Harada Moura

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Harada Moura
Conceito
Este é um método de cultura, direcionado para identificar as larvas de nematóides. O Método de Harada e Mori 
também denominado de cultura no papel-filtro em tubo de ensaio, baseia-se na identificação microscópica de larvas 
nematóides que emergem de amostras fecais cultivadas no papel-filtro em tubo de ensaio.
Indicação
É especialmente útil no diagnóstico de infecções humanas pelo Necator americanus, Ancylostoma duaodenale, S. 
stercoratilis e Trichostrongylus orientali.
Amostra
Material fecal não preservado (fezes frescas). Fezes armazenadas sob refrigeração não deverão ser utilizadas.
Técnica
a) Usar luvas durante todas as etapas.
b) Preparar uma fita de papel-filtro de 15 X 1 cm ou 15 X 2 cm, com uma dobradura no meio.
c) Espalhar 0,5 g de fezes no papel-filtro, formando um esgrefaço fecal fino e uniforme, em um dos lados da fita, 
exceto nas áreas de 4 cm distante de ambas as extremidades. Um esfregaço fecal espesso na fita pode resultar em 
decréscimo na média da eclosão.
d) Introduzir a fita de papel-filtro em tudo de ensaio de 18 X 180 mm ou 20 X 200 mm, ou em um tudo cônico de 
centrífuga de 17 X 120 mm de maneira que a água não contate as fezes.
e) Fechar o tubo com rolha de borracha, conservando-o na posição vertical durante 10 a 14 dias, à temperatura de 
250C a 300C. Papel de celofone ou de polietileno, fixado por meio de um anel de borracha, pode substituir a rolha de 
borracha, para prevenir a dessecação.
f) Em caso positivo, retirar a rolha e, em seguida, o papel-filtro.
g) Colocar o tubo em banho de água a 500C durante 15 min (para matar as larvas) e transferir a água para um tubo 
de centrifugação de 15 ml e centrifugar (500 X g/1 min). Decantar e colocar as larvas em uma lâmina e examinar com 
pequeno aumento.
Observações
Os ovos de Necator americanus nas fezes morrem após 24 horas, quando as fezes são armazenadas a 00C. Por essa 
razão, os espécimes fecais que serão examinados por esse método devem ser mantidos , até o momento do exame, à 
temperatura de 100C a 250C, sob condições ótimas de umidade.
Durante o inverno a média de isolamento das larvas é menor que nas outras estações. A dessecação resulta na 
deterioração das culturas. Se o esfregaço ficar imerso na água, mesmo parcialmente, as bactérias e leveduras 
proliferarão no substrato, havendo uma conseqüente deficiência do oxigênio dissolvido; as larvas emergentes são 
mortas e a detecção torna-se impossível.
Quando pequenas quantidades de água são usadas, poucas larvas emergem, em virtude da dessecação e o uso de 
grande quantidade de água favorece a contaminação por causa do contato com as fezes. O volume ótimo é de 4 a 5 ml. 
A temperatura ideal da cultura varia entre 250C e 300C. Os melhores resultados foram obtidos a 280C.
Geralmente as larvas emergem na água ao redor do terceiro dia.
Frequentemente a observação das características morfológicas é dificultada pelo movimento das larvas. Para matar 
as larvas e estudar esse organismos, aquecer levemente ou adicionar uma gota de solução de iodo de lugol ou de 
formaldeído à suspensão colhida. Esse método permite o isolamento de larvas de nematóides parasitos e de vida livre.
Quando o material fecal foi contaminado com terra ou água contendo larvas de vida livre, a diferenciação entre esses 
organismos é realizada pela resistência que as larvas parasitas apresentam às soluções levemente ácidas (adicionar 
0,3 ml de ácido clorídrico concentrado para cada 10 ml de água contendo as larvas, ajustar o volume para obter uma 
diluição final de 1:30 de ácido.) As larvas de vida livre dos nematóides são mortas esta solução ácida, enquanto as 
espécies parasitas permanecem vivas durante 24 horas.
Todo cuidado é necessário para prevenir infecção durante o transporte do líquido e da tira de papel de filtro, uma vez 
que as larvas infectantes podem migrar na tira de papel-filtro, para cima ou para baixo.
Referencia
http://www.uft.edu.br/parasitologia/pt_BR/exames/metodo_hara
da_e_mori/