RESOLUÇÃO DAS QUESTOES DAS PRÁTICAS

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PRÁTICA 1
4. EXERCÍCIO DE FIXAÇÃO
4.1. Qual o princípio da técnica do NMP?
É um método de análise quantitativo que permite determinar o NMP do (s) micro-organismo (s) alvo na amostra, através da inoculação de alíquotas dessa amostra em uma série de tubos, contendo um meio de cultura líquido (caldo) adequado ao seu crescimento.
4.2. Cite 2 vantagens da técnica do NMP em relação à contagem padrão em placas?
· a possibilidade de inocular quantidades maiores da amostra, aumentando-se proporcionalmente o volume de meio de cultura.
Isso confere a técnica uma sensibilidade maior do que a da contagem em placas e uma grande flexibilidade no estabelecimento do limite de detecção.
· permite a introdução de etapas de recuperação de injúrias, utilizando um meio não seletivo para a inoculação inicial, mais favorável aos micro-organismos injuriados, e depois transferindo a cultura para meios seletivos.
4.3. Cite 2 condições para uso da técnica em outros ensaios quantitativos?
quando a contaminação esperada na amostra está abaixo do limite de detecção do plaqueamento ou quando partículas do alimento interferem na contagem em placas.
4.4. Quais os 2 formatos que podem ser adotados na etapa de inoculação?
· Um é o formato do teste de diluição múltipla, no qual três cinco ou dez alíquotas de uma diluição são inoculadas numa série de três, cinco ou dez tubos e, depois, uma nova série de três, cinco ou dez alíquotas, da diluição subsequente, são inoculadas em outra série de tubos e assim por diante. Quanto maior o número de diluições e de tubos por diluição, maior a precisão da contagem. Para a maioria das situações encontradas na análise de alimentos, três diluições com três tubos por diluição são suficientes para uma boa estimativa do NMP.
· O outro formato é o do teste de diluição única, no qual todas as alíquotas inoculadas (geralmente cinco a dez) são de uma mesma diluição, com igual quantidade de amostra. Uma de suas principais aplicações são a contagem de coliformes em água tratada, sucos e refrigerantes.
4.5. Qual formato você recomendaria para análise de uma amostra com histórico de baixo nível de contaminação?
O teste de diluição única, pois nesses casos não há necessidade e nem se justifica a preparação de diluições. 
4.6. Qual procedimento deve ser adotado para melhorar a precisão da contagem pela técnica do NMP?
Aumentando o número de diluições e de tubos por diluição
4.7. Qual a função do tubo de Durham na técnica do NMP?
A função de identificar o crescimento (positivo) de coliformes totais, fato que é caracterizado pela ocorrência de produção de gás nos tubos de Durhan.
4.8. A partir dos tubos de Caldo LST positivos, que procedimentos devem ser adotados para a contagem de coliformes totais pela técnica do NMP? O que evidencia essa positividade?
Transfere-se uma alçada bem carregada de cada cultura para tubos de Caldo Verde Brilhante Bile 2% (VBB). Incubar a 35 ± 0,5oC/24±2h.
A positividade é caracterizada pelo crescimento com produção de gás.
4.9. Por que a inoculação para coliformes totais não é feita diretamente em Caldo VBB?
FALTA
4.10. Quais características indicam a presença do (s) microrganismo (s) alvo nos tubos?
Crescimento com produção de gás.
PRÁTICA 2
4. EXERCÍCIO DE FIXAÇÃO
4.1. Como pode ser classificado o meio de cultura Caldo LST em função da composição, da consistência, da forma de preparação e da função?
QUIMICAMENTE DEFINIDA,
LÍQUIDA,
DESIDRATADO
ENRIQUECIMENTO SELETIVO.
 
4.2. Por que na análise de suco de fruta usamos a técnica do NMP, teste de diluição única?
Pelo fato do teste de diluição única,ser indicado para a análise de amostras com baixos níveis de contaminação e, nesses casos não há necessidade e nem se justifica a preparação de diluições
4.3. Com relação ao teste de diluição única, qual o procedimento padrão utilizado na inoculação da amostra de suco?
O procedimento padrão é a inoculação de cinco ou dez alíquotas de 10 mL das amostras líquidas em 10 mL do caldo de cultura em concentração dupla (50 a 100 mL no total), ou cinco ou dez alíquotas de 10 mL da primeira diluição das amostras sólidas, em 10 mL do caldo em concentração dupla (5 a 10 g no total).
