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MICROBIOAMA O microbioma da pele é um tema atual na pesquisa cosmética e dermatológica. Inúmeros estudos tem sido realizados a fim de investigar a influência de diferentes fatores na composição do microbioma, o que indicam que quanto maior a sua diversidade, melhor para a saúde da pele, ou seja: Um microbioma cutâneo saudável, possui uma população microbiota diversificada e evitando a predominância de uma única espécie é parte integrante da função de barreira da pele e atua como primeira linha de defesa contra infecções Embora não seja conhecido em pormenor, o microbiota da pele: ✓ desempenha um papel importante na formação da imunidade do hospedeiro ✓ estimulando a resposta do hospedeiro para defender os microrganismos patogénicos ✓ A investigação moderna está a explorar novas formas de cuidar da pele, minimizando o impacto no microbioma e mantendo o saudável Muitos produtos cosméticos atuais declaram efeitos positivos ao microbioma, mas algumas preocupações surgiram pelo fato de que ingredientes antimicrobianos poderiam ter um efeito negativo na composição e na diversidade da microbiota e, portanto, é de grande interesse entender o efeito de longo prazo dos conservantes usados em produtos cosméticos sobre o microbioma da pele. CONSERVANTES: Visão Regulatória Parabenos sob discussão 2005 Na França, ASNM, recomendou o uso de Phenoxyethanol até 1% para adultos e 0.4% para crianças0.0006% C ap ac id ad e A n ti o xi d at iv a [% ] SymSave® H Trolox® (reference) SymSave ® H Agente calmante 1212 • Baseado na redução de PGG2 para o álcool correspondente PGH2 • Durante esta reação, o substrato ADHP é convertido na resorufina fluorescente; • Medição da fluorescência • Compostos do ensaio: SymSave® H e Resveratrol (referência) Ensaio COX-2 Resultados → SymSave® H apresenta propriedades calmantes para a pele. Ideal para aplicações cosméticas como pele sensível, cuidados com o bebe... 0% 20% 40% 60% 80% 0.00068% 0.0068% 0.000057% C O X -2 I n h ib it io n 0.0068% of SymSave® H inibe 29% de COX-2 atividade enzimática. IC50 > 0.0068% e IC20 = 0.0023%. SymSave® H Resveratrol SymSave ® H Melhora a proteção de emulsões do tipo O/A 1.0% SymSave® H days CFU/g Qual o desempenho do SymSave® H sozinho? ■E.Coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis 10 100 1.000 10.000 100.000 1.000.000 0 2 7 14 28 SymSave ® H Melhora a proteção em Shampoos 14 0.3% SymSave® H + 0.5% Sodium Benzoate (pH 5) days CFU/g SymSave® H oferece uma proteção completa nos shapoos em combinação com Sodium Benzoate ■E.Coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis Preservado sem MIT / MCIT! 10 100 1.000 10.000 100.000 1.000.000 10.000.000 0 2 7 14 28 SymSave ® H Melhora a proteção de emulsões 15 0.5% SymDiol® 68 + 0.5% SymSave® H CFU/gCFU/g SymDiol® 68T xxxxxxxx ■E.Coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis SymSave® H oferece proteção completa em 7 dias contra bactérias e leveduras em combinação com SymDiol® 68 days days Emulsão A/O 10 100 1.000 10.000 100.000 1.000.000 0 2 7 14 28 Emulsão Cationica 10 100 1.000 10.000 100.000 1.000.000 0 2 7 14 28 ID Card SymSave ® H AFFORDABLE FOR MASS MARKET & properties BROAD SPECTRUM no destabilization of emulsionsProduct Number: 979940 & 672096 & 333184 