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Questões Teórico-Prática de Microbiologia 1. A técnica de Técnica de Wirtz-Conklin é utilizada para coloração de esporos bacterianos, qual a necessidade do aquecimento da lamina com o corante verde malaquita para execução da técnica? A parede do esporo constitui uma barreira eficaz contra a entrada e saída de substancias do esporo,mas por sua impermeabilidade, geralmente é refringente e de difícil coloração. A exposição prolongada ao verde malaquita e principalmente o aquecimento, permite a entrada do corante e a coloração do esporo por um verde intenso. 2. Qual a diferença de endósporo e esporo livre? O endósporo corresponde ao esporo no seu início de formação, ainda na célula vegetativa. O processo de formação do esporo, o cromossomo duplica-se e uma das cópias cromossômicas produzidas é isolada do restante da célula e envolta por uma membrana plasmática. Após isso, há a formação de uma grossa parede em torno dessa membrana, constituindo o endósporo (assim chamado porque se forma dentro da célula). A outra porção do conteúdo celular é degradada e a parede é rompida, libertando o esporo. Em ambiente propício, o esporo se reidrata, reconstituindo uma nova bactéria, que passa a reproduzir-se por reprodução binária. 3. Qual a diferença de parede das bactérias gram positivas e gram negativas: Na maioria das bactérias gram-positivas, a parede celular consiste de muitas camadas de peptideoglicano, formando uma estrutura rígida. Além disso, contém ácidos teicóicos, que consistem primariamente de um álcool e fosfato. As paredes celulares das bactérias gram-negativas consistem de uma ou algumas camadas de peptideoglicana e uma membrana externa. A peptideoglicana está ligada a lipoproteínas na membrana externa e está no espaço periplasmático, um espaço entre a membrana externa e a membrana plasmática. As paredes gram-negativas não possuem ácidos teicóicos, mas sim de lipopolissacarídeos (LPS) e fosfolipídios 4. Qual a importância biológica na coloração de Gram? Esta coloração permite distinguir os mais variados tipos de bactérias e que tipo de parede celular elas tem, estas bactérias tem também graus diferentes de virulência. As Gram-negativas, por exemplo, são constituídas por uma endotoxina denominada LPS (lipopolissacarídeo), que é causadora da patogenicidade. Já as Gram-positivas possuem a exotoxina rica em ácido lipoprotéico que confere aderência à bactéria. 5. Cite dois exemplos de bactéria gram + e um de gram -. Gram-negativas: Escherichia coli, Salmonella e Shigella. Gram-positivos: Stafilococcus aureus e Streptococcus pyogenes. 6. Classifique as imagens de acordo com a forma, arranjo(predominante) bacteriano e coloração de gram: esfafilococos gram positivos, dipobacilos, sarcinas. Estreptobacilos, diplobacilos gram negativos. *LEMBRAR: NÃO EXISTEM ESTAFILOBACILOS, O ARRANJO DIFERENCIAL DOS BACILOS É O AGRUPAMENTO EM FORMA DE PALIÇADA. 7. Por que não é usada a coloração de Gram para diferenciação de micobactérias? Porque na coloração de gram eu não tenho a diferenciação de bacilos ácido-álcool resistentes em rosa, que eu consigo visualizar na técnica de Ziehl. Na técnica de gram os BAAR não seriam visualizado ou no máximo fracamente corados. 8. Qual a importância do lugol na coloração de Gram ? O iodo da solução de Lugol forma um complexo insolúvel com o corante primário(cristal de violeta ou azul de metileno), deixando-o com uma coloração mais intensa do que se estivesse livre, e sendo mais difícil de remover das células. 9. Em uma preparação para coloração de gram, um aluno após preparar um esfregaço bacteriano coloriu a lâmina com a fucsina, após o procedimento, lavou com um filete de água, retirou o excesso e aplicou o fixador de lugol. Lavando a lâmina em seguida, foi aplicado álcool 90º, lavando a lamina novamente e retirado o excesso de água com papel filme, após aplicado o corante cristal de violeta. Caso o esfregaço possuísse gram-negativas essas seriam visualizadas em coloração azul(arroxeada) nesse esfregaço? Justifique. Sim, na técnica realizada foi invertido as ordem dos corantes pré-estabelecidos no protocolo da técnica de Gram, dando um resultado falso do esperado. Na coloração correta as gram-negativas deveriam ser evidenciadas em vermelho(cor de rosa). 10. Por que na coloração de Ziehl – Neelsen é necessário aquecer o corante Fucsina Fenicada? Para que a parede ácido micolico(ac. Graxos de cadeia longa encontrados na parede de micobactérias) por reação de calor se desestabilize e o corante consiga entrar. Para a coloração de Ziehl pode-se usar a fucsina fenicada, que é uma fucsina normal com adição de fenóis que facilitam a entrada na parede. 