Questionário para 1ª prova de Exames Bacteriológicos

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Questionário para 1ª prova de Exames Bacteriológicos – Assunto de Eulália 
Qual o princípio bioquímico da prova da lisina descarboxilase, ornitina descarboxilase e arginina dehidrolase? Explique.
Muitas espécies de bactérias possuem enzimas que podem descarboxilar aminoácidos específicos no meio da prova, que contém glicose, aminoácidos e indicador de pH. Como é uma prova de 2 etapas: no início a prova é vermelha, mas primeiro é necessário que a bactéria utilize a glicose e isso acidificará o meio, mudando a cor do vermelho para amarelo. Com essa queda de pH a descarboxilase irá atuar nos aminoácidos contidos no meio, liberando compostos de caráter alcalino (lisina – cadaverina ; ornitina – putrescina; arginina – citrulina. O meio que estava amarelo voltará a ser vermelho por conta da alcalinização. Se a bactéria não possuir a enzima, o meio continuará amarelo. Para a ação enzimática é necessário condições anaeróbias, então usa-se parafina ou óleo mineral para bloquear a passagem de O2.
Qual o princípio bioquímico da prova do gluconato? Explique.
A glicose nesse meio não irá chegar até ácido pirúvico e sim a fosfogluconato que será reduzido a gluconato, que é um sal. Ele não tem caráter redutor com relação ao revelador que é o reativo de Benedict. O gluconato é então transformado em 2-cetoglutarato que reduz o reativo de Benedict a hidróxido cúprico até óxido cuproso onde este possui cor amarelo/laranja indicando a positividade da reação.
O que se espera da prova de redução de nitratos? Qual o princípio bioquímico para identificação de microorganismos redutores de nitratos a nitritos?
Identifica microorganismos que possuem a enzima nitrato-redutase que reduz nitrato a nitrito. A redução é mediada por esta enzima e o nitrito reage com os reveladores alfa-naftil e ácido sulfanílico resultando numa coloração avermelhada. Caso não fique vermelho, para dar veracidade ao teste, é necessária a adição de pó de zinco, que é um redutor de nitrato, virando a cor, o teste anterior será obrigatoriamente negativo.
O que caracteriza um microorganismo desnitrificante?
É um microorganismo capaz de reduzir nitrito e/ou nitratos a nitrogênio gasoso. Assim, na prova em caldo nitrito/nitrato os gases são facilmente observados.
Qual o fundamento bioquímico da prova de Voges Proskauer e em que ela difere da prova do vermelho de metila?
Na prova do VP a glicose vai ser quebrada e originar produtos diacetilados que se combinarão com o alfa-naftol, sob ação da creatina e dará origem ao butilenoglicol. Ou seja, o acido pirúvico será metabolizado e vai gerar acetoína que é convertida, na presença de O2 em diacetila alfa-naftol produzindo complexo de cor vermelha. Os principais produtos dessa prova são álcoois e portanto não há queda de pH. Na prova do VM, a positividade do teste se dá através também de cor vermelha, porém por causa de uma acidificação do meio devido a utilização de glicose pela via dos ácidos mistos.
Qual o principio bioquímico da prova do ONPG e como ela se processa na prática?
Consiste na clivagem do ONPG pela enzima beta-galactosidase, fornecendo a galactose e o o-nitrofenol que possui coloração amarela. Na pratica é utilizada para identificar fermentadores de lactose tardios.
O que caracteriza um microorganismo fermentador tardio de lactose?
São microorganismos que possuem atividade de beta-galactosidase, porém baixa atividade de beta-galactosideo-permease, que é responsável pelo transporte de lactose pela parede celular.
O que é nitrato-redutase e como se processa a pesquisa desta enzima nos meios de cultura?
É a enzima responsável por reduzir nitrato a nitrito. Sua detecção se dá através da ligação do nitrito com reveladores, produzindo uma cor vermelha. Caso não apareça essa coloração, deve-se adicionar pó de zinco ao meio. Se após essa adição ocorrer a mudança de cor o teste é negativo, pois a bactéria não possui a enzima e se não ocorrer nenhuma mudança o teste é positivo pois o nitrato já foi reduzido a outros compostos além do nitrito.
Explique a prova bioquímica de oxidação-fermentação (Meio de Hugh e Leifson) para identificação microbiana. Qual é a sua importância?