Appearance: white to beige crystalline powder Recommended Use Level: Up to 1.0% GLOBALLY COMPLIANT MAIN APPLICATIONS with pH between 3 and 9: • SKIN CARE • HAIR CARE • COLOR COSMETICS • SUN CARE INCI: Hydroxyacetophenone NATURE IDENTICAL COMPOUND Suitable Vegan according to Symrise policy Halal & Kosher status available on request SymDiol® 68 INCI: 1,2-Hexanediol, Caprylyl Glycol • Esta mistura multifuncional sinérgica líquida combina a suavidade do 1,2- Hexanediol e a eficácia do caprylyl glycol; • Esta mistura de alkanediol oferece conveniência na formulação e poderosos benefícios sinérgicos. SymDiol® 68 é fácil de manusear e é ideal para processos a frio. • Além de não ter impacto negativo na estética da fórmula por ser incolor e quase inodoro, ele pode até mesmo aumentar a clareza de muitas formulações transparentes. • Dose recomendada: até 1,5%; • Solúvel em água e em ésteres cosméticos Estável e eficaz num amplo intervalo de pH (3 a 12) e de temperatura Compatível com os ingredientes cosméticos mais utilizados 1,2-Hexanediol + Caprylyl Glycol PRODUCT PROTECTION ENHANCER RESPEITA O MICROBIOMA DA PELE HIDRATANTE ESTABILIZADOR DE EMULSÕES SymDiol® 68 Hidratação Objetivo: Avaliar as propriedade de hidratação do SymDiol® 68 Medições: Hidratação da pele (Corneometer®) e perda de água trans-epidérmica (Tewameter®) em t = 15 min, 30 min, 2 h, 4 h Studo: › Formula com 0.5% SymDiol® 68 vs 3% Glycerin › 5 voluntáros › Aplicação no antebraço do voluntário em T0 Estudo In Vivo : Protocolo PHASE INGREDIENTS INCI % % A Glucate SS Methyl Glucose Sesquistearate 1.00 1.00 Glucamate SSE-20 PEG 20 Methyl Glucose Sesquistearate 1.20 1.20 OHlan Hydroxylated Lanolin 2.50 2.50 Cetyl Alcohol Cetyl Alcohol 2.00 2.00 Mineral oil Mineral oil 7.00 7.00 Stearic Acid Stearic Acid 1.00 1.00 B Water Water (Aqua) q.s.p. 100 q.s.p. 100 Glycerin Glycerin 3.00 - C SymDiol® 68 1,2-Hexanediol, Caprylyl Glycol - 0.50 Fragrance - 0.3 0.3 0.5% SymDiol® 68 3% Glycerin Hidratação (Corneometry) TEWL (Tewameter) Formulação com 0.5% SymDiol® 68 proporciona uma boa hidratação em comparação com a glicerina a 3% M ea n c o rn eo m et er re ad in g (A U ) SymDiol® 68 Estabilização de emulsões Objetivo: Avaliar o efeito do SymDiol® 68 no tamanho das gotículas da emulsão e na estabilidade da emulsão Medições: Medições do tamanho das partículas por difração laser (Malvern Mastersizer MAF 500) e microscopia e Lumisizer (fotocentrífuga analítica) após 1 mês de armazenamento a 40 oC Studo: › Emulsão O/A(Emulsiphos® /Dracorin® CE) › 0.5% SymSave® H / 0.5% SymDiol® 68 vs Placebo › Medições do tamanho das partículas por difração laser › Medição da estabilidade da emulsão por fotocentrifugação analítica após 1 mês de armazenamento a 40oC In Vitro Study: Protocol Ingredient INCI A B Emulsiphos Potassium Cetyl Phosphate, Hydrogenated Palm Glycerides 0.75 0.75 Dracorin® CE Glyceryl Stearate Citrate 1.0 1.0 Lanette O Cetearyl Alcohol 0.5 0.5 SymMollient S Cetearyl Nonanoate 1.0 1.0 Caprylic/ Capric Triglyceride Caprylic/ Capric Triglyceride 8.0 8.0 Dragoxat® 89 Ethylhexyl Isononanoate 5.0 5.0 Isodragol Triisononanoin 3.0 3.0 Carbopol® ETD 2020 Polymer Acrylates/ C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer 0.1 0.1 Keltrol CG-T Xanthan Gum 0.1 0.1 Water, demin. Water (Aqua) q.s.p. 100 