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QUESTÕES: 1. Durante a coloração de Gram, um técnico laboratorial em microbiologia inverteu a ordem das etapas e submeteu a amostra à solução de álcool a 95% antes de tratar a amostra com lugol. Com base na morfologia de procariotos e a finalidade desse método de coloração, a opção que contém a consequência da distração do profissional é: A) o álcool pode ser adicionado em qualquer etapa da coloração de Gram; B) o lugol funciona como descorante, retirando o excesso de cristal violeta; C) as bactérias Gramnegativas não serão coradas pelo lugol; D) o lugol não faz nenhuma diferença na coloração de Gram; E) as bactérias Grampositivas serão descoradas pela ação do álcool. 2. Um paciente, com suspeita de tuberculose, foi encaminhado a um laboratório de microbiologia para realização da baciloscopia a fim de confirmar o diagnóstico da doença. A presença da bactéria da tuberculose a partir do escarro foi evidenciada utilizandose o método de A) Gram, que corou os bacilos álcoolácidoresistentes em vermelho. B) ZiehlNeelsen, que corou os bacilos álcoolácidoresistentes em vermelho. C) ZiehlNeelsen, que corou os bacilos não álcoolácidoresistentes em violeta. D) Gram, que corou os bacilos não álcoolácidoresistentes em violeta. 3. Os corantes básicos de anilina são os mais utilizados dentre as técnicas de coloração aplicadas na bacteriologia. Esses corantes apresentam grupos cromóforos, dotados de carga: A) positiva, que coram as mitocôndrias. B) negativa, que coram a membrana citoplasmática. C) negativa, que coram a parede celular. D) positiva, que coram os componentes nucleares. 4. Um microbiologista recebeu um material biológico para que fosse preparado um esfregaço numa lâmina e submetido a uma técnica de coloração simples. Dentre as opções abaixo relacionadas ao preparo e fixação do esfregaço, o procedimento correto é: A) espalhar o material sobre a lâmina fazendo movimentos circulares e, ainda úmido, passar a lâmina duas a três vezes na chama do bico de Bunsen. B) depositar uma gota do material sobre a lâmina, deixar secar à temperatura ambiente e, em seguida, passar a lâmina três vezes na chama do bico de Bunsen. C) espalhar o material sobre a lâmina fazendo movimentos circulares, deixar secar à temperatura ambiente e passar a lâmina três vezes na chama do bico de Bunsen. D) depositar uma gota de material sobre a lâmina e, ainda úmido, passar a lâmina duas a três vezes na chama do bico de Bunsen 5. A coloração de Gram, amplamente utilizada na microbiologia, permite diferenciar as bactérias Grampositivas das Gramnegativas. Nessa técnica, a função do iodo é: A) fixar o corante no interior das células. B) atuar como agente diferenciador da coloração. C) corar o núcleo das células em púrpura. D) corar todas as células em púrpura. 6. Os métodos de coloração de Gram e ZiehlNeelsen são os mais usados em bacteriologia clínica, podendo ser aplicados para caracterização e rastreamento da maioria das cepas de importância clínica. Em relação aos métodos e ao comportamento citomorfológico de bactérias, analise as afirmativas abaixo. 1. Esfregaços corados pelo método de ZiehlNeelsen são úteis no diagnóstico bem como no acompanhamento da resposta do paciente ao tratamento. Usando a metodologia para acompanhamento, caso o número de microrganismos não diminua após o início da terapia, devese considerar a possibilidade de resistência aos fármacos. 2. Na caracterização dos principais patógenos envolvidos em quadros de meningite, o método de coloração de Gram é de fundamental importância, visto que os principais agentes etiológicos apresentam diferenças na coloração, sendo Neisseria meningitidis diplococo Gram negativo, Streptococcus pneumoniae diplococo Gram positivo e Haemophilus influenzae cocobacilo Gram positivo. 3. Alguns erros podem acontecer quando se realiza a coloração pelo método de Gram, tais como a descoloração insuficiente com álcoolacetona, resultando na retenção do cristal violeta dificultando a observação de bactérias Gram negativas A alternativa correta é: a) Opção 1. b) Opções 1 e 2. c) Opções 1 e 3. d) Opções 2 e 3. e) Todas as opções (1, 2 e 3). 