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FACULDADE ESTÁCIO DE SÁ BIOQUÍMICA RELATÓRIO DE IDENTIFICAÇÃO DE AMINOÁCIDOS Aline Cristina Aquino1, Larissa Alessandra Da Cunha Herreira1; Dr. Joaquim Corsino2. 1Acadêmicas do Curso de Farmácia da Faculdade de Estácio de Sá. 2Professor Doutor da Disciplina de Química Orgânica da Faculdade de Estácio de Sá. Introdução Os aminoácidos são produtos das proteínas, cujas propriedades organolépticas são ser incolor e na maioria das vezes apresenta sabor adocicado, estes também são sólidos, com solubilidade variável em água, apresentam atividade óptica em água por possuírem carbono assimétrico. Estas moléculas são formadas pelo grupo amina e um grupo carboxila e uma cadeia lateral que é especifica para cada aminoácido. Os aminoácidos são moléculas anfóteras, podendo se comportar como ácido ou base, liberando H+ ou OH-. Estas moléculas apresentam ponto isoelétrico pI, este termo refere-se ao fato de apresentarem a mesma quantia de cargas elétricas negativas e positivas. O pI é especifico para cada aminoáciodo, sendo assim uma maneira de identificação. Para que em uma solução possa-se identificar os aminoácidos presentes, é necessário que se altere o pH do meio, a cada aminoácido precipitado sabe-se que o pI deste foi atingido. Dentre as reações especificas de identificação de aminoácidos, tem-se a reação de Sakaguichi que caracteriza aminoácidos com grupo guanidina. Figura 1: grupo guanidina. Reação Xantoprotéica, que caracteriza aminoácidos que apresentam anel aromático. Reação para aminoácidos que contem enxofre dentre outras. Estas reações serão apresentadas a seguir. Objetivos Realizar testes qualitativos em tubos de ensaio para reconhecimento de aminoácidos. Material e Métodos Para a execução desse experimento, foram utilizados: 9 tubos de ensaio; Estante para tubos de ensaio; Pipeta; Banho Maria; Água destilada; Arginina 0,5mM; Triptofano 0,5mM; Solução protéica; Hidróxido de sódio (NaOH); α- Naftol; Hipoclorito de sódio 0,5% (NaClO); Campo Grande, 19 de setembro de 2013. 2 Acido nítrico (HNO3); Acetato de chumbo (CH3COO)2Pb; Procedimento experimental: Curva de titulação e calculo de pI da Tirosina: Figura 2: Tirosina Calculo de pI. pI = PK1+ PK2 / 2 pI = 2,20+9,11/2pI=5,655 Se no lugar da Tirosina tivesse sido empregada a Glicina, os mesmo resultados seriam observados? Por que? Não. Pois cada aminoácido possui seu ponto isoelétrico especifico e a molécula de glicina é diferente da Tirosina, não apresentando a mesma quantidade dos elementos e o anel aromático. Figura 3: Glicina Reação de Sakaguchi: o procedimento foi realizado como demonstra a tabela abaixo. Tubos Amostras Volume mL NaOH 2,5 α- Naftol NaClO 0,5% 1 Água 1,0 3gts 3gts 1,0 mL 2 Arginina 1,0 3gts 3gts 1,0 mL 3 Triptofano 1,0 3gts 3gts 1,0 mL 4 Solução protéica 1,0 3gts 3gts 1,0 mL Reação Xantoprotéica: o procedimento foi realizado como demonstra a tabela abaixo. Tubos Amostras Volume HNO3 1 Água 2,0 mL 1,0 mL 2 Triptofano 2,0 mL 1,0 mL 3 Solução protéica 2,0 mL 1,0 mL Reação para aminoácidos contendo enxofre: o procedimento foi realizado como demonstra a tabela abaixo. Tubos Amostras Volume NaOH 2 N 100°C (CH3COO)2Pb 1 Água 2mL 1,0 mL 10min 0,5mL 2 Solução protéica 2mL 1,0 mL 10min 0,5mL Resultados e Discussão Na reação de Sakaguchi os tubos de ensaio 2 e 4 contendo respectivamente arginina e a solução protéica apresentaram coloração avermelhada, sendo assim positivo para presença do grupo guanidina (figura 1). Este grupo desenvolve em meio alcalino um complexo de α- Naftol que em presença de NaClO passa a avermelhado como mostra a imagem a seguir. Figura 4: Reação de Sakaguchi. Figura 5: molécula de arginina com grupo guanidina em destaque. Reação Xantoprotéica: esta reação é especifica para aminoácidos que apresentam anel aromático. Estes em presença de HNO3 desenvolve um precipitado branco e o desenvolvimento da cor amarelada ocorre pela formação de nitrocompostos Campo Grande, 19 de setembro de 2013. 3 (anel aromático +NO2). Dentre os vinte aminoácidos, os que apresentam anéis aromáticos são: Triptofano, Fenilalanina e Tirosina. Os resultados alcançados estão apresentados na imagem. Figura 6: reação xantoprotéica. Reação para aminoácidos contendo enxofre: o aminoácido contendo enxofre e hidróxido de sódio reagem irreversivelmente formando com o sulfeto de sódio e uma molécula de aminoácido sem enxofre, este sulfeto de sódio mais o acetato de chumbo formam o sulfeto de chumbo e acetato de sódio. O acetato de chumbo é quem da à coloração ao procedimento como mostra a imagem a seguir. Dentre os aminoácidos que apresentam enxofre (S) estão: Cisteina e Metionina. Figura 7: reação especifica para aminoácidos contendo enxofre. Conclusão Por meio desta pratica, pode ser realizados procedimentos de identificação de aminoácidos em geral e específicos. Possibilitando ao aluno a familiarização com técnicas utilizados nos mais variados tipo de pesquisas clinica. Agradecimentos A Faculdade Estácio de Sá. Referências Sites (pesquisa Google) http://pt.wikipedia.org/wiki/Amino%C3%A 1cido, acessado em 19 de setembro de 2013; http://disciplinas.ist.utl.pt/qgeral/biomedica/ aminoacidos.html; acessado em 19 de setembro de 2013; http://www.infoescola.com/bioquimica/ami noacido/; acessado em 19 de setembro de 2013; http://www.brasilescola.com/biologia/amin oacidos.htm; acessado em 19 de setembro de 2013;
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