q.s.p. 100 Glycerin Glycerin 4.0 4.0 SymDiol® 68 1,2 Hexanediol, Caprylyl Glycol - 0.5 SymSave® H Hydroxyacetophenone - 0.5 NaOH 10% Solution Water (Aqua), Sodium Hydroxide 0.2 0.2 SymDiol® 68 Estabilização de emulsões 21 Placebo 0.5% SymDiol® 68 0.5% SymSave® H D(v.0.1) D(v.0.1) D(v.0.5) D(v.0.5) D(v.0.9) D(v.0.9) Distribuição volumétrica do tamanho das partículas D (v. 0,5) = 50%das partículas são mais pequenas do que o valor indicado em µm Placebo: phase separation Lumisizer após 1 mês armazenado a 40°C A redução do tamanho das partículas leva à estabilização da emulsão SymDiol® 68 Concentrações inibitórias mínimas (MIC) 1,2-Alkanediol E. Coli P. Aeruginosa S. Aureus C. Albicans A. brasiliensis SymDiol® 68 (1,2-Hexanediol + 1,2-Octanediol) 0.31 0.63 0.31 0.16 0.08 1,2-Hexanediol 1.25 0.63 2.5 1.25 0.63 1,2-Octanediol (Caprylyl Glycol) 0.63 0.63 1.25 0.31 0.16 Sinergismo de MICs (expresso em %): sinergismo geral A concentração mais baixa de um agente antimicrobiano que inibe o crescimento de um microrganismo SymDiol® 68 Aumenta a proteção do produto em emulsões aniônicas O/A SymDiol® 68 oferece uma proteção completa quando combinado com doses baixas de ácidos orgânicos em emulsões aniônicas O/A days days CFU/g CFU/g ■E.coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis 0.4% SymDiol® 68 + 0.2% Potassium Sorbate pHbeen incubated with DCFH-DA [detection system, 2’,7’-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA) is oxidized by ROS intracellularly and forms Dichlorofluorescein (DCF), which is fluorescent] Objective: Evaluate whether Hydrolite® 5 green enhances the efficacy of active ingredients Measurements: Intracellular antioxidant properties by fluorescence in the papillary dermis* Study: • Topical application (skin explant) of the emulsion with 1% or 2% Hydrolite® 5 green, with or without 0.5% Dragosine® (antioxidant agent, INCI: Carnosine) • UVA irradiation, generating oxidative stress (40J/cm² during 2h30) Ex Vivo Study: Protocol Water (Aqua) 84.25 Hydrolite® 5 green (Pentylene glycol) 2.0 Carnosine 0.5 Cetearyl Octanoate 3.0 Cetearyl Alcohol 2.0 Mineral Oil 3.0 Octyldodecanol 4.0 Dimethicone 0.5 Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer 0.2 Acrylates/C10-30 Alkyl Acrylate Crosspolymer 0.05 Sodium Hydroxide - Citric Acid 0.5 Hydrolite ® 5 green Contra o estress oxidativo 29 Hydrolite® 5 green potencializa a atividade do Dragosine® (INCI: Carnosine), um antioxidante hidrofílico, aumentando a biodisponibilidade da Carnosina. 0 2 4 6 8 10 R O S sc o re -51%-34% -8% Untreated skin Untreated skin + UVA UVA + 2% Hydrolite® 5 green UVA + 0.5% Carnosine UVA + 0.5% Carnosine + 1% Hydrolite® 5 green UVA + 0.5% Carnosine + 2% Hydrolite® 5 green **n.s. ** p4 20 6 10 20 1.6 NA NA 10 NA 20 20 Hydrolite ® 5 green Proteção de Gel Aquoso Hydrolite® 5 green combinado com SymSave® H proporciona proteção de Gel Aquoso 0.5% Hydrolite® 5 green + 0.5% SymSave® H em Gel Aquoso days 10 100 1.000 10.000 100.000 1.000.000 10.000.000 0 2 7 14 28 ■E.Coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis Hydrolite ® 5 green Emulsão SPF 50+ Hydrolite® 5 green protege mesmo em condições hostis! 