulase *só a coagulase não é capaz de expressar fator de virulência mas ela é um indicativo, pq em geral as bactérias que produzem coagulase também expressão outros fatores de virulência; *alguns são coagulase positivo- transforma fibrinogênio em fibrina- ajuda bactéria esconder do sistema inume *alguns são coagulase negativa (ECN)- carregar menos fator de virulência, são menos graves mas ainda podem causar doenças; *S. aureus, pseudointermedius e hyicus: são coagulase positiva; *mas o único que sempre é catalase + é o aureus; *os outros 2(pseudointermedius e hyicus) podem ter variações; STAPHYLOCOCCUS: - Medicina veterinária: S. aureus: coagulase+ Coagulase variável (ECP/ECN) - S. pseudointermedius - S. hyicus - S. schleiferi subesp. Coagulan - S. epidermidis 3 prova de microbiologia ° E tem as negativas: não muito importantes, os de cima são positivas Coagulase positivo: (vem fatores de virulência) Staphylococcus coagulase positiva: São isolados em situações de: - Piodermites- lambeduras fica úmido e a bactéria entra pela ferida - Infecções generalizada: intoxicação alimentares - Mastite bovina (clínica- s. aureus que forma coagulase positiva com sinais clínicos, na subclínica são as coagulase negativa) - Otites - Infecções oculares - Onfalites (umbigo) * Produção de pus- bacteriana piogênicas→ neutrófilos liberam grânulos e forma nódulos e liberam pus * Animais mais jovem dá impetigo (forma na fase que muda a alimentação do animal) → são pústulas * Leva ao choque séptico * Piodermatite- começa por lambedura e de pode formam feridas Morfologia: Cacho, crescimento para todos os lados, parede bacteriana expressa com várias camada de peptideoglicanos e ácidos teicoicos CARACTERÍSTICA NUTRICIONAIS: - Anaeróbio facultativos (sem a presença de oxigênio, faz fermentação), imóveis - Temperatura (37C), pH, tempo crescimento (não são exigentes) - Meios de cultura ° Caldo simples, agar simples, agar sangue, Baird Park, Chapman Stone - Sensibilidade variável á antimicrobianos ° B (beta)-lactamases= resistência a oxacilina, meticilina ° Penicilinas, cefalosporinas, macroslídeos, quinolonas (provas para diagnósticos, são antibióticos) * Resistência a classes de antibióticos?? 47:00 Fatores de patogenicidade Coagulase +já indica que já tem alguns fatores de virulência associados Virulência: - Tem uma aumento da infectividade - Evasão do sistema imune (tem mecanismo de fuga, tem espécie que apresenta cápsula e aumenta a aderência e dificulta a fagocitose → mais em coagulase positivas) - S. aureus e outros coagulase+ Fatores de patogenicidade - Enzimas - Ligados á parede celular - Toxinas Fatores de patogenicidade: - Parede celular ° Cápsula: dificulta a fagocitose e aumenta a aderência ° Proteína A- ligação porção Fc do anticorpo, associado a IgG Essa proteína inativa o anticorpo e não tem o efeito quero anticorpo ia fazer sobre a bactéria ° Proteína A- faz no processo de coagulação - Enzimas – Enzimas extra-celulares ° Catalase – cliva o oxigênio?? ° Coagulase Enzima extra-celulres - Fibrinogênio → fibrina ° Fibrinolisina * Fator de disseminação - Toxinas: Agem na superfície da membrana→ Alfa-hemolisina→ hemólise total: ° Formam poros nas hemácias e leva a lise pelo desequilíbrio ° Superantígeno- Enterotoxinas estafilocócicas Beta-hemolisina- hemólise parcial: ° Forma buracos, a hemácia continua normal porém com esse buracos e sofre a lise ° Toxina da síndrome do choque tóxico (TSS1) 8-hemolisina: (ver o nome da letra) - Menor potência Alfa-hemolisina: toxinas exfoliativa, a superfície da hemácia fica com canis levando a lise celular Leucocidina: atua nos glóbulos brancos ° Efeito tóxicos - Degranulação citoplasma - Edema - Lise * Tem bactérias que causam total e parcial- no mesmo local Fatores de patogenicidade superantígenos - Enterotoxinas estafilocócicas (SEs) ° Por alimentos: diarreia e vômito - Toxina de síndrome do choque tóxico (TSST- 1) ° febre, hipotensão, vômito, diarréia, renal, cefaléia - Toxinas esfoliativas (ETs) ° Síndrome da pele escaldada estafilocócica ° Matriz polissacarídica da epiderme Fatores de virulência para escapar do sistema imune: - Ativação do complemento - E fagocitação Diagnóstico laboratorial - Exame direto: ° Metodologia ° Dificuldade (dificuldade de identificação) * Esfregaço direto na lâmina, corar e observar no microscópio - Cultivo e identificação microbiológica ° Meio líquido (alimento) → não vê colonia só o crescimento ° Meio sólido (quero ver colonia- morfologia) Agar sangue→ tem hemólise ou não, e cor Agar simples- cresce Ágar sangue- cor mais amarelada Ágar Baird-Paker- cor preta Ágar manitol- trabalha só com açúcar tem o meio de indicação de pH aonde era amarela fica rosa?? PROVA: a partir de um swab de otite, descreva como procedeu o diagnóstico microbiológico dessa amostra: - Identificação da amostra - Meio de cultura- geralmente no ágar-sangue - Cresceu características de colônia, faz o gram e observa formato de cachos - Prova da catalase: lâmina, colônia e pinga peroxido de hidrogênio- staphlos vai produzir bolhas- catalase cliva peroxido em água e oxigênio → se formar bolha em positivo e negativo forma nada. Strepto não forma bolha *prova da coagulase-separa em 2 grupos (positivo e negativo) °aureus sempre é positivo, pseudointermedius, hyicus são positivo na coagulase de forma variável (+ e -) tem variações no resultado do teste; °Teste: colônia e coloca soro de coelho em cima rico em fibrinogênio- se ele tem o fibrinogênio ele vai fazer a coagulação da proteína; ° Tubo: coloca em quantidade maior e deixa em estufa por 24 horas: mais confiável Catalase- staphyl. + Coagulase- ECP → S. auser+, S. pseu. -/+ variável, S. H. +/_ Identificação laboratorial ° Api Staph: vários positivos e negativos no final soma e dá o diagnóstico pelo ressoltado *hemólise, colônia amarelada e faz prova da coagulase e é positiva- s. aureus; *outras cores de colônia têm alfa e beta hemólise- prova da coagulase variável- pode ser: pseudointermedius, hyicus, schleiferi →Api Staph *são kits bioquímicos; *traz combinação de provas bioquímicas que ajuda na identificação das espécies; *isolou no meiode cultura→ passa para meio líquido→ faz padronização e vê turgidez→ joga nos casetes→ e cada um deles tem um resultado esperado→ vai contando qual deu positivo ou não- vai somando e no final vê a pontuação e assim sabe qual espécie pela tabela; *não é utilizado na prática, geralmente para pesquisas; Aula 30/11 STREPTOCOCCUS SPP Catalase negativa - e + > cresceu a colônia (pequenas, concavas,) colocação de gram morfologia da célula bactéria cocos gram positivos Strepto é mais oxigênio precisa de soro e sangue para crescer - Em ágar sangue são colônia pequenas e fungiformes *Exemplo: veio uma amostra → swab de ouvido → semeiou e cresceu uma bactéria → características da cultura, morfologia de colônia → coloração de gram (morofologia da bactéria) → se for strepto vou observar cocos gram positivo Introdução Família: streptococaceae Gênero: Streptococcus e enerococcus Importância clínica: Enterococcus (faz parte da microbiota bactéria oportunista, vem por meio de desequilíbrio da microbiota e se proliferam) e Streptococcus piogenus faz formação de pus * Cresce na mucosa: tártaro→ nos dentes * Piogênica- bactéria que produz pus - Bactérias fastoidosas, requerem meios de cultivo enriquecidos com soro ou sangue - Colônia pequenas, hemolíticos e translúcidas em ágar-sangue - Anaeróbias facultativas - Catalase – negativa, e gram positiva Estafilofílicas- precisa de CO2 e oxigênio - Mais sensível no ambiente - Maioria das espécie patogênicas são hemolíticas * Ter ou não tem coagulase → tem mais virulência. Aqui não produz coagulase Gênero streptococcus Características hemolíticas (hemólise total e parcial), características fisiológicas (se são piogênicas) e características antigênicas (açúcares na parede) Aqui é diferente da aula família: ° Alfa toxicina leva a hemólise parcial, e