Isolamento de Streptococcus orais da saliva aula prática[1]

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Isolamento de Streptococcus orais da saliva
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Streptococcus orais
 Introdução
 Grupo viridans
Objetivos: 2.1- Isolar Streptococcus da saliva 2.2- Identificar S. mutans através da morfologia colonial, coloração de Gram e provas bioquímicas.
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Metodologia
Coletar saliva em recipiente estéril
2- Diluir a saliva até a diluição 10- 2
Semear em ágar Mitis salivarius 0,1 mL da diluição 10-2 através da semeadura por disseminação, espalhando com alça de Drigalsky
Incubar a 37 graus por 48 horas
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 Composição do ágar Mitis salivarius:
Sacarose: Substrato
Azul de Tripan: Corante e inibidor
Telurito de potássio: Inibe os Gram negativos
 Obs: Para tornar o meio seletivo para o isolamento de S. mutans, acrescentar ao meio bacitracina(MSB)
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Resultado
Observar os diferentes tipos de colônias desenvolvidas no meio ágar Mitis salivarius
S. mutans: Colônias azuis, granulosas, com aparencia de vidro fosco
Corar pelo Gram:
 Cocos Gram positivos em cadeias
Inocular uma colônia característica em caldo manitol, caldo sorbitol e em caldo BHI sacarosado para fazer a prova da produção de placa “in vitro
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Resultados:
Observar a morfologia colonial e fazer Gram das colônias.
 Gram: cocos Gram positivos em cadeias.
Colônias e Gram característicos de S. mutans
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Colônias de Streptococcus orais isolados da saliva
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Características das colônias em ágar Mitis - salivarius
S. mutans: Colônias azuis, orvalhadas, granulares, com aparencia de vidro esmerilhado(fosco)
S. sanguis: Colônias azuis, aderente ao meio de cultura
S. mitis Colônias pequenas, não aderentes, azul escuro,
S. salivarius: Colônias azul claro, elevadas mucoides (aparencia de bala de goma ou jujuba) 
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Identificação de S. mutans
Após a observação da morfologia colonial,tomar uma colônia característica e realizar as provas de fermentação do manitol e sorbitol e da placa “in vitro”, semeando nos respectivos meios.
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Identificação de S. mutans
Provas de fermentação do manitol e sorbitol e produção de placa “in vitro:
Fermentação do manitol e sorbitol:
Sorbitol ou manitol: substratos
Indicador de pH: vermelho de fenol
Inocular a colônia, incubando a 37o
por 48 horas
Produção de placa “in vitro”:
Caldo sacarosado (5%) + bengala de vidro
Inocular a colônia fazendo leitura com 24 horas 
até 7 dias.
 
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Resultado:
S. mutans:
1- Fermenta o manitol e sorbitol passando os meios de vermelho para amarelo(pH ácido) e produz placa in vitro, crescendo aderidos a bengala de vidro no tubo.
Interpretação do resultado:
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S. mutans: Fermenta manitol e sorbitol e produz placa in vitro
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Revelação do biofilme dental(placa)
Introdução
Objetivo: motivar o paciente no controle do biofilme dental.
Metodologia: 
Mastigar uma pastilha com revelador de placa (fucsina);
Observar o biofilme corado;
Retirar o biofilme com cureta estéril;
Fazer o esfregaço, fixar pelo calor
Corar pelo Gram : anotar as formas microbianas.
 
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