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MICROSCOPIA ELETRÔNICA Citologia – aula 7 Kátia F. M. De Resende Universidade Federal de Lavras 2013 No microscópio de luz: Objetiva 100x: LR = K . = 0,612. 0,55 = 0,27µm AN 1,25 Importância do Microscópio Eletrônico Importância do Microscópio Eletrônico Material Tamanho médio Bactéria 1-2 µm Célula animal 10 – 20 µm Célula vegetal 50 µm Núcleo 3-6 µm Ribossomo 0,025µm - 25 nm Membrana 0,01µm - 10 nm Vírus HIV 0,13µm - 130 nm Limite de resolução da objetiva de 100X: 0,27µm (270 nm) - No microscópio de luz: Objetiva 100x: LR = K . = 0,612. 0,55 = 0,27µm AN 1,25 Importância do Microscópio Eletrônico -No microscópio eletrônico: LR = 0,02µm = 2 nm = 0,2 Å 100 vezes menor que o do microscópio de luz - luz visível: 700 e 400nm - UV: <400nm - elétrons: 0,004nm RESOLUÇÃO- menor distância discernível entre dois pontos • Olho nú- 0,1mm • Microscopia de luz- 0,27µm - 270nm • MEV- 10 0A • MET- 1- 2 0A Objetiva Amostra Observador Ocular Objetiva Amostra Condensador Fonte de luz Caminho da luz X Caminho do elétron Microscópio de luz Microscópio eletrônico de varredura Microscópio eletrônico de transmissão Esquema de uma “lente eletrônica” gerada por um solenóide excitado por uma corrente elétrica. Note que a trajetória dos elétrons sofre também uma rotação Elétron primário Elétron secundário Catodoluminescência Transmitidos Retro-espalhados Raio X Espécime e primário e secundário e Retoesp. Raio X Interação elétron/amostra MEV MET Tipos de imagens Preparo de amostras biológicas MEV • Coleta • Fixação • Pós fixação • Desidratação • Secagem ao ponto crítico • Adesão aos stubs e metalizar • Avaliação Preparo de amostras biológicas MEV Preparo de amostras não metálicas para MEV • Amostras não metálicas, mas rigídas como plásticos, minerais, materiais biológicos rígidos(insetos, pólen, madeira etc) • Colar nos stubs e metalizar Preparo de amostras biológicas MET • Coleta • Fixação • Pós-fixação ósmio---contrastação • Desidratação • Embebimento em resina • Resina 30%overnight • Resina 50%/8h • Resina 70% overnight • Resina 100% / 24h • Resina 100%/24-72h à 650 C • Preparo das amostras emblocadas • Cortes ultra-finos • Contrastação--- telinhas • Avaliação Detalhe de uma telinha de cobre com película de plástico e secções. Núcleo da célula Poro nuclear Cloroplasto MITOCÔNDRIA Complexo de Golgi Tricoma glandular Estômato Fotos MEV Pêlo Formiga Superfície da pele Nematoíde Imagem de microscopia de varredura eletrônica (cores adicionadas) de micélio fúngico com as hifas (verde), esporângio (laranja) e esporos (azul), Penicillium sp. (aumento de 1560 x). Células do sangue Foto de microscopia eletrônica de varredura (MEV)- 20.000 X-mostra as células do sangue: eritrócitos (em vermelho), um leucócito linfócito (em amarelo) e plaquetas (em lilás) Vírus HIV atacando leucócito Linfócito Citotóxico atacando uma célula cancerosa. Os linfócitos T citotóxicos são importantes leucócitos que atacam células que se tornam anormais, geralmente tumorais. A presente foto de MEV aumentada 20.000 X- linfócito T citotóxico (amarelo) atacando célula tumoral (vermelho). Histórico Microscopia • 1590- Janssens – Microcopia de luz- 20-30X • Sec. 18/19-M. composto- HOOKe- 300X • 1873-Abbe e Hellmotz- LR • 1924-Broglie elétrons-onda • 1929 –Bush – lentes eletrônicas • 1930-primeiro MET Ardenne, Ruska-Knoll-Berlin • 1939-primeiro MET comercial –Siemens • 1945-1950- desenv,. MET Alemanha, Holanda, França, Inglaterra, EUA, Japão (Pesquisa) • 1965- MEV- pesquisa
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