Ex.: Depois da retirada de 5 alíquotas de 10 ml da amostra a inoculação é feita em uma. série de 5 tubos contendo 10 mL de Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) em concentração dupla
4.4. Diferencie o teste de diluição múltipla do teste de diluição única?
· No teste de diluição múltipla, três cinco ou dez alíquotas de uma diluição são inoculadas numa série de três, cinco ou dez tubos e, depois, uma nova série de três, cinco ou dez alíquotas, da diluição subsequente, são inoculadas em outra série de tubos e assim por diante. Quanto maior o número de diluições e de tubos por diluição, maior a precisão da contagem. Para a maioria das situações encontradas na análise de alimentos, três diluições com três tubos por diluição são suficientes para uma boa estimativa do NMP.
· No teste de diluição única, todas as alíquotas inoculadas (geralmente cinco a dez) são de uma mesma diluição, com igual quantidade de amostra. Uma de suas principais aplicações são a contagem de coliformes em água tratada, sucos e refrigerantes.
4.5. A inoculação de alíquotas só pode ser em quantidades múltiplas de dez? Justifique a sua resposta.
A inoculação de cinco ou dez alíquotas com quantidades múltiplas de dez apresentam a vantagem de ter os resultados tabelados em Tabela de NMP. Pode, entretanto, ser inoculado qualquer número de alíquotas, de qualquer quantidade, desde que todas sejam iguais e que a diluição seja de uma parte da amostra adicionada em dez partes de caldo.
PRÁTICA 3
4.1. Por que quantificar fungos em alimentos?
Devido alguns fungos produzirem toxinas , deve-se utilizar métodos de extração de toxinas entre eles a quantificação.
4.2. Diferencie os métodos tradicionais dos métodos rápidos.
4.3. Por que na contagem de bolores e leveduras utilizando a tecnologia PetrifilmTM, se faz necessário a leitura das placas com 3 dias?
pois, pequenas colônias podem ser ocultadas pelos bolores maiores crescidos em 5 dias. 	
4.4. Qual a área inoculada e a faixa de contagem das placas PetrifilmTM para a contagem de bolores e leveduras?
A área inoculada é de 30 cm2 e a faixa de contagem entre 15 - 150 colônias.
4.5. Quais as características das colônias de leveduras e bolores na contagem de bolores e leveduras pela tecnologia Petrifilm?
	Bolores – colônias GRANDES; colônias que possuem bordos definidos; cor marrom-rosada ou verde azulada; as colônias parecem elevadas (“3D”); as colônias possuem uma cor uniforme. 
Leveduras – colônias pequenas; colônias que possuem bordos difusos; cor variável; as colônias parecem planas; as colônias possuem centro escuro.
4.6. Após a realização da contagem de bolores e leveduras obtivemos o seguinte panorama:
10-1: Placa 1: 200 UFC/ g; Placa 2: 200 UFC/ g;
10-2: Placa 1: 100 UFC/g; Placa 2: 100 UFC/ g;
10-3: Placa 1: 10 UFC/ g; Placa 2: 10 UFC/ g.
Qual diluição seria selecionada para contagem? Por quê? Expresse o resultado dessa análise.
10-2: Placa 1: 100 UFC/g; Placa 2: 100 UFC/ g;
Porque a faixa de contagem está entre 15 e 150 UFC.
4.7. Cite 2 diferenças entre os métodos de contagem de bolores e leveduras pela técnica PetrifilmTR e Spread Plate.
Uma é TRADICIONAL e a outra é RÁPIDO
PRÁTICA 4
4.1. Conceitue leveduras osmofílicas e bolores xerofílicos.
São capazes de se multiplicar em produtos com atividade de água em torno de 0,62.
É de importância em alimentos conservados pelo uso de açúcar, do sal e desidratados.
4.2. Por que os bolores estão frequentemente associados à deterioração de vegetais “in natura”?
Em decorrência da atividade pectinolítica e celulolítica de muitas espécies de bolores.
4.3. Qual a função da solução de ácido tartário 10% na preparação do Ágar Batata Dextrose? Qual a proporção de uso?
Tornar o pH favorável para bolores e leveduras já que possuem a característica de se multiplicar em uma ampla faixa de pH de 2 a 8,5 tornando o grupo importante para produtos ácidos.
Aproporção é de 10g de ácido tartário e completar com água.
4.4. Qual a função da alça de Drigalski no método do plaqueamento em superfície?
	Espalhar o inoculo por toda a superfície do meio, até que o excesso de líquido seja absorvido.
