Aula 06_Quimica organica e experimental

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Análises Cromatográficas
CURSO FARMÁCIA
DISCIPLINA: QUÍMICA ORGÂNICA E EXPERIMENTAL
Professora Dra. Thamyres Vanessa Nascimento da Silva
MAR/2023
CASTANHAL-PA
TÓPICO 2 – AULA 06 - Identificação dos Compostos Orgânicos 
1. Técnicas de identificação de compostos orgânicos
Química clássica
Ensaios 
qualitativos 
(existência ou não 
do grupo 
funcional). 
Técnicas instrumentais
Análises espectroscópicas:
• Espectrofotometria (região 
do ultravioleta, do visível e 
no infravermelho).
• Espectrometria de massas.
Cromatografia
• Cromatografia em camada delgada (CCD).
• Cromatografia líquida de alta eficiência
(CLAE ou HPLC – High performance liquid
chromatography).
• Cromatografia a gás.ANÁLISE ORGÂNICA 
ELEMENTAR
(Combustão e Ensaio 
de Lassaigne)
2. Análises cromatográficas
Método físico-químico de separação de componentes de uma mistura por diferença no tempo de migração em 
uma coluna que ocorre devido a diferentes interações entre duas fases = fase móvel e a fase estacionária. 
Por meio desta análise é possível separar e identificar componentes químicos em amostras complexas.
APLICAÇÕES
• Separação de misturas de compostos orgânicos.
• Separação de moléculas de proteínas,
aminoácidos, vitaminas esteroides.
• Purificação de produtos farmacêuticos.
• Doseamento de insumos farmacêuticos e de
medicamentos.
• Identificação de fármacos em diferentes produtos ou
matrizes, separação e doseamento de impurezas em
matérias-primas ou produtos acabados.
• Testes de controle de qualidade (dissolução e uniformidade
de doses unitárias).
• Estudos de estabilidade para detecção e quantificação de
produtos de degradação.
3. Síntese histórica das análises cromatográficas
Iniciou-se com Friedlieb
Ferdinand Runge em 1850,
quando ele demonstrou a
separação de pigmentos de
um corante utilizando apenas
um filtro de papel e solvente.
Friedlieb Ferdinand Runge Friedrich Goppelsroeder
Demonstrou que a separação de
componentes de uma mistura sobre
um papel com solventes apropriados
(fase móvel, aquela que irá passar
por todo o papel) era possível graças
à ação da capilaridade.
A fase móvel não necessariamente precisa ser um 
líquido, mas pode ser um vapor. [...] Separações 
muito refinadas de substâncias voláteis podem ser 
conseguidas em uma coluna onde um gás 
permanente é forçado a fluir através de gel 
impregnado com um solvente não volátil [...].
Em 1941, Martin e Synge publicaram um artigo 
que tornou a cromatografia mais refinada
1952 - Cromatografia a gás
1958 - Cromatografia líquida
Cromatografia vem do grego chroma (cor) e graphein (escrita).
O princípio básico da cromatografia é a separação dos componentes de uma mistura através 
da distribuição destes entre duas fases – uma estacionária e uma móvel.
Tswett (1906) → extrato de folhas em coluna de alumina,
sucrose e carbonato de cálcio.
4. Cromatografia
Fonte: Mauricio X. Coutrim (2016)
A separação ocorre devido a diferenças de interação 
entre duas fases imiscíveis, uma denominada 
estacionária, e a outra, móvel.
• Fase estacionária (FE): líquido viscoso ou material
sólido onde se ligam quimicamente os analitos
transportados pela fase móvel.
• Fase móvel (FM): líquido ou gás responsável por
transportar os analitos presentes na solução.
Separação de pigmentos de vegetais (Fonte: Portal do Professor – MEC)
Fonte: Mauricio X. Coutrim (2016)
4. Cromatografia
3. Princípio básico da cromatografia 
A fase móvel (soluto) passa pela fase 
estacionária que pode estar dentro de uma 
coluna (cromatografia em coluna) ou sobre 
uma placa (cromatografia planar) e os 
componentes da mistura são separados pela 
diferença de afinidade pelas duas fases.
Transporte dos componentes de uma amostra por uma fase móvel 
através de uma fase estacionária (cromatografia de coluna).
Fonte: Mauricio X. Coutrim (2016)
# CONCEITOS:
• Eluição: processo de carregamento do soluto
pela fase móvel.
• Soluto: mistura de componentes da amostra.
• A fase estacionária é representada
por colunas cromatográficas.