7. A observação da forma das bactérias é possível pela utilização do microscópio. Para facilitar essa observação, existe uma série de combinações entre substâncias químicas e corantes. Essas técnicas de coloração para posterior visualização são utilizadas rotineiramente no laboratório de microbiologia. Com relação às técnicas de coloração, julgue as assertivas abaixo: I. O preparo de suspensões de microorganismos para posterior observação é realizado utilizando uma alça de platina, com a qual uma gota é retirada da solução contendo o microorganismo e espalhada sobre uma lâmina limpa e seca. II. A alça de platina deve ser flambada entre a semeadura em uma lâmina e outra, mesmo que sejam microorganismos semelhantes. III. O tempo de incubação da fucsina sobre a lâmina é de 45 segundos na coloração simples com fucsina. IV. O óleo de imersão deve ser evitado quando utilizada a coloração simples de fucsina. V. A coloração pela fucsina tinge os microrganismos de vermelho 8. Considerando a técnica de coloração de Gram e as características da parede bacteriana, julgue as assertivas abaixo: I. As bactérias, de acordo com a coloração apresentada pela técnica de Gram, podem ser classificadas em Gram positivas e Gram negativas. II. A parede das bactérias consideradas Gram positivas é mais delgada, permitindo a entrada do corante na célula bacteriana. III. As bactérias Gram positivas apresentam coloração azul ao final da técnica. IV. A parede celular das bactérias consideradas Gram negativas é composta por: lipopolissacarídeos, fosfolipídeos, lipoproteínas e uma fina camada de peptideoglicano. V. As bactérias consideradas Gram negativas apresentam coloração vermelha ao final da técnica. 9. Na realização da técnica de Gram, todos os passos devem ser criteriosamente seguidos pelo técnico do laboratório de microbiologia, de modo a evitar o comprometimento da técnica e a dificuldade na interpretação dos resultados. Considerando essas informações, julgue as assertivas abaixo: I. A exposição máxima da lâmina ao cristal violeta deve ser de 15 segundos. II. O lugol deve ser adicionado posteriormente ao cristal violeta e o tempo para reação é de 1 minuto. III. A lâmina, após o lugol, deve ser lavada com água destilada para retirar o excesso. IV. O óleo de imersão deve ser acrescentado ao final do processo para observação no microscópio. V. A fucsina é o primeiro corante a ser acrescentado à lâmina na técnica de Gram.10. As interpretações dos esfregaços corados pelo Gram envolvem considerações relacionadas com as características da coloração, tamanho, forma e agrupamento das células. Estas características podem ser influenciadas por vários fatores. Dentre eles podemse incluir: A) forma de coleta e transporte do material, experiência do profissional, estado nutricional do paciente. B) experiência do profissional, estado imunológico do paciente e a presença de substâncias inibidoras. C) o meio de cultivo utilizado, a atmosfera de incubação, experiência do profissional, estado imunológico do paciente. D) idade da cultura, presença de substâncias inibidoras, estado imunológico do paciente e forma de coleta e transporte do material. E) idade da cultura, o meio de cultivo utilizado, a atmosfera de incubação e a presença de substâncias inibidoras. 11. Para o estudo da morfologia bacteriana é correto utilizar, na rotina, a coloração de: A) ZiehlNeelsen. B) Gram. C) Leishman. D) White. 12. Para a coloração de bacilos álcoolácido resistentes, devemos utilizar a coloração de ZiehlNeelsen na seguinte ordem: A) Fucsina diluída, álcoolacetona e Azul de Metileno. B) Fucsina fenicada, álcoolacetona e Azul de Metileno. C) Fucsina diluída, álcoolácido e Azul de Metileno. D) Fucsina fenicada, álcoolácido e Azul de Metileno 13. A coloração pelo método de Gram identifica as bactérias grampositivas por apresentarem um maior percentual de: (A) lipídeos; (B) peptideoglicanos; (C) proteínas nucleares; (D) proteínas citosólicas; (E) carboidratos. 14. Mycobacterium tuberculosis se diferencia de outras bactérias que não são álcoolácido resistentes, pelo método de ZiehlNeelsen, por apresentar uma coloração: (A) roxa; (B) Azulescuro; (C) verde; (D) vermelha; (E) laranja. 15. Assinale a opção CORRETA: A) Bactérias Gram negativas sofrem descoloração pelo iodo. B) Bactérias Gram positivas sofrem descoloração pelo álcool. C) Bactérias Gram positivas coramse com safranina após descoloração pelo álcool. D) Bactérias Gram positivas coramse de violeta e bactérias Gram negativas coramse de vermelho 16. Dadas as afirmativas abaixo quanto aos Métodos de Coloração de Microorganismos para visualização em microscópio óptico: I. A coloração de ZiehlNeelsen pode ser utilizada somente para coloração de micobactérias. II. Ao final da coloração de Gram, as bactérias Gram positivas coramse com o corante primário, denominado safranina ou fucsina. III. Ao final da coloração de Gram, as bactérias Gram negativas coramse com o corante secundário, denominado safranina ou fucsina. IV. Colorações simples utilizam um único corante Verificase que estão corretas apenas A) III e IV. B) II e IV. C) II e III. D) I, III e IV. E) I e II. 17. A coloração de Gram é um importante método empregado na microbiologia, que permite diferenciar bactérias em duas