beta é total a hemólise (carreta mais de um fator de virulência) INTRODUÇÃO: - Rebeca Craighill Lancefield * Alteração nos antígenos de superfície - Característica antigênica: carboidrato C - Grupos sorológicos→ grupos de lancefield Espécie mais importantes na veterinária: B, C, D, G Grupo: D enterococcus e não enterococcus (compartilham características antigênicas) Uberis- não está na classificação Algumas classificações hemolíticas ou não (ter mais fator de virulência) -beta-hemólise (betatoxina): hemólise total, alfa- hemólise (Afatoxina): hemólise parcial, gama- hemólise: sem hemólise (contrario do Stafilo) *piogenes: sempre vai ser beta-hemolitico *beta hemolíticos = grupo que causam patologias mais graves (presente nos grupos A (ata?) do piogenes, B no agalacte, C do equi e o G do canis) *hemólise total = piogenes, agalacse, equi, canis (grupo A e B) Características antigênicas: J. Sherman (1937): - Lancefield - Hemólise - Divisão lact 46:00 (faltou terminar de copiar) *classificação baseada nos antígenos presentes no carboidrato C (estrutura da parede celular, cada grupo de strepto vão ter antígenos diferentes) ● características antigênicas - carboidrato C ● grupo sorológicos ● grupos: A, B, C, D, E... (pula algumas letra) *Streptococcus agalase (faz parte do grupo B de lancefilde) Streptococcus disgalase, S. equi..., S. uberis (bactéria causadora de mastite) *espécies mais importante para veterinária: C, B, D, e G *gurpo D: é dividido em não enterococcus e enterococcus *Streptococcus pneumaniae: descoberta da transformação (sem capsula não infecta): se apresentam aos pares = pneumonia séptica *uberis: classificação sorologia cruzada (com mais de um grupo) não entra em classificação especifica Hemólise, característica antigênicas→ consigo classificar Classificação fenotípicos: - Divisão viridans: microbiota oral e.. *bactérias que fazem alfa hemólise, bactérias mais isoladas no sangue e na cavidade oral (falou que pineumonia está relacionado com a cavidade oral) - Divisão piogenicos: *entram os agalase, piogenes... - Divisão lácticos - Divisão enterococcus (importante no intestino grosso, não tem hemólise) * Esses dois últimos fazem parte de outro gênero hoje em dia (gênero lactococcus e enterococcus, só vai comentar) *pergunta de prova= explique as bases taxonômicas do gênero sterptococcus: além da citologia bacteriana (coccus gram +, anaeróbicas facultativas) as espécies desse gênero podem ser agrupada de acoro do com a informação genômica e/ou características antigênicas (baseada em lancefilde), hemolítica, além das características fenotípicas (piogenicos, beta hemólise = associação dessas características Morfologia e coloração, características nutricionais: * Em meio líquido a cadeia é mais longa, e em ágar é mais crutas Gram positivas em cadeias - Anaeróbias facultativas, alguns capnofilicos - Ph, tempo de crescimento - Temperatura: Streptococcus difficile (90°C) - Meios de cultura: ágar sangue, ágar columbia, ágar BHI, Streptococcus Selective agar, Strep Isolation agar - Sensibilidade: penicilina, cefalosporina, eritromicina, cloranfenicol - Resistentes: tetraciclina, fluorquinolona, aminoglicosídeos Fatores de patogenicidade: → Antígeno do grupo A (S. pyogenes) ° Indução febre ° Necrose dérmica/ cardíaca ° Lise eritrócitos/plaquetas → Capsula ° Baixa imunogenicidade- dificuldade de reconhecer pelo sistema imune ° Adesão e evasão da fagocitose- (dificulta a fagocitose porque esconde os epitopos, recobre e tem baixa imunogenicidade, é viscosa que ajuda a adesão/formação de biofilme) → proteína M *associada ao ácido lipoteicoico ou teicoico (fibrila) na parede, se ligam aos receptores da celula do hospedeiro, fazendo fixação e dificultando a fagocitose. O macrófago tem dificuldade em reconhecer, faz evasão da fagocitose Pirogênicas: produz febre Piogênicas: produz pus FOTO DA PROTEÍNA M → Estreptolisina S ° Hemólise, neutrófilos e plaquetas ° Estável O2 ° Não imunogênica (não é importante como uma estrutura antigênica) → Estreptolisina O ° Hemólise, neutrófilos e plaquetas ° Instáveis O2 ° Imunogênica ° Lisossomos- enzimas hidrolíticas (uma vez fagocitadas, podem se ligar a essas enzimas e impedir sua degranulação) → Estreptoquinase (fibrinolisina) ° Coágulos de fibrina → DNAse - Hialuronidase (facilita a disseminação nos tecidos) → C5a peptidase (dificulta a continuação da via do complemento) → Toxina eritrogênica (Spe) ° Superantígeno ° Permeabilidade capilar ° Eritrema = Síndrome do choque tóxico (liberação maciça de antígeno que não é reconhecido via MHC,tem ação direta nos linfocitos e a potencia de resposta inflamatória é muito rápida e descontrolada) Diagnóstico laboratorial - Exame direto ° Metodologia ° Dificuldades - Cultivo e identificação microbiológica ° Meio líquido ° Meio sólido - Ágar sangue - pH neutro Provas provas chaves: prova da bile-esculina = diferencia enterococcus (porque tem sais biliares) e o streptococcus (não cresce) - não alofilicos (não cresce na presenta de saisa biliares), mesofilicos teste especifico: CAMP: semeia o Streptococcus agalacte em um lado (hemólise parcial) streptococcus aureus do outro (hemólise parcial) = quando se encontro (a area de hemólise no caso) forma uma hemólise total (forma a ponta de seta) - Api 20 Stre: kits (provas fermentativas, oxidativas = perfil bioquímico, relacionado ao metabolismo da bactéria) - Patógenos oportunista: natureza, microbiota - > trato intestin 05/12 Bactérias gram positiva em morfologia bacilos→ produtoras de esporos Microbactérias material no class ° Todas as outras famílias são aeróbias facultativas Microbacterium - Característica classificação - Característica de parede (usa calor pra atirar os lipídeos para avaliar) CLOSTRIDIUM SPP - Os esporos que faz a preservação para permanecer no meio ambiente, fica sem nutrientes por muito tempo - Colônia mais secas e rugosas - Tem a localização dos esporos nas diferentes espécie Introdução: - Bacilos gram positivos, anaeróbios estrito, formadores de endósporos, fermentadores,produtores de toxinas - Mais de 200 espécies (classificação genômica) ° 50 patogênicas: homem e animais - Encontrados no ambiente e trato gastrointestinal * Clostriduim tetani e botulinum→ faz toxicinas * Bactéria telúrica- bactérias encontrada no solo Esporulação não e uma forma de replicação e sim de preservação → endósporo * Animais podem ter diarreia crônica - Bactérias anaeróbias - Catalase e oxidase negativa - A maioria é móvel: c. Perfringens não é móvel - Maiores enriquecidos são necessários para o crescimento Classificação: Neurotóxicos (sistema nevoso), histotóxicos (nos tecidos: músculos) e enteropatogênicos e produtos de enterotoxemia (no troto intestinal) *presente no solo e trato gastrointestinal, anaeróbicos, catalase e oxidade-negativa, a maioria são moveis mas alguns não (perfringes), e precisa de meios enriquecidos *Classificação: neurotoxicos (tetani e botulinum = SN), histotóxicos (multiplicam nos músculos, trauma ou migração do TGI via sangue) e enteropatogenicos (causam alterações gastroentericas), atípicos Morfologia - Bacilos pleomórficos aos pares ou em cadeia - Imóveis ou móveis por flagelos peritríquios - podem ter cápsula - Não invasivos (exógenos) x invasivo (endógenos) Não invasivos: botulinum e tetani - formadores de esporos que habitam o solo e contaminam feridas ou alimentos - pouca ou nenhuma capacidade de invadir multiplicar-se nos tecidos - produção de potentes toxinas → patogenicidade *não invasivos: não tem capacidade de infectar o microrganismos ultrapassando as barreiras: a multiplicação não causa a doença e sim a toxina (ação da toxina) = botulinum tetani Invasivos: chauvei, haemolyticum, perfrigens - invadem e multiplicam-se nos tecidos e intestinos do hospedeiro - produzem toxinas que são distribuídas pelo organismo pela corrente sanguínea *invasivos: a multiplicação da bactéria causam lesões celulares e teciduais (além da toxina, multiplicação) *são doenças infecciosas mas não contagiosa CLASSIFICAÇÃO: Patogênese: - neurotóxicos C. Tetani e C. Botulinum (tipo A-G) B nos alimentos e vai para o intestino (toxicidade e não a multiplicação?) Tetani: um antigênico e B. 8 tipos. T faz espasmo e o outro faz paralisia Outros: C. Coliunum, difficile piliforme spiro??? tem movimentos aleatórios o tétano, fica com o membros esticados e fica com o sorriso sarcástico, precisa de uma quantidade de toxicina para ter os sinais clínicos (cada animal precisa de uma quantidade) patogenia contaminação de feridas com esporos - anaerobiose local, germinação dos esporos - multiplicação bacteriana e produção de toxinas - transporte via axônios até o SNC- interneurônios - impedimento da liberação de NT inibitório - hiperatividade do SN simpático - paralisia espática Entre a musculatura e o neurônio 39:00, não assa a informação do neurônio para o músculo não tem a contração BOTULINUM Tipos de B ou mais frequentes são C e D (C→ aves aquáticas, aves domesticas, bovinos, ovinos e equinos) D→ Bovinos e ovinos B tem paralisia nas musculaturas→ leva a parada cardíaca e começa pelos membros inferior e mais vai subindo a toxicinas e paralisando → injeta soro rico em anticorpo para parar a toxicinas Camundongo também pode ter Botulismo: Bovinos: soro (vê se tem toxicina no sangue desse animal) fragmentos fígado, conteúdo intestinal * Não usar o soro-: alta afinidade da toxina aos receptores baixa biodisponibilidade no soro Aves e cães: soro→ conteúdo estômago, conteúdo intestinal (Se for na necrópsia pega desses locais) Isolamento e PCR: Para testar anaerobiose, faz esses testes depois da morte *dificuldade é a anaerobiose *toxinas migram via axônio Histotóxicos - C. chauvoei, C. septicum... -> C. chauvoei: carbúnculo sintomático: toxinas alfa (hemolisina e necrotoxina), beta (desoxirribonuclease), gama (hialuronidase), delta (hemolisina) = alguns produzem as 4, outras só 1 *patogenia: produzem toxinas de destruição tecidual (toxina letal, necorsante, hemolitica...) *quadro clinico da multiplicação e da toxina HISTOTÓXICOS: nos tecidos Clostriduim chauvoei Enteropatogenicos e enterotócxicos - C. perfringens (tipo A-E) -> C. perfingens - enterotoxemias, enterites agudas, doenças do rim pulposo - tipos A, B, C, D, e E: *A: hemolitiva, leucocida, fosfolipases CB: necrosante, tripsina labial. É (épsilon): necrosante e neurotóxica. Lota: necrosante e letal *tipo A produz a alfa toxina, B a beta: causam uma perturbação celular (necrotica) mas no trato gastrointestinal (rim também) *pode ser um constituinte da microbiota *Diagnóstico *porque não usa PCR como primeira linha de diagnóstico: podem ser da microbiota, ou do ambiente (podendo ser contaminação do ambiente Carbúnculo sintomático Toxinas: alfa (hemolisina e necrotoxina), beta (desorribonuclease), gama (hialuronidase), delta (hemolisina) Patogenicidade FALTANDO EXPLICAR Enteropatogênicos e enterotóxicos Clostridium perfringes Enterotoxemia, enterites agudas, doenças do rim pulposo 57:00 como faz o exame, VER COMO FAZ O EXAME NAS OUTRAS ESPÉCIES Não faz PCR nos outros por que pode se contaminar com eles no meio ambiente e não quer dizer que é ele que está causando a doença, então identificar o DNA não muda nada Características nutricionais: - Anaerobiose ° Tolerância variável ao O2 (0,5 a 8%) - Coleta imediata pós-mortem (contaminação clostrídios ambientais) - Ágar sangue enriquecidos (vitamina K, extrato de levedura e hemina) - Bactérias de T de 10°C a 69°C (ótima de 36°C)= mesófilas * Caracterização de fermentação é importante e PCR genoma da bactéria colônias: Sporogenes- algodoadas Colônias hemolíticas, secas Vacinas *tétano tem vacina para humano, nos animais pode ser usado para pré-exposição para o risco (toxóide) *botulismo: vacina toxóide (toxina inativada) *demais espécies vacinas com a bactéria inativada *neurotoxicos só para toxinas *histotoxicos: para bactéria e toxina