0.5% Hydrolite® 5 green + 0.25% Hydrolite® CG + 0.5% SymSave® H em emulsão SPF50+ 0.75% Hydrolite® 5 green + 0.25% Hydrolite® CG + 0.5% SymSave® H em emulsão SPF50+ 10 100 1000 10000 100000 1000000 10000000 0 2 7 14 28 days 10 100 1000 10000 100000 1000000 10000000 0 2 7 14 28 days ■E.Coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis Hydrolite ® 5 green Suitable Vegan according to Symrise policy Halal & Kosher status available on request IUPAC Name: 1,2-pentanediol Product Number: 996442 Appearance: Colorless liquid, nearly odorless Recommended Use Level: Up to 5.0% GLOBALLY COMPLIANT MAIN APPLICATIONS with pH between 3 and 12: • SKIN CARE • HAIR CARE • COLOR COSMETICS • SUN CARE • ORAL CARE 100% BIO-BASED CARBON INCI: Pentylene Glycol MOISTURIZES enhances product protection> 99% PURITY 1 NATURALNESS INDEX ISO 16128-2 READILY BIODEGRADABLE (NATURE DERIVED INGREDIENT FROM BAGASSE OF SUGAR CANE) 24% hair combability improvement RESPECTS THE SKIN MICROBIOME NATRUE Approved ID Card • Dosagem recomendada: até 1,0% • Solúvel em água, etanol, glicóis e ésteres cosméticos. • Estável e eficaz numa vasta gama de pH (3-12) e de temperaturas Compatível com ingredientes cosméticos normalmente utilizados CO- EMULSIONANTE MODIFICADOR DE VISCOSIDADE ESTABILIZADOR DE EMULSÕES BOOSTER DE PRESERVAÇÃO SOLUBILIZADOR DE FILTRO UV REDUTOR DE MAU ODOR ANTIOXIDANTE MODULADOR DE SEBO SEM IMPACTO NO MICROBIOMA Hydrolite ® 7 green INCI: 1,2-Heptanediol • A Symrise aproveita mais uma vez sua experiência em 1,2-alkenediols, oferecendo uma molécula única: Hydrolite® 7 green. O único 1,2- alkanediol de 7 carbonos do mercado que possui uma cadeia de comprimento ideal capaz de oferecer uma combinação de desempenho, solubilidade em água, benefícios exclusivos além de ser fácil de utilização. Este líquido transparente multifuncional está destinado a resolver os desafios dos formuladores e a satisfazer os desejos dos consumidores. • Em combinação com conservantes tradicionais, oferece uma proteção completa a níveis de utilização baixos; • COSMOS e NaTrue. 100% verde e proveniente da planta da mamona, adapta-se a todas as fórmulas clássicas e naturais! Hydrolite ® 7 green Redução de Mau Odor Estudo Sensorial Objetivo: Avaliar a propriedade de redução do mau cheiro do Hydrolite® 7 green Medições: Teste sensorial com um painel treinado (n=10) Estudo: : › Mau odordo suor aplicado num papel de filtro com ou sem Hydrolite® 7 green e testado quanto ao odor 6 horas depois. › Escala de classificação de 0 to 10 (0: inodoro; 10: odor mais forte) ESCALA DE CLASSIFICAÇÃO: Hydrolite® 7 green reduz o odor da transpiração INICIO APÓS 6 H Placebo 5.7 5.5 Hydrolite® 7 green 5.7 4.8 Hydrolite ® 7 green Seborregulador ** Positive control Hydrolite® 7 green apresenta um excelente desempenho na redução do sebo. 6.6ppm Hydrolite® 7 green reduz a produção de sebo em 22%! *p0.50 Hydrolite® 7 green oferece proteção contra os organismos mais comuns de preocupação ■E.Coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis days CFU/g 0.5% Hydrolite® 7 green + 4.1% Hydrolite® 5 green + 0.5% Sodium Benzoate em sérum Hydrolite® 7 green oferece uma proteção completa em combinações em sistemas aquosos pH 5.2 days CFU/g 0.5% Hydrolite® 7 green + 0.5% SymSave® H em gel aquoso pH 5.5 Hydrolite ® 7 green Hydrolite ® 7 green ■E.Coli ■P.aeruginosa ■S.aureus ■C.albicans ■A.brasiliensis days CFU/g 0.5% Hydrolite® 7 green + 0.2% Potassium