classes as Grampositivas e Gramnegativas em função das propriedades químicas da parede celular. As bactérias Grampositivas possuem na parede celular uma camada espessa de peptideoglicano, que é uma rede polimérica contendo açúcares (Nacetilglicosamina e ácido Nacetilmurâmico) e oligopeptídeos, enquanto que as bactérias Gramnegativas contêm uma camada fina. Na coloração de Gram utilizase o cristal violeta (cloreto de hexametilpararoanilina), que interage com o peptideoglicano. A adição de iodeto causa a precipitação do corante e as partículas sólidas ficam aprisionadas na rede polimérica, corando a parede celular. Ao lado estão esquematizadas a rede polimérica do peptideoglicano e as estruturas das espécies envolvidas. A partir das informações fornecidas, é correto afirmar que a principal interação entre o cristal violeta e a parede celular é: a) ligação de hidrogênio b) interação íondipolo. c) interação íondipolo instantâneo d) interação dipolodipolo. e) interação dipolodipolo instantâneo 18. Para a identificação de bactérias a coloração é um dos passos mais importantes, cuja finalidade é sua observação microscópica para diferenciação. Em relação às colorações, assinale a alternativa incorreta: A. Na coloração de Gram as bactérias Grampositivas retêm o precipitado azul formado pelo corante cristal violeta, reagindo com o lugol. B. Na coloração de Gram as bactérias Gramnegativas não retêm o precipitado azul formado e adquirem a coloração do corante de fundo. C. Na coloração de ZiehlNeelsen a coloração é feita a frio pelo azul de metileno. D. A resistência de muitas bactérias Grampositivas à descoloração diminui à medida que a célula bacteriana envelhece. E. As bactérias Gramnegativas são facilmente dissolvidas ou desorganizadas pelo álcool 19. A identificação de microorganismos requer, entre outros, a observação de sua morfologia. Após o preparo do esfregaço, a lâmina é passada algumas vezes pela chama, num processo denominado: A) Secagem do esfregaço. B) Fixação do esfregaço. C) Ebulição do esfregaço. D) Coloração do esfregaço. E) Evaporação do esfregaço. 20. Para a visualização da morfologia, arranjo e/ou reação tintorial, os microorganismos sofrem um processo de coloração. O primeiro passo das técnicas de coloração consiste (A) na preparação da suspensão bacteriana. (B) na confecção do esfregaço bacteriano. (C) na preparação da eluição bacteriana. (D) na confecção do inóculo bacteriano. 21. Para cada questão marque V, se a proposição é verdadeira; F, se a proposição é falsa. ( ) As bactérias do gênero Mycobacterium resistem à descoloração por solventes orgânicos fortes, motivo pelo qual são coradas através do método de ZiehlNeelsen. ( ) A principal utilização da coloração negativa é a detecção de endosporos nas bactérias. ( ) A identificação presuntiva de bactérias pode ser realizada através da utilização da coloração de Gram, associada à morfologia das células. 22. O método de Gram, técnica de coloração de bactérias desenvolvida pelo médico dinamarquês Gram, permite separar as espécies de bactérias em dois grandes grupos: as bactérias grampositivas e as gramnegativas. A coloração de Gram é um dos mais importantes métodos de coloração empregados nos laboratórios de microbiologia na determinação de amostras de bactérias. Assinale a opção que explica o princípio desse método. A As mitocôndrias de bactérias grampositivas retêm o corante cristal violeta usado, enquanto as mitocôndrias de bactériasgramnegativas não o fazem. B Os ácidos nucleicos de bactérias grampositivas retêm o corante cristal violeta usado, enquanto as paredes celulares de bactérias gramnegativas não o fazem. C Os núcleos de bactérias grampositivas retêm o corante cristal violeta usado, enquanto os núcleos de bactérias gramnegativas não o fazem. D As membranas plasmáticas de bactérias grampositivas retêm o corante cristal violeta usado, enquanto as membranas plasmáticas de bactérias gramnegativas não o fazem. E As paredes celulares de bactérias grampositivas retêm o corante cristal violeta usado, enquanto as paredes celulares de bactérias gramnegativas não o fazem. 23. Em 1884, o bioquímico dinamarquês Hans Christhian Gram (18531938) criou um processo, chamado coloração de Gram, usado para classificar as bactérias em grampositivas ou gramnegativas, conforme absorvam ou não um determinado corante. Neste procedimento, as bactérias: (A) grampositivas são identificadas em vermelho pela coloração de contraste com fucsina. (B) gramnegativas são identificadas em roxo pela coloração de contraste com safranina. (C) grampositivas são identificadas em vermelho pela coloração de contraste com safranina. (D) grampositivas são identificadas em roxo pela coloração de contraste com lugol. (E) gramnegativas são identificadas em vermelho pela coloração de contraste com safranina. 