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ANÁLISE DE ALIMENTOS CARBOIDRATOS MÉTODO DE FEHLING – LANE E EYNON A determinação do teor de glicídios é realizada através do Método de Lane-Eynon, com utilização do Reagente de Fehling. O Método de Lane-Eynon baseia-se na redução de volume conhecido do reagente de cobre alcalino (Fehling) a óxido cuproso. O ponto final é indicado pelo azul de metileno, que é reduzido a sua forma leuco por um pequeno excesso de açúcar redutor.A solução de açúcar é adicionada vagarosamente de uma bureta de Fehling a uma mistura em ebulição das duas soluções de Fehling. Próximo ao ponto de viragem é adicionado 1mL de uma solução aquosa de azul de metileno 2%, que muda a cor da solução de azul para incolor no ponto de viragem. A solução fica incolor, mas como existe o precipitado cor de tijolo, a cor visível da viragem é de azul para vermelho tijolo. Existem dois fatores importantes a serem seguidos neste método para maior exatidão dos resultados: 1. A solução deve ficar constantemente em ebulição durante a titulação, porque o oxido cuproso formado pode ser novamente oxidado pelo oxigênio. do ar e muda a cor novamente para azul. 2. A titulação deve levar no máximo 3 minutos porque pode haver decomposição dos açúcares com o aquecimento prolongado. Esse é um método titulométrico que consiste na redução de cobre alcalino à oxido cuproso. SACAROSE (glicose + frutose) (açúcar não redutor) – A redução à oxido cuproso não acontece diretamente sendo necessário quebrar o açúcar com a solução ácida para promover essa reação. Muitas vezes se faz a inversão desse açúcar. GLICOSE E FRUTOSE (açúcares redutores) As vezes é necessário clarificar (depende da amostra e da cor dela) pois o precipitado fica com a cor vermelho tijolo pode levar a equívoco na leitura da viragem do azul d metileno para incolor 1 MÉTODO DE DETERMINAÇÃO DE AÇÚCARES REDUTORES (em glicose)1 APLICAÇÃO Aplica-se em produtos enlatados, salsicharia, queijos e outros produtos alimentícios que tenham em sua composição até 5% de açúcares (pesar 25g). E em produtos com alto teor de glicose como mel, geléias, etc (pesar 1g). PROCEDIMENTO 1. Pesar a amostra homogeneizada em béquer de 250mL (anotar o peso). 2. Adicionar 50mL de água destilada e homogeneizar com bastão de vidro. 3. Transferir para balão volumétrico de 250mL (não completar o volume). 4. Adicionar 2mL de ferrocianeto de potássio a 15% e 2mL de acetato de zinco a 30%. Agitar bem e completar o volume. (Isso é pra clarificar) 5. Aguardar a floculação e sedimentação do material. Filtrar, identificando o frasco que recebe o filtrado. 6. Colocar o filtrado na bureta. 7. Pipetar volumetricamente 5mL de Fehling A e 5mL de Fehling B para o balão de titulação Fehling. Adicionar algumas pérolas de ebulição. 8. Adicionar 40mL de água destilada. Aquecer até ebulição e gotejar a solução da amostra até que inicie o descoramento. Adicionar 1 gota de azul de metileno a 1% e completar a titulação até descoramento do indicador. 9. Mantendo a ebulição, adicionar 1 gota de azul de metileno a 1% e continuar a titulação até descoloração do indicador. Anotar o volume gasto. 2) DETERMINAÇÃO DE AÇÚCARES TOTAIS 1. Pesar a amostra homogeneizada em Erlenmeyer de 250 mL. Anotar o peso da amostra. 2. Adicionar 50mL de água destilada e dissolver a amostra. 3. Adicionar 2mL de ácido clorídrico concentrado (na capela) e levar ao banho-maria (60°C) por 60 min. 4. Esfriar e neutralizar com hidróxido de sódio 50%, usando papel indicador de pH. 5. Seguir os procedimentos 3 a 9 do Método açúcares redutores VITAMINAS TILLMANS É um método titulométrico. Fundamenta-se na oxidação do ácido ascórbico a ácido dehidroascórbico pelo 2,6-diclorofenlindofenol (DCPIP). DCPIP: Em meio ácido fica de cor rosa. Em meio aquoso a cor fica azul. Na forma reduzida apresenta-se incolor. DESVANTAGENS: Apresenta diversos compostos que atuam como interferentes (íons de ferro, cobre e estanho, pigmentos). determina somente vitamina C. Sua aplicação é restrita a frutas cítricas e tabletes de multivitamina que não possuam minerais em sua composição. O procedimento possui limitações em soluções coloridas. O método pode ser utilizado em amostras que contenham baixa concentração de vitaminas, como sucos e frutas. FRAUDE (LEITE) Teste do alizarol: Alizarina + álcool; 2ml de leite; 2ml de alizarol; RESULTADOS: Ácido: colostro, ácido lático; Alcalino: mastite, adição água; Neutro: leite normal; Acidez titulável: No teste da acidez titulável, uma substância básica (isto é, alcalina), o hidróxido de sódio (NaOH), é usada para neutralizar o ácido do leite. Uma substância indicadora (fenolftaleína) é usada para mostrar a quantidade do álcali que foi necessária para neutralizar o ácido do leite. O indicador permanece incolor quando misturado com uma substância ácida, mas adquire coloração rosa em meio alcalino. Portanto, o álcali (NaOH N/9) é adicionado ao leite até que o leite adquirira a coloração rósea. Cada 0,1 mL da solução de NaOH N/9 gasto no teste corresponde a 1oD ou 0,1g de ácido láctico/L. Densidade: densidade relativa a 15ºC entre 1,028 e1,034. Pesquisa de reconstituinte – cloreto: 10ml de leite; 4,5ml de nitrato de prata; 10 gotas de cromato de potássio 5%. NEGATIVO: marrom. POSITIVO: amarelo. Pesquisa de reconstituinte – amido: Pipetar 5ml de leite e transferir para o tubo de ensaio; Aquecer no bico de Bunsen com auxilio de pinça de madeira até atingir a fervura; Resfriar rapidamente em água corrente; Adicionar 3 a 5 gotas de lugol; NEGATIVO: amarelo; POSITIVO: azul. LUPA – NOVA ROTULAGEM: Açúcares adicionados: sólidos: 15g/100g. Liquidos: 7,5g/100ml Gorduras: sólidos: 6g/100g. líquidos: 3g/100ml Sódio: 600mg/100g. líquidos: 300mg/100ml DETERMINAÇÃO UMIDADE: Secagem em estufa: determinação de voláteis à temperatura 105ºC. Secagem por radiação infravermelha: lâmpada de radiação infravermelha, com 250 a 500 watts. Secagem em forno de micro-ondas: Na amostra úmida, quando exposta à radiação de micro-ondas, as moléculas com cargas dipolares giram na tentativa de alinhar seus dipolos. O aquecimento é mais rápido e seletivo para áreas de maior umidade. Secagem em dessecadores; Utiliza substancia desidratante. Destilação azeotrópica: A água forma uma mistura que tem ponto de ebulição constante. Titulação: método de karl fisher – utiliza regente de mesmo nome como titulante e solução metanólica da amostra como titulado. NIR – espectroscopia no infravermelho próximo: equipamento baseia-se na emissão de luz infravermelho na amostra, refletida e medida por detectores. Índice de refração – feito no refratômetro. Utilizado para mel. Densidade: Pouco preciso. Crioscopia: Ponto de congelamento. Utilizado para leite. DETERMINAÇÃO DE CINZAS Queima seca: carbonização da amostra, em chama de gás e posterior incineração em mufla à 525ºC a 600ºC até completa queima da matéria orgânica. Queima úmida: consiste na digestão da matéria orgânica, com um ou moas ácidos em altas temperatura. Utilizadas para elementos específicos (elementos traços e metais tóxicos). Emissão de chamas (fotometria): É utilizado para determinar a concentração dos metais como o sódio, potássio e cálcio. Utiliza gás de cozinha. Absorção atômica: utiliza etileno. Propriedade de absorção de energia representada por fótons de cumprimento de onda bem determinado. Espectrometria de emissão ótica indutivamente aclopada ao plasma – ICP – OES: Plasmas é um gás condutor contendo uma concentração significativa de cátions e elétrons. O gás utilizado é o gás argônio. DETERMINAÇÃO DE LIPÍDEOS SOXHLET: Utiliza refluxo descontinuo de solvente a quente. GOLDFISH: Utiliza refluxo contínuo com solvente aquecido. BLIGH DYER: Método de extração a frio que utiliza clorofórmio, metanol e água. HIDRÓLISE ÁCIDA: é necessário quebrar o filme proteico para liberar o lipídeo da proteína e assim quantificar. GERBER- ácido sulfúrico e álcool isoamílico. BABCOK: ácido sulfúrico e água quente. IIDRÓLISE ALCALINA: Quebra o filme proteico com hidróxido de amônia CROMATOGRAFIA: Separação de componentes de umaamostra em uma fase estacionária e uma fase móvel em que os componentes estão separados de acordo com suas interações com a fase estacionária e a fase móvel. DETERMINAÇÃO DE PROTEÍNAS KJELDAHL: A amostra é aquecida com ácido sulfúrico para digestão até que o carbono e hidrogênio sejam oxidados. O nitrogênio da proteína é reduzido e transformado em sulfato de amônia. Adiciona-se hidróxido de sódio, o qual é aquecido para liberação de amônia e essa, por sua vez será destilada em uma solução de ácido bórico, formando borato de amônia. Por fim, o borato de amônia é titulado com ácido clorídrico padronizado. BIURETO: Reagente de biureto (tartarato de sódio e potássio, sulfato de cobre e hidróxido de sódio). Consiste na coloração roxa da amostra devido a reação da proteína com o cobre do reagente. BRADFORD: Utiliza reagente que irá colorir as proteínas da amostra. Isso se deve a reação do Coomassie Brilliant Blue com as macromoléculas de proteína que contém aminoácidos de cadeias laterais básicas ou aromática. DUMAS: Método em que ocorre a combustão da amostra em altas temperaturas para a determinação de nitrogênio. (a combustão ocorre em um instrumento chamado analisador elementar de nitrogênio).