Sorbate Hydrolite® 7 green green oferece uma proteção completa em combinações de potassium sorbate ou sodium benzoate em shampoo pH 5.0 days CFU/g pH 5.4 0.3% Hydrolite® 7 green + 0.5% Sodium Benzoate Hydrolite ® 7 green ID Card Vegan suitable according to Symrise policy Halal & Kosher status available on request * For China compliance, please ask your Symrise representative Product Number: 497010 Appearance: colorless clear liquid with low odor Recommended Use Level: Up to 1.0% / typical 0.5% 100% GREEN 1 NATURAL ORIGIN INDEX ISO 16128-2 READILY BIODEGRADABLE (NATURE DERIVED INGREDIENT FROM CASTOR OIL) MULTIPLE PATENTS PENDING GLOBAL COMPLIANCE • SKIN CARE • HAIR CARE Solubilizes UV Filters Enhances Product Protection (except China*) Stabilizes Emulsions MAIN APPLICATIONS with pH 3-12: • COLOR COSMETICS • SUN CARE • ORAL CARE INCI: 1,2-Heptanediol 50 Reduces malodor helps MODULATE SEBUM enhances antioxidants RESPECTS THE SKIN MICROBIOME NATRUE Approved Análises do Microbioma Objective: Evaluate the effect of Hydrolite® 5 green, Hydrolite® CG, and Hydrolite® 7 green in combination with SymSave® H on skin microbiome Measurements: 16S rRNA gene sequencing and bioinformatics analysis Study: • Performed at ProDerm, Germany • O/W emulsion (Dracorin® CE) with different treatments - daily application of the emulsion • 4 weeks of product application • Swabs from untreated (t0) and treated (t28) subjects, 22 study subjects with healthy skin enrolled for each product group (male and female participants), lower legs • 16S rDNA gene sequencing performed at BaseClear, Germany 4 x 4 cm areas TESTED FORMULATIONS Untreated (A) 2.0% Hydrolite® 5 green + 0.5% SymSave® H (B) 0.5% Hydrolite® CG + 0.5% SymSave® H (C) 1.0% Hydrolite® 7 green + 0.5% SymSave® H (D) In Vivo Study: Protocol Hydrolite ® 5 green; Hydrolite ® CG; Hydrolite ® 7 Green SymSave H ® Análise do Microbioma PHASE INGREDIENTS INCI % % % A Dracorin® CE Glyceryl Stearate Citrate 2.00 2.00 2.00 Lanette O Cetearyl Alcohol 2.00 2.00 2.00 PCL-Liquid® 100 Cetearyl Ethylhexanoate 2.50 2.50 2.50 Dragoxat® 89 Ethylhexyl Isononanoate 2.202.20 2.20 B Carbopol® ETD 2020 Polymer Acrylates/c10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0.20 0.20 0.20 Keltrol CG-T Xanthan gum 0.20 0.20 0.20 C Water, demin. Water (Aqua) 88.2 89.8 89.3 SymSave® H Hydroxyacetophenone 0.50 0.50 0.50 Hydrolite® 5 green Pentylene Glycol 2.00 - - Hydrolite® 7 green 1,2-Heptanediol - - 1.00 Hydrolite® CG Caprylyl Glycol - 0.50 - D NaOH 10% Solution Water (Aqua), Sodium Hydroxide 0.25 0.10 0.10 Hydrolite ® 5 green; Hydrolite ® CG; Hydrolite ® 7 Green SymSave H ® Fórmulas de estudo In Vivo Hydrolite ® 5 green; SymSave® H 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 untreated 2% Hydrolite 5 green + 0.5% SymSave H 0.5% Hydrolite CG + 0.5% SymSave H 1% Hydrolite 7 green + 0.5% SymSave H A B C D R e la ti ve a b u n d an ce [ % ] As formulações que contêm a combinação de Hydrolite® 5 green and SymSave® H não tem impacto no microbioma da pele 2% Hydrolite® 5 green + 0.5% SymSave ® H 0.5% Hydrolite® CG + 0.5% SymSave ® H 1% Hydrolite® 7 green + 0.5% SymSave ® H Após 4 semanas de aplicação, não foram observadas qualquer alteração na diversidade dos residentes naturais da pele. Hydrolite® 5 green e SymSave® H, em