• As colunas são cilindros preenchidos
com partículas de:
- Alumina (SiO2),
- Sílica gel (Al2O3), dentre outros
materiais.
Responde ao soluto 
quando estes saem da 
coluna cromatográfica, 
gerando um 
cromatograma.
.
4. Tipos de cromatografia de acordo com a forma física 
4.1. Cromatografia planar 
# CROMATOGRAFIA EM PAPEL
# CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)
Técnica de partição líquido-líquido, estando um
deles fixados a um suporte sólido. O solvente é
saturado em água e partição se dá devido à
presença de água em celulose (papel filtro).
Técnica de adsorção líquido-sólido (polaridade).
Nesse caso, a separação se dá pela diferenciação
de afinidade dos componentes de uma mistura
pela fase estacionária.
4.1. Resultado de um CDD 
Rf: tempo de retenção
O valor de Rf é um parâmetro físico da substância e
pode ser utilizado para sua identificação caso se
mantenha constante as seguintes condições:
• Solvente ou mistura de solventes;
• Fase estacionária (sílica gel ou alumina);
• Condições ambientais (temperatura, etc.);
• Espessura da camada e quantidade de amostra
aplicada.
Rf = Distância percorrida pelo componente (dist.)
Distância percorrida pela fase móvel
4.2. Cromatografia em coluna
# CROMATOGRAFIA GASOSA (CG)
Técnica que permite a separação de substâncias
voláteis arrastadas por um gás através de uma fase
estacionária sólida ou líquida.
# COMPONENTES:
• Reservatório de gás.
• Controles de vazão e pressão do gás.
• Injetor (vaporizador) da amostra.
• Coluna cromatográfica e forno da coluna.
• Detector.
• Registrador do sinal (computador).
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Sistema de Cromatografia Gasosa acoplada a 
Espectrometria de Massas (CG-EM, ou GC-MS do inglês Gas
chromatography–mass spectrometry)
4.2. Cromatografia em coluna
# CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA (HPLC)
Técnica adequada para a separação dos compostos (espécies iônicas,
macromoléculas e outros) de soluções líquidas em uma coluna, cuja a
fase estacionária é constituída por um sólido ou um sólido revestido
por um líquido.
• Reservatório de fase móvel: garrafas com solventes utilizados para
“transportar” a amostra.
• Injetor: dispositivo que permite a introdução da amostra no sistema.
• Bomba: responsável por movimentar a fase móvel e a amostra por
todo o sistema.
• Coluna cromatográfica: é um dispositivo preenchido com fase
estacionária.
• Detector: responsável por identificar os tempos de retenção das
substâncias analisadas.
# COMPONENTES: 
As análises obtidas pelo registrador no cromatógrafo são chamadas de cromatogramas, na quais ocorrem os picos 
cromatográficos, que nada mais são do que a interação do componente de uma amostra com a fase estacionária. Essa 
interação é dada pelo tempo de retenção em minutos ou horas, como mostrado na figura a seguir.
4.3. Cromatograma
Método preciso para medida do 
coeficiente de partição P.
Grandeza informa 
tendência de soluto 
distribuir-se entre fases 
líquidas.
↑ Coef. partição P = ↑ tempo que o 
soluto permanece na fase 
estacionária.
5. Exemplo de aplicação de análise cromatográfica 
“A Resolução da Diretoria Colegiada - RDC 
26/2014 considera medicamento fitoterápico 
aquele constituído exclusivamente de matéria 
prima vegetal. Entretanto, eventualmente 
ocorrem adulterações e irregularidades em 
produtos comercializados como fitoterápicos 
desprovidos de registro na ANVISA (Agência 
Nacional de Vigilância Sanitária). Tais produtos 
podem conter compostos sintéticos não 
declarados, como anti-inflamatórios, 
ansiolíticos ou anorexígenos, entre outras 
substâncias controladas.” 
2020
Cromatografia em Camada Delgada (CCD)
Cromatografia Gasosa acoplada à 
Espectrometria de Massas (GC–EM)
# MATERIAL E MÉTODOS
# RESULTADOS
• CCD
5. Exemplo de aplicação de análise cromatográfica 
Espectro de Massa da substância com tempo de retenção de 10,582 minutos.Em
vermelho, espectro da substância majoritária; em azul, espectro de referência do
composto clobenzorex, relatado na biblioteca NIST, obtido no exame realizado por
CG/EM. Fonte. A autoria, 2020.
Cromatograma de íons totais (CIT) da CG. Fonte. 
A autoria, 2020.
Obrigada!
Você tem alguma dúvida?
“A imaginação é mais importante que o conhecimento.”
(Albert Einstein)