11. Qual a importância dos ácidos micólicos para as micobactérias? É um importante fator de patogenicidade para as micobactérias. Responsáveis por aumentar a resistência aumentada do organismo ao dano e à desidratação por produtos químicos, e impedem a atividade eficaz de antibióticos hidrófobos, além disso, os ácidos micólicos permitem que a bactéria cresça prontamente para dentro de macrófagos, escondendo-se eficazmente do sistema imunológico do hospedeiro. *LEMBRAR QUE: apesar de ter mico no nome os ácidos micólicos não tem qualquer relação com fungos. 12. Qual o objetivo da técnica Fontana de Tribondeau? Técnica para visualização de bactérias espiraladas, por uma Impregnação pelo nitrato de prata. Devido a sua parede delgada, os espiralados não são corados em gram, ou corados fracamente, por isso é utilizada a técnica especial de Fontana, para a deposição do nitrato de prata na parede dessa bactérias, tornando-as assim evidente na leitura microscopia. 13. Qual a diferença de microbiota residente e transitória? A microbiota residente é permanente no indivíduo, podendo ter sido ou não adquirida com o passar da idade, em condições de imunocompetência não costumam apresentar perigos ao seu hospedeiro, são fortemente aderidas e competem com a microbiota transitória, essa por sua vez entra em contato com o indíviduo, normalmente várias vezes ao dia, é fracamente aderida, e pode ser patógena, sobretudo em indivíduos imunosuprimidos, ou por outros fatores (corte na superfície da pele), que a ponham em contato com a circulação. 14. O ácido micólico é um componente encontrado associado ao peptídeoglicano de qual das seguintes bactérias: A) Micobacterias; B) Estafilococos; C) Estreptococos; D) Escherichia coli; E) Salmonella; 15. São características das Micobactérias, exceto: a) Bacilos aeróbios estritos; b) São esporulados e encapsulados; c) Ligeiramente curvos ou retos e imóveis; d) Resiste a ação de ácido e de álcool; e) Parasitas intracelulares facultativos, pois sobrevive nos macrófagos; 16. Qual a prova bioquímica é possível de ser usada para diferenciar Staphylococcus de Streptococcus ? A. Prova da Coagulase. B. Prova de Gram. C. Prova da Catalase. D. Prova de Ziehl Neilsen. Comentário: Enzima que degrada água oxigenada(peróxido de hidrogênio). Aquelas bactérias que produzem catalase vão degradar o peróxido, formando água e oxigênio livre, vou observar essa reação com a formação de bolhas e gases, ou seja, ela é catalase positiva. 17) Em relação a prova bioquímica da coagulase, marque a alternativa falsa. A. Presença de coagulase positiva é um indicador de maior patogenicidade. B. S. Aureus produz coagulase. C. A coagulase provoca coagulação do plasma sanguíneo, por ativar protombrina, originando trombina. A trombina transforma o fibrinogênio em fibrina, criando coágulos de fibrina que irá proteger contra células de defesa. D. S. saprophyticus e S. epidermides são frequentemente referidos como estafilococos coagulase-positivos. D)Falso, um dos fatores do S. Aureus ser mais patogênico é justamente por ser o principal a apresentar coagulase. 18) Cite 2 exemplos de métodos de controle microbiano por calor úmido sem pressão: Pasteurização e fervura. 19) Sobreos métodos de controle microbiano assinale V ou F: (F) A autoclave é um método de calor seco com pressão onde o material é submetido de 15 a 20 min à 121ºC em 1 atm. (V) A incineração causa esterilização por queima real do material contaminado. (F) A radiação UV lesa em nível de DNA os micro-organismos, tendo alto poder de penetração. (V) A água em ebulição faz desinfecção em 15 minutos a 100ºC. (V) A filtração faz esterilização por retenção mecânica dos micro-organismos em filtros especiais. (F) São métodos eficazes para eliminação de esporos: Autoclave, radiação ionizante(raio-x), incineração e pasteurização. 20) Em relação aos fungos, responda a alternativa correta: A) Fungos podem existir na forma de levedura e outros na forma de hifa(filamentosos), quando um fungo pode ter as duas características é chamado de transmorfico. B) Leveduras são fungos pluricelulares. C) A massa ou conjunto de hifas que formam um corpo ou colônia de um bolor é chamada de Micélio. D) As leveduras que formam os conídios são os chamados conidióforos. 20) Qual a importância do teste de Snyder para o estudo da microbiologia da doença cárie ? Justifique. Utilizado para a avaliação da atividade acidogênica e acidúrica das bactérias orais. Tendo então relação com o processo de estabelecimento da doença cárie. Como é realizado: Meio com glicose e indicador de pH (BROMOCRESOL - diferenciador) as bactérias produzem ácido a partir da glicose, esse ácido vai baixar o pH e mudar a cor do indicador do pH que era verde para amarelo, isso ocorre se a bactéria tem atividade cariogênica, se não tem, o tubo continua verde, pois tem atividade nula. VERDE: SEM CÁRIE pH =5 (sem estar semeado) Atividade Cariogênica Insuficiente ou Ausente AMARELO FORMA CÁRIE Vira ácido (pH menor que 5) EM: 24h: atividade ACENTUADA 48h: atividade MODERADA 72h: atividade PEQUENA Maior quantidade de Lactobacillus e Streptococcus
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