Prática 2 - Ureia e Creatinina

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Prática 2 – Determinação de ureia e creatinina 
 
Carga Horária necessária para Execução da Aula: 4h/a 
Observações: 
Os alunos devem usar EPIS (Avental, luvas.), trazidos por eles próprios. 
Cabelos compridos devem estar presos ou cobertos por toucas descartáveis. 
Vestes: sapatos fechados, salto baixo, calça comprida. 
 
 Descrição do Preparo de Soluções e Reagentes: 
1. Preparar os reagentes de acordo com a bula do kit para determinação de uréia 
 
2. Preparar os reagentes de acordo com a bula do kit para determinação de creatinina 
 
 Objetivo: 
- Familiarizar-se com a manipulação de material biológico de maneira adequada e com 
equipamentos utilizados em laboratório 
- Observar os cuidados a serem tomados ao se determinar um analíto 
- Relacionar os resultados com a teoria 
- Interpretar os resultados obtidos 
 
Procedimentos Experimentais: 
 
Ureia 
Ver Precauções e Cuidados Especiais. 
 
Para a dosagem de uréia na urina, diluir a amostra 1:50 (0,1 mL de urina + 4,9 mL de água destilada 
ou deionizada). Multiplicar o resultado obtido por 50. 
 
 Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir: 
 
 Branco Teste Padrão 
Amostra - 0,01 mL = 
10 L 
- 
Padrão ( n 4) - - 0,01 mL = 
10L 
UreaseTamponada 1,0 mL = 
1000L 
1,0 mL = 
 1000L 
1,0mL = 
1000L 
 
 Misturar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos. 
 
 Branco Teste Padrão 
Oxidante de Uso 1,0mL = 1000L 1,0mL= 1000L 1,0 mL= 1000L 
 
 
 
Misturar e incubar a 37 ºC durante 5 minutos. Determinar as absorbâncias do teste e 
padrão em 600 nm (580 a 620), acertando o zero com o branco. A cor é estável 2 horas. 
 
O procedimento sugerido para a medição é adequado para fotômetros cujo volume mínimo 
de solução para leitura é igual ou menor que 2,0 mL. Deve ser feita uma verificação da necessidade de 
ajuste do volume para o fotômetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser 
modificados proporcionalmente sem prejuízo para o desempenho do teste e o procedimento de 
cálculo se mantém inalterado. Em caso de redução dos volumes é fundamental que se observe o 
volume mínimo necessário para a leitura fotométrica. 
 
Cálculos . 
Ver Linearidade. 
 
 Absorbância do teste x 70 
mg/dL = 
 Absorbância do padrão 
 
Exemplo 
 
 
 
Creatinina 
 Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir. 
 
 Branco Teste Padrão 
Tampão (Nº. 2) 
2,0 mL = 
 
2000L 
2,0 mL= 
 
2000L 
2,0 mL= 
 
2000L 
Amostra 
 0,25 mL= 
 
250L 
 
Água destilada ou 
deionizada 
0,25 mL= 
 
250L 
 
Padrão (Nº. 3) 
 0,25 mL= 
 
250L 
Ácido Pícrico (Nº. 1) 
0,5 mL= 
 
500L 
0,5 mL= 
 
500L 
0,5 mL= 
 
500L 
 
 
Misturar e incubar em banho-maria a 37 ºC durante 10 minutos. O nível da água no banho 
deve ser superior ao nível dos reagentes nos tubos de ensaio. Determinar as absorbâncias do teste 
e padrão em 510 nm ou filtro verde (500 a 540), acertando o zero com o branco. 
 
A absorbância do teste será A1. 
 
 
Segunda etapa: 
 
 Branco Teste Padrão 
Acidificante (Nº. 4) 0,1 mL 0,1mL 0,1mL 
 
Misturar e deixar a temperatura ambiente durante 5 minutos. Determinar a absorbância do teste em 
510 nm ou filtro verde (500 a 540), acertando o zero com o branco. 
 
A absorbância do teste será A2. 
 
 
 
 
Obs: os resultados devem ser reportados com duas casas decimais para evitar erros sistemáticos 
 
 
Aplicação do índice de correção. A interferência das proteínas plasmáticas que ocorre na 
reação de Jaffe8 introduz um erro constante na medição, que é minimizado pela utilização do índice 
de correção (0,25 mg/dL).