4.7. Qual a recomendação para uso do PDA-AC na contagem de bolores e leveduras?
É recomendado para produtos não submetidos a tratamentos que possam provocar injúrias às células.
4.8. Qual meio é recomendado para uso nas análises de amostras com predomínio de leveduras ou com leveduras injuriadas?
	Agar extrato de leveduras glicose cloranfenicol (YEGC).
4.9. Que fator intrínseco condiciona o uso do meio de cultura DRBC ou DG18 na contagem de bolores e leveduras?
Vários meios podem ser utilizados: o Agar Dicloran Rosa de Bengala Cloranfenicol (DRBD), para alimentos com atividade de água > 0,95 e o Agar Dicloran Glicerol 18 (DG18), para alimentos de atividade de água ≤ 0,95.
PRÁTICA 05 - CONTAGEM DE COLIFORMES TOTAIS e E. coli - PetrifilmTM
1.Qual a função do substrato cromogênio nas placas PetrifilmTM para contagem 
de coliformes totais e E. coli?
O substrato cromogênio permite diferenciar E.Coli por meio da formação de um precipitado azul em torno das colônias, indicando a presença de coliforme fecal, se vermelha indica a presença de coliforme total.
2. Qual o meio de cultura base das placas PetrifilmTM para contagem de coliformes totais e E. coli?
O meio de cultura base é o vermelho violeta bile (VRB)
3. Quais as características das colônias de coliformes totais nas placas PetrifilmTM de contagem de coliformes totais e E. coli?
As colônias produzem bolhas de gas ao seu redor, sendo produzida da fermentação da lactose, esta contida no meio de cultura VRB. Tambem bem apresentam coloração vermelha, um função da redução do indicado cloreto de trifeniltretazolim (TTC).
4. Quais as características das colônias de E. coli nas placas PetrifilmTM de contagem de coliformes totais e E. coli?
Já as colônias de E.Coli a formação de um precipitado azul em torno das colônias. 
5. Qual a função do difusor nas placas PetrifilmTM de contagem de coliformes totais e E. coli?
A função é homogeneizar o inóculo.
6. Qual a função do cloreto de trifeniltetrazolium (TTC) nas placas de contagem de coliformes totais e E. coli?
É um indicador facilitando a visualização das colônias selecionadas, conferindo coloração vermelhas a elas. 
PRÁTICA 6 - CONTAGEM PADRAO EM PLACAS (Pour plate)
4.1. Qual a correlação entre a carga microbiana presente no leite cru e a carga microbiana no leite processado?
	
4.2. Esquematize a realização de uma contagem pela técnica de pour plate.
4.3. Qual a principal desvantagem da técnica pour plate?
4.4. Qual o limite de detecção para produtos sólidos da técnica pour plate?
4.5. Qual o limite de detecção para produtos líquidos da técnica pour plate?
4.6. A CPP no RTIQ do leite cru refrigerado, Instrução Normativa no 62/2011 do MAPA, é considerada um indicador de qualidade ou de segurança?
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PRÁTICA 07 - CONTAGEM DE AERÓBIOS PSICROTRÓFICOS EM PLACAS
1. Por que se recomenda a técnica de plaqueamento em superfície para a contagem de aeróbios psicrotróficos?
O plaqueamento por superfície oferece vantagens na determinação do número de psicrotróficos sensíveis ao calor presentes num alimento, uma vez que os micro-organismos não entram em contato com o ágar fundido. Este é o método escolhido quando características coloniais são importantes para a sua identificação presuntiva e também para o plaqueamento em muitos meios seletivos.
2. O que condiciona a escolha do número de diluições necessárias para análise de um determinado alimento?
3. Caso após análise de uma unidade amostral de um determinado alimento, submetido a contagem padrão em placas pela técnica do “spread plate” nas diluições 10-1, 10-2 e 10-3, tenha como resultado “INCONTÁVEL” mesmo na diluição 10-3 e desse tenha sido guardada a contraprova, qual o procedimento pode ser adotado?
é considerada inviável a utilização de leite em que a contagem de psicrotróficos tenha excedido a 5,0 x 106 UFC/mL, pois, nesse caso, é grande a possibilidade da presença de enzimas hidrolíticas extracelulares durante a fase log.
5. Qual a função das diluições seriadas?
é a técnica que permite a contagem do número de microorganismos de amostras com concentrações muito elevadas. A amostra deve então ser diluída seriadamente para que a concentração de microrganismos diminua, dando origem a colônias suficientemente separadas, possibilitando assim a contagem.