24. Sobre a coloração de ZiehlNeelsen, avalie as afirmativas a seguir: I – É uma coloração feita a quente e a fucsina concentrada fica retida nas bactérias álcool ácido resistentes. II – Como a coloração de fundo é feita com azul de metileno, as bactérias que não são resistentes tornamse azuis. III – As bactérias álcool ácido resistentes coramse de rosa já que estas retêm o corante após a descoloração do esfregaço feita com uma mistura de álcool e ácido clorídrico. Assinale a alternativa correta. a) Somente as afirmativas I e II estão corretas. b) Somente as afirmativas I e III estão corretas. c) Somente as afirmativas II e III estão corretas. d) Somente a afirmativa II está correta. e) Todas as afirmativas estão corretas. 25. A coloração é um dos passos mais importantes na identificação de bactérias. Assinale a alternativa incorreta sobre as técnicas de coloração. a) Os esfregaços são fixados, na rotina de laboratório, pelo calor, passandose a lâmina com esfregaço rapidamente pela chama do bico de Bunsen. b) Raramente, em laboratórios clínicos, usase coloração de esfregaços apenas com um corante, pois a coloração diferencial é mais satisfatória e fornece um número muito maior de informações. c) As colorações de maior importância para a microbiologia são as de Gram e Ziehl Neelsen. d) As bactérias se comportam como o material nuclear e, por isso, a maioria dos corantes utilizados na bacteriologia possuem características básicas. e) Fatores como pH da solução de lavagem, pureza dos reagentes e limpeza das lâminas não influenciam nos resultados da coloração quando as técnicas são seguidas. 26. O método de coloração de Gram consiste no tratamento sucessivo de um esfregaço bacteriano, fixado pelo calor e corado com determinados reagentes. Assinale o item que contempla a ordem correta dos reagentes durante a reação. A) Cristal violeta, lugol, fucsina básica e etanolacetona. B) Fucsina básica, cristal violeta, lugol e etanolacetona. C) Cristal violeta, lugol, etanolacetona e fucsina básica. D) Cristal violeta, fucsina básica, lugol e etanolacetona. E) Fucsina básica, etanolacetona, cristal violeta e lugol. 27. A técnica de coloração de Gram está relacionada às características de cada microrganismo específico. Baseado nessa técnica, é correto afirmar que: A) esta técnica permite somente a separação de amostras bacterianas em Gram positivas. B) o corante cristal violeta pode ser substituído, com os mesmos resultados, pela safranina. C) as bactérias Gram positivas e Gram negativas absorvem de maneira idêntica o corante primário e o fixador. D) as bactérias Gram positivas não retêm o cristal violeta, após o tratamento com etanolacetona. E) o corante fucsina básica pode ser substituído com os mesmos resultados pelo azul de metileno 28. Um estagiário do laboratório de Microbiologia Clínica recebeu uma lâmina contendo esfregaço de Escherichia coli e uma lâmina contendo esfregaço de Staphylococcus aureus para serem coradas pela coloração de Gram (cristal violeta, lugol, álcool, fucsina diluída). Após fixar os esfregaços pelo calor, o estagiário realizou a coloração, porém inverteu a ordem da utilização dos corantes (fucsina, álcool diluído, cristal violeta, lugol). Qual foi o resultado da coloração observado ao microscópio para E. coli e S. aureus, respectivamente? (A) Bacilos violetaescuro e cocos vermelhoclaros. (B) Bacilos vermelhoclaros e bacilos violetaescuro. (C) Bacilos e cocos vermelhoclaros. (D) Bacilos e cocos violetaescuro. (E) Cocos vermelhoclaros e cocos violetaescuro. 29. A sequência CORRETA na qual os corantes e reagentes são utilizados para a realização de uma coloração de Gram é a da opção: A) Lugol, álcool, cristal violeta e safranina. B) Cristal violeta, lugol, álcool e safranina. C) Cristal violeta, safranina, álcool e lugol. D) Cristal violeta, álcool, lugol e safranina. 30. Descreva um texto sobre a função dos reagentes para identificação de bactérias Gram positivas e negativas (princípio do método), e comente a importância do método de coloração de Gram para o laboratório de microbiologia. 31. Ao fazer uma coloração de Gram, o técnico equivocouse e esqueceuse de aplicar o mordente, o resultado esperado para a coloração de um microorganismo Gram positivo e um Gram negativo é respectivamente: A) Rosa e rosa. B) Violeta e rosa. C) Rosa e violeta. D) Violeta e violeta. E) Violeta e incolor 32. A preparação de esfregaço a partir de uma cultura em caldo dispensa a utilização de: A) Lâmina. B) Alça de platina. C) Bico de Bunsen. D) Salina fisiológica. E) Fixação do esfregaço
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