Quantificação Microbiana

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Quantificação Microbiana
Diluição:
- Preparar os materiais: placas, meio de cultura, 4 tubos, mesa, caneta, pipeta automática, ponteiras, agitador de tubos.
- Com a caneta enumerar os tubos de -2 a -5. Acrescentar a cada tubo 0,9ml de salina auto clavada, com exceção do tubo -2 que terá q ter 9,9 ml.
- Levar o meio de cultura contendo as bactérias concentradas ate o agitador, para homogeneizar a bactérias na cultura.
- Com uma pipeta pegar 100 microlitros da cultura e transferi-la para o tubo -2 contendo 9,9 ml de salina, e após a transferência homogeneizá-la no agitador.
- Pegar o tubo -2 e retirar dele uma alíquota de 100 microlitros e transferir para o tubo -3, em seguida agitar no agitador.
- Do mesmo modo retirar do tubo -3 a quantidade de 100 microlitros e transferi-la para o tubo -4 e novamente agitar. 
- E por fim retirar do tubo -4 mais 100 microlitros e transferir ao tubo -5, e agitar. 
- Com o final da diluição obteremos uma solução contendo bactérias diluída em 10⁻⁵.
Montagem da placa:
- Com a chama ligada, abrir as laminas estéreis e identifica-las, com nome e as diluições feitas. 
- Colocar em cada placa 100 microlitros (com a pipeta automática) de cada diluição, assim serão feitas 4 placas.
- Após a adição das diluições, colocar 20 ml de meio de cultura em cada uma.
- Após os meios serem auto clavados eles são retirados e levados para serem colocados nas placas. 20 ml por placa. Após a adição fazer movimento de 8 para misturar as bactérias no meio
* Essa técnica serve para evidenciar células viáveis, ou seja, que estão vivas e podem formar colônias (UFC/ml). 
 
 
Contagem das placas:
-Eram escolhidas as placas q possuíam de 30 ate 300 colônias, pois é uma faixa segura para contagem, evitando o erro.
- Observar se as colônias estão dispostas homogeneamente pela placa e em seguida traçar 4 quadrantes e contar as colônias.
-Após a contagem multiplicar o numero de colônias contadas por 4.
-Após se obter o resultado das colônias esse numero terá de ser multiplicado pelo fator de diluição .
-Com a obtenção deste ultimo resultado multiplica-lo 
Equação:
X x FATOR DE DILUIÇAO = UFC/ML X-NUMERO DE COLONIAS CONTADAS, FD- Fator de diluição da placa usada