concentrações eficazes para a proteção do produto, manteve o microbioma de uma pele saudável. Hydrolite ® 7 green; SymSave® H Após 4 semanas de aplicação, não foram observadas qualquer alteração na diversidade dos residentes naturais da pele. Hydrolite® 7 green and SymSave® H, em concentrações eficazes para a proteção do produto, manteve o microbioma de uma pele saudável. As formulações que contêm a combinação de Hydrolite® 7 green e SymSave® H não tem impacto no microbioma da pele. 2% Hydrolite® 5 green + 0.5% SymSave ® H 0.5% Hydrolite® CG + 0.5% SymSave ® H 1% Hydrolite® 7 green + 0.5% SymSave ® H Hydrolite ® CG; SymSave® H As formulações que contêm a combinação de Hydrolite® CG and SymSave® H não tem impacto no microbioma da pele. Após 4 semanas de aplicação, não foram observadas qualquer alteração na diversidade dos residentes naturais da pele. Hydrolite® CG and SymSave® H, em concentrações eficazes para a proteção do produto, manteve o microbioma de uma pele saudável. . Muitos produtos cosméticos atuais declaram efeitos positivos ao microbioma. Preocupações surgiram pelo fato de que ingredientes antimicrobianos poderiam ter um efeito negativo na composição e na diversidade da microbiota e, portanto, é de grande interesse entender o efeito de longo prazo dos conservantes usados em produtos cosméticos sobre o microbioma da pele. In Vivo Study: Protocol PHASE INGREDIENTS INCI % % A Dracorin® CE Glyceryl Stearate Citrate 2.00 2.00 Lanette O Cetearyl Alcohol 2.00 2.00 PCL-Liquid® 100 Cetearyl Ethylhexanoate 2.50 2.50 Dragoxat® 89 Ethylhexyl Isononanoate 2.20 2.20 B Carbopol® ETD 2020 Polymer Acrylates/c10-30 alkyl acrylate crosspolymer 0.20 0.20 Keltrol CG-T Xanthan gum 0.20 0.20 C Water, demin. Water (Aqua) q.s.p. 100 q.s.p. 100 SymSave® H Hydroxyacetophenone 0.50 0.50 Hydrolite® 6 1,2 Hexanediol - 1 Hydrolite® CG Caprylyl Glycol 0.50 - D NaOH 10% Solution Water (Aqua), Sodium Hydroxide 0.10 0.25 Hydrolite ® 6 green; Hydrolite ® CG; SymDiol ® 68 SymSave H ® Hydrolite ® 6 green; Hydrolite ® CG; SymDiol ® 68 SymSave H ® Após 4 semanas de aplicação, não foram observadas qualquer alteração na diversidade dos residentes naturais da pele. Hydrolite® 6 e Hydrolite® CG, em combinação com SymSave® H, em concentrações eficazes para a proteção do protudo, mantêm o microbioma de uma pele saudável. As formulações que contémuma combinação de Hydrolite® 6 ou Hydrolite® CG com SymSave® H não tem impacto no microbioma da pele. untreated 0.5% Hydrolite® CG + 0.5% SymSave® H CONTATOS www.lookquimica.com.br /company/look-química /lookquimica Leticia Barbosa P&D | Pesquisadora leticia.Barbosa@lookchemicals.com.br + 55 11 94238 7019 Bruna Bisaio P&D | Pesquisadora Jr. bruna.bisaio@lookchemicals.com.br Fontes e Créditos: Symrise. All rights reserved Slide 1 Slide 2 Slide 3 Slide 4 Slide 5 Slide 6 Slide 7 Slide 8 Slide 9 Slide 10 Slide 11 Slide 12 Slide 13 Slide 14 Slide 15 Slide 16 Slide 17 Slide 18 Slide 19 Slide 20 Slide 21 Slide 22 Slide 23 Slide 24 Slide 25 Slide 26 Slide 27 Slide 28 Slide 29 Slide 30 Slide 31 Slide 32 Slide 33 Slide 34 Slide 35 Slide 36 Slide 37 Slide 38 Slide 39 Slide 40 Slide 41 Slide 42 Slide 43 Slide 44 Slide 45 Slide 46 Slide 47 Slide 48 Slide 49 Slide 50 Slide 51 Slide 52 Slide 53 Slide 54 Slide 55 Slide 56 Slide 57 Slide 58 Slide 59