103 CONTAGEM PADRÃO DE MICROORGANISMOS

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FACULDADE MAURÍCIO DE NASSSAU 
CURSO DE NUTRIÇÃO 
Microbiologia dos Alimentos 
 
Profª. Helena Taina Diniz Silva 
Monitores: Rayannye Wagner 
 
ROTEIRO DE AULA PRÁTICA 
AULA 3: CONTAGEM PADRÃO DE MICRORGANISMOS 
 
1 Descrição geral 
 
A contagem total de microrganismos é o método mais utilizado como indicador geral de populações 
bacterianas em alimentos, sendo utilizada para se obter informações gerais sobre a qualidade do produto, 
qualidade das matérias-primas, condições de processamento, manipulação e vida de prateleira. Sua 
presença em grande número indica: matérias-primas excessivamente contaminadas; limpeza e 
desinfecção de superfícies inadequadas; higiene inadequada na produção; condições inadequadas de 
tempo/temperatura durante a produção ou a conservação dos alimentos, ou uma combinação destas 
circunstâncias. A contagem pode ser feita utilizando-se as técnicas de plaqueamento em profundidade 
(pourplate), com exceção da contagem de bolores e leveduras, superfície (spread plate) e esgotamento. 
 
2 Materiais necessários (por grupo) 
Acessórios 
 Pêra (1) 
 Espátula (1) 
 Pinça (1) 
 Suporte para os tubos (1) 
 Bico de Bunsen (1) 
 Alça bacteriológica (1) 
 Caneta para CD (1) 
 
Vidraria 
 Pipetas graduadas (1 mL) estéreis (3) 
 Erlenmeyer com 90 mL de diluente (água peptonada) (1) 
 Tubos com 9 ml de diluente (água peptonada) (3) 
 Placas de Petri (3 de cada meio) 
 
Meios de cultura 
 Água peptonada 
 Agar Mueller Hinton (bactérias aeróbias mesófilas) 
 Agar Potato Dextrose (bolores e leveduras) 
 Ágar cristal violeta vermelho neutro bile (VRBA) (enterobactérias) 
 
Equipamentos 
 Autoclave 
 Estufa de esterilização e secagem (180 ºC) 
 Balança Semi-analítica 
 Estufa bacteriológica 
 
3 Procedimento 
1º passo: Deve-se higienizar a bancada e dispor o material; 
2º passo: Codificar as placas e os frascos de diluição; 
 
3.1 Obtenção das diluições seriadas (ou decimais) 
 
1º passo: Pesar a amostra (10 g) no erlenmeyer contendo o diluente esterilizado e homogeneizar por 2-3 
minutos, no caso de amostras sólidas. Essa suspensão corresponde à diluição 10-1; 
2º passo: Com auxílio de uma pipeta e uma pera, transferir 1 mL para um frasco contendo 9 mL de 
diluente, obtendo-se a diluição 10-2; 
3º passo: Repetir o mesmo procedimento para obter a diluição 10-3. 
Amostra sólida 
 
 
 10-11 ml 10-21 ml 10-31 ml 10-4... 
10 g de amostra + 
90 mL diluente 9 ml 9 ml 9 ml 
Amostra líquida 
 
 1001 ml 10-11 ml 10-21 ml 10-3... 
≈ 100 mL de amostra 
9 ml 9 ml 9 ml 
3.2 Plaqueamento 
1º passo: De cada diluição preparada e homogeneizada, transferir 1 mL ou 0,1 mL (pipeta) ou 0,01 mL 
(alça bacteriológica) para as placas de Petri; 
2º passo: No caso da técnica por profundidade, verter em cada placa 15-20 mL do meio de cultura 
esterilizado e esfriado a aproximadamente 50 ºC e homogeneizar com movimentos em forma de oito ou 
circular; 
3º passo: Deixar as placas em repouso sobre a bancada até a completa absorção do inóculo ou 
solidificação do meio; 
4º passo: Juntar as placas em sentido invertido e incubar as placas de bactérias mesófilas e 
enterobactérias a 35±2°C por 24-48 horas e de bolores e leveduras a 25±2°C por 3-5 dias (as placas de 
bolores não podem ser invertidas). 
5º passo: Após o período de incubação, realizar a contagem das colônias. 
4 Leitura 
Selecionar uma placa com 15 a 150 colônias e contar as colônias com o auxílio de uma caneta de CD em 
um contador de colônias. Caso tenham sido utilizadas duas placas por diluição (duplicata) considerar 
como número de colônias a média aritmética da contagem obtida em cada uma das placas da duplicata. 
5 Resultado 
Usar notação exponencial e apenas uma casa decimal depois da vírgula na apresentação dos resultados. 
Para calcular o número de UFC/g ou ml, multiplicar o número de colônias pelo fator e pelo inverso da 
diluição. Para a interpretação dos resultados deve-se pesquisar nas normas existentes para o alimento 
avaliado quanto aos valores de referência. 
Resultado (UFC/g ou mL) = nº de colônias x F x diluição (inverso) 
 
F = 10 (se for inoculado 0,1 mL) 
F = 100 (se for inoculado 0,01 mL) 
 
 
 
Referências 
SILVA, N.; JUNQUEIRA, V. C. A.; SILVEIRA, N. E. A. Manual de métodos de análises microbiológicas 
de alimentos. São Paulo: Varela, 2007. 552p.