6. Qual a relação da contagem de aeróbios mesófilos com a contagem de aeróbios psicrotróficos para a análise de leite?
PRÁTICA 08 - DETERMINAÇAO DE AFLATOXINAS – AFLACHECK
1. Por que quantificar as aflatoxinas em amendoim processado ao invés dos bolores?
As aflatoxinas são um conjunto de disfuranos policíclicos de origem fúngica, produzidas pelas espécies de fungos Aspergillus flavus e Aspergillus niger. O A. flavus é um constituinte comum da microbiota do ar e do solo em todo o mundo. Essa espécie causa a deterioração de produtos como trigo, milho, arroz, cevada, farelo, farinha e soja que estão armazenados, bem como amendoins, sementes de algodão e outros produtos. 
2. Quando aplicar o Aflacheck na análise de alimentos?
3. Qual gênero de bolor é responsável pela produção das aflatoxinas?
Aspergillus
4. Qual o LMT para aflatoxinas em amendoim processados, segundo a legislação brasileira?
Para amendoins com casca ou descascado, cru ou torrado é de 20 ppb.
5. Como identificamos a positividade da amostra no Aflacheck?
Inserir uma tira de prova Aflacheck (com as flechas apontando para baixo) dentro do tubo de diluição Aflacheck e espere a revelação. Deixar a tira de prova Aflacheck revelando por no mínimo 5 minutos. Se após 5 minutos aparecer somente uma linha (linha de controle) o resultado é positivo, isto é, ≥ 20 ppb.
6. O Aflacheck é um teste qualitativo que quantifica o somatório das AFB1 + AFB2 + AFG1 + AFG2 + AFM1?
Não. AFM1 é do leite.
9 - CONTAGEM DE AERÓBIOS MESÓFILOS – TÉCNICA DO ESFREGAÇO EM SUPERFÍCIE (SWAB) 
1. Quando aplicar a técnica de esfregaço em superfície ? 
A técnica do esfregaço em superfície ou “ swab “ aplica-se aos alimentos cuja contaminação é predominantemente superficial , como carcaças de bovinos , suínos, aves e peixes. Aplica-se também a análise de superfícies de equipamentos , mesas , utensílios e embalagens. 
2. Qual a função do swab na técnica do esfregaço em superfície ? 
O swab é um instrumento que serve para coletar a amostra, sendo que o mesmo tem que está estéril. 
3. Qual a função do molde na técnica de esfregaço em superfície? 
O molde esterilizado serve para delimitar a área amostrada, por exemplo de 50 a 100 cm^2. 
4. Na aplicação da técnica, que medida pode ser adotada para evitar a contaminação por parte do analista? 
Além das boas práticas de laboratórios, uma medida essencial nessa análise é que a parte manuseada da haste do swab deve ser quebrada devidamente na interna do tubo , fazendo com que a parte restante , ou seja, a parte que o analista teve contato , seja descartada evitando qualquer contaminação. 5. 
Cite uma vantagem e uma desvantagem da técnica. 
Vantagem – Adaptável a uma grande variedade de superfícies, rápida, simples e barata. Desvantagem – Difícil avaliação de áreas amplas ou difíceis de atingir.
10 - CONTAGEM DE AERÓBIOS MESOFILOS – TÉCNICA DA LAVAGEM SUPERFICIAL
 • Qual o condicionante da aplicação da técnica de lavagem superficial? 
São alimentos de contaminação predominantemente superficial , como casca de ovos , grãos, sementes , castanhas , que podem ser mergulhadas em um diligente adequado, podendo ser aplicadas em análise de embalagens também. 
• Qual a função da água platinada 0,1 % na técnica? 
A água platinada funciona como um diluente , um meio de transporte. 
• Cite uma vantagem e uma desvantagem da técnica. 
Vantagem – Fácil de amostrar, não invasiva. Desvantagens – Incapacidade de se detectar a localização da contaminação. 
• Você realizou uma contagem deaeróbios mesofilos em garrafa PET com capacidade de 900 mL . O resultado obtido foi de 2,0 × 10^3 UFC / mL . Qual o número de UFC / embalagem? 
UFC / embalagem = UFC / cm^3 × capacidade da embalagem
 “ “ = 2,0 × 10 ^3 UFC / mL × 900 mL
 “ “ = 1,8 × 10 ^5 UFC / mL 
• Diferencie a técnica da lavagem superficial da técnica de esfregaço em superfície.