Hugh e Leifson prepararam um meio para idenfiticar bactérias fermentadoras de carbono modificando o TSI, mudando a concentração de 2:1 peptona-glicose para 1:5. Assim bactérias que oxidam e produzem ácidos fracos sejam visualizados através da queda de pH. Ocorre então a utilização da glicose, queda de pH e essa queda seria porque as peptonas não estariam em concentração suficiente para neutralizar ou mesmo alcalinizar o meio. Porém para afirmar que se trata de um fermentador deve-se vedar a passagem de O2 com óleo mineral ou parafina. O indicador é o azul de bromotimol e a cor fica amarela devido ao pH ácido.
Idealize um protocolo de identificação microbiana para uma urocultura.
Com uma alça calibrada faz-se semeio (em rede) em agar sangue/cled/EMB, realiza-se o GRAM e posteriormente segue-se com as provas bioquímicas cabíveis e antibiograma. A contagem de colônias varia com o GRAM e é útil para caracterizar infecção.
Idealize um protocolo de identificação microbiana para uma coprocultura.
Coleta -> enriquecimento em tetrationato -> isolamento (HE, SS, EMB) -> GRAM -> Provas bioquímicas (TSI, ureia, citrato, indol, motilidade etc) -> Sorologia para salmonela, shigella e coli -> antibiograma
Qual o princípio bioquímico da prova da uréase e como ela se processa na prática?
Utilização da ureia como substrato. A ureia é posta no meio de cultura e vai reagir com a uréase formando agua, CO2 e amônia instável. Para manter a estabilidade dá origem ao carbonato de amônia. O vermelho de fenol é o indicador de ph e vai gerar coloração vermelha indicando presença do carbonato de amônia, que é alcalino.
O que é indol e como se processa a pesquisa deste composto no meio de cultura?
O indol é um produto do metabolismo do triptofano onde este por ação da triptofanase vai formar o acido indol-piruvico que é clivado a indol e acido pirúvico. O indol reage com o revelador (Kovac), no meio SIM ou MIO, formando um anel vermelho se positivo.
Porque alguns microorganismos não fermentadores não se desenvolvem em ágar Macconkey?
Porque nesse meio há presença de 2 inibidores (sais biliares e cristal violeta) que inibe bactérias exigentes/fastidiosas.
O que é citocromo-oxidase e porque alguns microorganismos classificados como oxidantes de glicose não reagem positivamente com o cloridrato de para-fenilenodiamina?
É uma enzima responsável pela respiração aeróbia. A citocromo-oxidase entra na cadeia de transporte de elétrons fazendo este transporte no citocromo e é encarregada da reação do O2 com o Fe. O poder de oxirredução caracteriza se a bactéria possui ou não essa enzima. Quando coloca no meio o parafenilenodiamino ela é capaz de oxidar produzindo cor azul (azul de endofenol). Alguns não reagem, pois não apresentam o citocromo A1 que é responsável pela oxidação do revelador.
O que caracteriza o teste de motilidade para um microorganismo?
Avalia a presença de flagelos funcionais. A cultura é feita num meio semi-sólido e pode-se observar se positivo ou negativo pela turbidez do meio ou pela adição de sal tetrazolio que colore o meio de rosa onde houve motilidade.
O que é indol? 	Qual sua importância na identificação dos grupos de bactérias pertencentes à família Enterobacteriacea?
É importante, pois as enterobacteriaceas são fermentadoras de glicose e o triptofano é um aminoácido decorrente do seu metabolismo. O indol é um dos produtos do metabolismo do triptofano.
Qual a importância da prova bioquímica da fenilalanina desaminase?
Essa enzima provoca uma desaminação da fenilalanina havendo formação de um composto ácido (ácido fenilpirúvico). Diferencia Proteus, Providencia e Morganella.
O que caracteriza a produção de H2S por alguns microorganismos?
Capacidade de liberar H2S a partir de compostos que contem enxofre como o tiossulfato de sódio. Um metal serve de revelador e vaiprecipitar o H2S formando um precipitado enegrecido.
Qual o princípio bioquímico de utilização do citrato como fonte de carbono? 
Determina a capacidade de uma bactéria de utilizar o citrato como fonte de carbono. Utiliza-se o azul de bromotimol como indicador de pH e quando o azul é positivo. O consumo do citrato induz clivagem do fosfato de amônia, alcalinizando o meio.
Quais características de um bacilo não fermentador?
Não fermenta glicose, citocromo-oxidase +, e não cresce em Macconkey, no geral são fastidiosos.
Quais principais características das enterobacteriaceas?
Utilizam a via EMB, reduzem nitrato a nitrito e são citocromo-oxidase negativo, catalase positiva, gram negativos, não esporulados, fermentadores de glicose.
Qual a diferença entre meio de fermentação e Hugh e Leifson?
Menor concentração de peptona e de ágar (meio semi-sólido)